赵鑫
- 作品数：20 被引量：11H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院军事兽医研究所更多>>
- 发文基金：吉林省科技发展计划基金吉林省重大科技攻关项目国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- 重组人IFNα-2b融合表达及纯化工艺研究
- 2016年
- 为了利用多分子伴侣表达载体在大肠埃希氏菌中融合表达人干扰素（IFNα）-2b，并进行IFNα-2b纯化工艺研究，试验采用人工设计并合成Smt3-IFN（x-2b克隆至自行构建的P32-TrxA载体中，将重组表达质粒P32-TrxA—Smt3-IFNα-2b转化至大肠埃希氏菌（E．coil）BL21（DE3），经IPTG诱导表达、SDS—PAGE分析，在此基础上利用金属螯合层析、SUMO蛋白酶酶切、阴离子交换层析以及凝胶层析建立了IFNot-2b的纯化工艺。结果表明：重组质粒经酶切鉴定及测序证明构建正确；融合蛋白分子质量约为40ku，主要以可溶形式表达，表达量占菌体总蛋白的30％以上；纯化的IFNα-2b分子质量约为17ku，蛋白纯度达到95％以上，利用细胞病变抑制法测得干扰素的效价为1．0×10^8IU／mg。说明成功在大肠埃希氏菌中表达并经过简易工艺纯化了重组蛋白IFNα-2b。
- 赵鑫张国利付玉和李泽鸿张培培李爽田园刘雨玲吴广谋岳玉环
- 关键词：IFNΑ-2B纯化层析
- 抗B型肉毒毒素酶活性的人源单链抗体2F-scFv及其应用
- 本发明提供了抗B型肉毒毒素酶活性的人源单链抗体2F‑scFv，它是利用人工合成的重组蛋白BontB，及筛选抗B型肉毒毒素酶活性的人源单链抗体的底物GFP‑HIS6‑SNAP25（62）‑VAMP（57）‑C，人源化抗B型...
- 张国利田园刘雪于佳李玉洁刘雨玲岳玉环吴广谋李爽史飞赵鑫徐艳玲张培培
- 文献传递
- 抗B型肉毒毒素酶活性的人源单链抗体4C-scFv及其应用
- 本发明提供了抗B型肉毒毒素酶活性的人源单链抗体4C-scFv，它是利用人工合成的重组蛋白BontB，及筛选抗B型肉毒毒素酶活性的人源单链抗体4C-scFv的底物GFP-HIS6-SNAP25（62）-VAMP（57）-C...
- 张国利田园刘雪于佳李玉洁刘雨玲岳玉环吴广谋李爽史飞赵鑫徐艳玲张培培
- 重组金黄葡萄球菌肠毒素B及热休克蛋白65融合蛋白的原核表达及其在小鼠体内的体液免疫效果
- 2017年
- 目的原核表达重组金黄葡萄球菌肠毒素B(recombinant Staphylococcus aureus enterotoxin B,r SEB)及热休克蛋白65(heat shock protein 65,HSP65)融合蛋白r SEB-HSP65,并探讨其在小鼠体内的体液免疫效果。方法采用分子生物学方法将修改过TCR Vβ结合区的r SEB基因与HSP65基因融合,构建重组表达质粒p ET-28a-r SEB-HSP65,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,经铜柱亲和层析纯化。将纯化蛋白经小鼠背部皮下注射,分别于第0、14、28天各免疫1次,分别于第14、28、42 d经小鼠尾静脉采血,分离血清,间接ELISA法检测小鼠血清中抗-SEB的Ig G水平。结果重组表达质粒p ET-28a-r SEB-HSP65经双酶切及PCR鉴定,证明构建正确。表达的重组蛋白r SEB-HSP65的相对分子质量约85 000,主要以包涵体形式表达,表达量约占全菌总蛋白的40.81%,纯化蛋白纯度约为90%。各组免疫小鼠均可产生较高滴度抗体,且在第14、28及42天大部分含铝佐剂疫苗组的效价显著高于相同剂量的无铝佐剂疫苗组(P<0.05),第42天时无铝佐剂低剂量疫苗组与含铝佐剂低剂疫苗量组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论成功在E.coli BL21(DE3)中表达了重组蛋白r SEB-HSP65,且可诱导小鼠产生较高的抗体水平。
- 侯天全张国利滕利荣岳玉环吴广谋田园付玉禾赵鑫张培培
- 关键词：热休克蛋白65原核细胞体液免疫
- 用于肉毒毒素活性测定的特异性绿色荧光融合蛋白的制备
- 2017年
- 目的制备含有7种血清型肉毒毒素切割位点(SNAP25-VAMP)的特异性绿色荧光融合蛋白,在E.coli中诱导表达,纯化后用于肉毒毒素活性测定。方法根据SNARE蛋白复合物中SNAPE25和VAMP基因序列及各血清型肉毒毒素(Bo NTs)的切割位点,设计合成含有SNAREs中突触小体(SNAP25)和突触小泡膜蛋白(VAMP)的Bam HⅠ-HIS6-SNAP62-Eco RⅠ-VAMP57C-TAA-HindⅢ(以下简称为SV)基因,连接至p ET-28a-GFP载体上,构建重组质粒p ET-28a-GFP-SV,转化感受态E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达后,经DEAE阴离子交换层析、Cu2+金属螯合层析、Q阴离子交换层析3步纯化,BCA法测定纯化产物的蛋白浓度,ELISA法检测B型肉毒毒素轻链蛋白(Bo NT/BL)活性。结果构建的质粒p ET-28a-GFP-SV经双酶切及测序鉴定证明构建正确,表达的GFP-SV融合蛋白相对分子量约40 000,主要以可溶形式存在,蛋白浓度为18.4μg/μl,纯度可达70%以上。利用该融合蛋白的荧光强弱变化可测定Bo NT/BL活性大小,同时也可测定其抗体中和活性大小。结论制备的含有SV的特异性绿色荧光融合蛋白在E.coli中获得了高效表达,为后续各型肉毒毒素活性检测及抗体中和毒素活性检测奠定了基础。
- 吉元刚张国利李泽鸿岳玉环吴广谋田园刘雨玲李玉洁赵鑫付玉和王冬冬张培培侯天全徐艳玲马洪园
- 关键词：绿色荧光蛋白血清型
- 产气荚膜梭菌α毒素人源化单链抗体7D
- 本发明公开了产气荚膜梭菌α毒素人源化单链抗体7D，它是从噬菌体抗体库Source bioscience筛选出来的，是全人源抗产气荚膜梭菌α毒素抗体，既可以实现中和毒素的治疗作用，同时克服了异源性抗体的多种副作用，免除了异...
