王晓华
- 作品数：30 被引量：120H指数：6
- 供职机构：广州医学院更多>>
- 发文基金：广州市科技计划项目甘肃省自然科学基金广东省中医药管理局基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 几种固定化苯丙氨酸解氨酶方法的比较被引量：6
- 2000年
- 目的 :对不同方法固定化苯丙氨酸解氨酶 (PAL)的偶联率或包被率以及固定化对PAL活性和稳定性的影响进行比较 ,以期得到较为方便、有效的固定化PAL。方法 :(1)采用不同T∶C比例的聚丙烯酰胺凝胶 (PAG)包埋PAL ;(2 )分别用戊二醛和碘化 1 [环己基 3 (3 二甲氨丙基 ) ]碳二亚胺 (CDC)将PAL固定于Bio GelP 30 0 ;(3)分别用超声法、脱水再加水法、复乳法将PAL包被于三种脂类组成不同的质脂体 ;(4)对诱变选育出的含PAL活性酵母细胞进行丙酮处理。结论 :(1)包埋法采用T∶C比为 8∶30时固定化酶活性明显高于T∶C比为 8∶19,两者活性保留率分别为 50 .6 %和 17.1% ;(2 )载体偶联法以戊二醛将PAL固定于Bio GelP30 0优于用DCD固定化的酶 ,两者活性保留率分别为 2 7.2 %和 13.9% ;(3)质脂体包被中以脱水再加水法对酶活性影响较小 ,脂类组成以磷脂酰胆碱∶胆固醇∶磷脂酰丝氨酸比值 7∶2∶1最好 ;(4)固定化PAL活性酵母细胞能较好地抵抗人工肠液中胰蛋白酶的水解作用 。
- 王晓华苏海翔
- 关键词：固定化苯丙氨酸解氨酶酶活性
- 重组生长激素释放激素GHRH的纯化及活性测定被引量：2
- 2004年
- 目的用基因工程的方法在大肠杆菌中诱导表达重组生长激素释放激素(GHRH),检测其生物学活性。方法将重组表达质粒pET-28a /L-ansB-GHRH,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导融合蛋白表达。经裂解细胞、洗涤、乙醇沉淀、酸水解、SP-Sephadex C-25和Sephadex G25柱层析等方法纯化GHRH。用人生长激素放免试剂盒检测GHRH多肽的活性。结果SDS-PAGE分析显示重组表达质粒在大肠杆菌中成功地表达了融合蛋白,它以不溶性的包涵体形式存在,占菌体总蛋白的30%左右。经抽提、酸水解、层析等方法表明纯化倍数达147倍,多肽收率为0.68%。通过电喷雾质谱测得多肽的相对分子质量为5235.25,与理论计算值相吻合。多肽的纯度经SDS-PAGE测定为单一峰。GHRH三组刺激实验组与空白对照组相比之间差异显著(P<0.01),且随着剂量增加,差异明显增加。结论体外重组GHRH多肽具有较高的生物学活性。
- 王晓华张娜张娟辉邓虹珠
- 关键词：GHRH纯化活性测定融合蛋白包涵体
- 先天愚型患者红细胞Cu—Zn SOD活性的变化
- 1991年
- 本文报告8例先天愚型红细胞Cu—Zn SOD活性(以正常儿童和非先天愚智能发育不全患儿为对照)的测定结果。证明先天愚型患儿SOD活性为正常儿童的1.7倍(p<0.01),是非先天愚智能发育不全患儿的2.1倍(p<0.001)。
- 王晓华苏海翔郭光兰徐仲勤武秀英张兰芬
- 关键词：先天愚型染色体病超氧化物歧化酶
- 学龄前儿童钙锌镁铁铜含量的分析探讨
- 1995年
