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夏南松
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1
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供职机构:
上海交通大学医学院生物化学与分子细胞生物学系
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相关领域:
生物学
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李艳
上海交通大学医学院生物化学与分...
左勇
上海交通大学医学院生物化学与分...
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徐州医学院学...
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2015
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Kif18A的SUMO化修饰及其调控机制
2015年
目的:探讨Kif18A的 SUMO化修饰及其调控机制。方法在 HEK293T 细胞中共转染Flag-Kif18A、HA -SUMO1或 His -SUMO1质粒,免疫沉淀富集Flag -Kif18A,免疫印迹检测HA -SUMO;用 TALON 树脂富集His-SUMO1蛋白,免疫印迹检测Flag -Kif18A考察Kif18A的 SUMO化水平。利用 SUMOsp 2.0软件预测Kif18A可能发生 SUMO化的潜在位点,将 Flag-Kif18A 质粒中的相应位点上的编码序列由Lys突变成 Arg,在HEK293T 细胞中表达突变体后再检测Kif18A的SUMO化水平的变化来确定Kif18A的 SUMO化位点。通过在HEK293T 细胞中共染转Flag -Kif18A、HA -SUMO1以及 SENP1野生型(WT)或SENP1酶活位点突变型(Mut)质粒,再采用免疫沉淀和免疫印迹检测Kif18A的SUMO化水平,来证明 SENP1是 Kif18A 的去 SUMO化蛋白酶。最后,用Nocodazole处理 HeLa 细胞,使其同步化在G2/M阶段,再考察G2/M期HeLa细胞中Kif18A的SUMO化水平。结果Kif18A 能被SUMO1或者 SUMO2修饰,K47和K148是Kif18A发生SUMO化的两个主要位点,SENP1催化Kif18A的去 SUMO化修饰。 HeLa细胞同步化在 G2/M期后,Kif18A的 SUMO化水平显著下降。结论Kif18A能发生SUMO化修饰,且其SUMO化受到细胞有丝分裂进程的调控。
李艳
夏南松
左勇
关键词:
SUMO化修饰
细胞周期
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