- 张国利于佳田园朱进刘雨玲岳玉环吴广谋徐艳玲史飞赵鑫
- 文献传递
- 抗B型肉毒毒素酶活性的人源单链抗体3A-scFv及其应用
- 本发明提供了抗B型肉毒毒素酶活性的人源单链抗体3A‑scFv，它是利用人工合成的重组蛋白BontB，及筛选抗B型肉毒毒素酶活性的人源单链抗体的底物GFP‑HIS6‑SNAP25（62）‑VAMP（57）‑C，人源化抗B型...
- 张国利田园刘雪于佳李玉洁刘雨玲岳玉环吴广谋李爽史飞赵鑫徐艳玲张培培
- 文献传递
- A型产气荚膜梭菌α毒素疫苗抗原rCPA-HSP65的原核表达及其纯化
- 2016年
- 目的原核表达A型产气荚膜梭菌α毒素疫苗抗原rCPA-HSP65,并进行纯化。方法以CPA全基因为模板,PCR扩增rCPA基因,插入表达质粒p ET-28a(+)-HSP65,构建重组表达质粒p ET-28a-rCPA-HSP65,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物进行12%SDS-PAGE分析;优化表达工艺进行高密度发酵,发酵产物经DEAE阴离子柱上复性后,再经金属螯合层析纯化。结果重组表达质粒p ET-28a-rCPA-HSP65经双酶切及测序鉴定证明构建正确,表达的重组蛋白相对分子质量约90 000,主要以可溶性形式为主,表达量占菌体总蛋白的30.17%。利用TB培养基,IPTG 34℃诱导5 h的表达产物经纯化后,纯度约达95%,蛋白收率为4.5 mg/g湿菌。结论已成功表达并纯化了A型产气荚膜梭菌α毒素疫苗抗原rCPA-HSP65,为后期疫苗生物学活性的研究奠定了基础。
- 王冬冬张国利岳玉环吴广谋田园吉元刚徐艳玲张培培侯天全赵鑫付玉和
- 关键词：原核细胞高密度发酵
- 抗B型肉毒毒素酶活性的人源单链抗体3A-scFv及其应用
- 本发明提供了抗B型肉毒毒素酶活性的人源单链抗体3A-scFv，它是利用人工合成的重组蛋白BontB，及筛选抗B型肉毒毒素酶活性的人源单链抗体的底物GFP-HIS6-SNAP25（62）-VAMP（57）-C，人源化抗B型...
- 张国利田园刘雪于佳李玉洁刘雨玲岳玉环吴广谋李爽史飞赵鑫徐艳玲张培培
- 犬α干扰素真核表达条件优化纯化及活性研究被引量：2
- 2016年
- 为了对高效表达犬α干扰素的毕赤酵母重组菌株进行表达条件的优化,对表达后的目的蛋白进行纯化及活性研究,研究通过单因素试验方法对影响犬α干扰素的真核表达摇瓶培养条件进行了优化,利用Phenyl Sphareose High Performance疏水层析介质,Q Sepharose High performance强阴离子交换层析介质对表达后目的蛋白进行纯化,期间采用Sephadex TM G-25 Fine介质脱盐,采用MDCK-VSV微量病变抑制法对纯化后蛋白的活性进行检测。结果表明:得出最佳的诱导表达条件为诱导温度28℃,诱导时间72 h,诱导p H值6.0,诱导甲醇浓度1.0%;优化后目的蛋白表达量达到0.18 mg/m L,比优化前提高了54%;纯化后获得纯度达90%以上的目的蛋白,测得目的蛋白的比活为1.08×108U/mg。说明摇瓶优化可显著提高目的蛋白的表达量,毕赤酵母重组菌株能够获得较高具有较高活性的目的蛋白,可用于犬α干扰素的大规模生产及临床应用。
- 付玉和岳玉环李泽鸿张国利田园谭成成赵鑫徐艳玲张培培侯天全
- 关键词：毕赤酵母蛋白纯化活性检测