- 学龄前儿童正处于生长发育的关键时期,体内某些营养元素的缺乏可能对幼儿体力、智力的发育带来一定的影响,我们对兰州市兰西铁路分局幼儿园347例2～7岁小儿头发中钙锌镁铁铜元素的含量进行了测定,探讨学龄前儿童体内上述元素的营养状况以及与幼儿生长发育的关系。 1 对象和方法 1.1 对象 兰州市兰西铁路分局幼儿园2～7岁小儿347例,全部为健康儿童,男153例,女194例。根据我国九城市标准年龄身高、胸围、体重标准,将347例儿童分为身高、胸围、体重达标组291例,未达标组56例。
- 许倩王晓华
- 关键词：学龄前儿童钙锌镁毛发铁
- 全文增补中
- 苯丙氨酸解氨酶脂质体的制备及其抗白血病细胞增殖作用的初探被引量：6
- 2003年
- 目的 探讨苯丙氨酸解氨酶 (PAL)脂质体对小鼠白血病L12 10 细胞和人白血病K562 细胞生长的抑制作用。方法 采用改良的逆相蒸发法制备出PAL脂质体 ,应用MTT还原法分别检测PAL脂质体和游离的PAL对L12 10 和K562 细胞增殖的作用。结果 在酶活性相同条件下 ,PAL脂质体比游离PAL有较强的抑制细胞增殖作用 ,对K562 细胞作用 4 8h ,IC50 分别为 0 .90 5U/ml和 1.14 0U/ml,对L12 10 细胞作用 4 8h ,IC50 分别为 0 .95 8U/ml和 1.5 13U/ml。结论 PAL脂质体能抑制L12 10 和K562 白血病细胞增殖 ,并呈时间和剂量依赖关系 (P <0 .0 1)。
- 王晓华张冬云严慧敏
- 关键词：白血病细胞增殖苯丙氨酸解氨酶脂质体L1210细胞K562细胞
- 反义核酸抑制B16黑色素瘤细胞tyr基因的表达
- 2005年
- 目的:用反义核酸技术抑制小鼠B16黑色素瘤细胞酪氨酸酶基因(tyr)的表达。方法:构建tyr反义重组体pcDNA3.1(-)-tyr,用脂质体法导入B16细胞,用酪氨酸酶活性及黑色素含量测定,多巴染色及透射电镜等检测由反义重组体pcDNA3.1(-)-tyr转录产生的tyr反义核酸对B16细胞tyr表达的抑制情况。结果:成功构建了反义重组体pcDNA3.1(-)-tyr,转染了反义重组体的B16细胞其酪氨酸酶活性为0.0498±0.0036,显著低于对未转染组B16细胞的0.0916±0.0132(P<0.01);转染空质粒pcDNA3.1(-)及真核表达重组体pcDNA3.1(+)-tyr组B16细胞的氨酸酶活性分别为0.1015±0.0166和0.0948±0.0096,两者同对照组相比均无显著差异(P>0.05)。多巴染色及电镜观察结果表明转染了反义重组体的B16细胞其黑色素颗粒的含量明显低于对照组。结论:反义核酸可以显著抑制B16黑色素瘤细胞tyr的表达。
- 吉琼梅朱振宇王晓华张东方张海涛李秀英马涧泉
- 关键词：核苷酸反义黑色素瘤基因
- TNF-α诱导小鼠B16黑色素瘤细胞凋亡及其对小鼠B16细胞移植瘤生长的抑制作用被引量：2
- 2004年
- 目的:探讨TNF-α对小鼠B16黑色素瘤(MM)细胞凋亡的诱导及其对小鼠B16移植瘤生长的抑制作用。方法:用不同浓度的TNF-α直接作用于培养的小鼠B16黑色素瘤细胞,36h后,采用流式细胞仪(FCM)及原位末端标记法(TUNEL法)检测B16细胞的凋亡率。动物实验观察TNF-α小量瘤体内注射对小鼠B16移植瘤生长的抑制作用。结果:在1000、3000、5000及10000U/mLTNF-α作用下,B16细胞的凋亡指数均明显高于空白对照组(P<0.01),随着TNF-α浓度增加,B16凋亡细胞数呈增加趋势。动物实验结果显示,TNF-α治疗3周后,治疗组荷瘤小鼠MM移植瘤的体积和重量明显低于对照组(P<0.01)。结论:TNF-α能够诱导小鼠B16黑色素瘤细胞发生凋亡,且小剂量TNF-α瘤体内注射能显著抑制小鼠移植性MM的生长。
- 吉琼梅朱振宇王晓华李秀英李民友冯哲玲马涧泉
- 关键词：TNF-Α黑色素瘤细胞细胞凋亡恶性黑色素瘤
- 重组人血管内皮细胞生长因子的表达及活性研究
- 2004年
- 目的 :用基因工程的方法在大肠杆菌中诱导表达人血管内皮生长因子 (VEGF) ,分离纯化并检测其生物学活性 ,以研究其在药学领域潜在的药用价值。方法 :利用PCR技术扩增VEGF基因片段 ,克隆到pQE30表达载体中 ,转化E .coliM15菌株后用IPTG进行诱导表达。经裂解细胞、变性、复性和Ni-NTAagarose金属螯合柱层析等方法纯化得到VEGF。用鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM)血管生成实验检测VEGF的生物活性。结果 :重组表达质粒在大肠杆菌中成功地表达了相对分子质量为 2 0 6 0 0的融合蛋白 ,它以不溶性的包涵体形式存在 ,占菌体总蛋白的 30 %左右。经分离纯化融合蛋白SDS -PAGE显示为单一区带。CAM结果表明给药组血管生成数 (2 1 7± 3 1、39 3± 2 8)与对照组 (15 4± 1 9、2 9 2± 4 2 )相比有明显增加 (P <0 0 5 )。结论 :利用原核表达系统得到血管内皮生长因子具有天然VEGF生物学活性 ,为进一步的应用研究奠定了基础。
- 王晓华吉琼梅吴朝霞董文心
- 关键词：人血管内皮生长因子鸡胚绒毛尿囊膜基因表达
- 几种固定化苯丙氨酸解氨酶方法的比较被引量：4
- 2001年
- 目的 对不同方法固定化苯丙氨酸解氨酶 (PAL)的偶联率或包被率以及固定化对PAL活性和稳定性的影响进行比较 ,以期得到较为方便、有效的固定化 PAL。方法 (1 )聚丙烯酰胺凝胶 (PAG)包埋 PAL;(2 )载体偶联法将 PAL固定于 Bio- Gel P- 30 0 ;(3)将 PAL包被于三种脂类组成不同的质脂体 ;(4)对诱变选育出的含 PAL活性酵母细胞进行丙酮处理。结论 (1 )固定化酶活性采用 T∶C比为 8∶ 30明显高于 8∶ 1 9;(2 )以戊二醛将 PAL固定于 Bio- Gel P30 0优于用DCD固定化的酶 ;(3)质脂体包被中以脱水再加水法对酶活性影响较少 ,脂类组成以磷脂酰胆碱 :胆固醇 :磷脂酰丝氨酸比值 7∶ 2∶ 1最好 ;(4)固定化 PAL活性酵母细胞能较好地抵抗人工肠液中胰蛋白酶的水解作用 ,亦能明显降低苯丙氨酸的浓度。
- 王晓华苏海翔
- 关键词：固定化苯丙氨酸解氨酶
- 紫外线诱导小鼠B16黑色素瘤细胞凋亡研究被引量：2
- 2004年
- 目的 :研究紫外线照射对小鼠B16黑色素瘤细胞凋亡率的影响。方法 :用UV照射培养的小鼠B16黑色素瘤细胞 ,于照射后不同时段分别用流式细胞仪 (FCM )及原位末端标记法 (TUNEL法 )检测B16细胞凋亡率。结果 :UV照射后 0h、12h、2 4h及 36h ,B16细胞的凋亡率分别为 (4 .13± 0 .15 ) % ;(9.2± 0 .74 ) % ;(2 1.6± 1.2 8) % ;(36 .7± 1 5 6 ) %。各时间段B16细胞的凋亡率与对照组B16细胞的 (2 .3± 0 .2 6 ) %相比均有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 :紫外线照射可诱导小鼠B16黑色素瘤细胞凋亡。
- 吉琼梅王晓华张东方
- 关键词：细胞凋亡黑色素瘤细胞紫外线
