钟曦
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 供职机构：重庆医科大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- mTORC2介导的信号通路影响肺泡上皮钠通道对急性肺损伤肺组织的保护作用
- 2015年
- 目的通过调控肺泡上皮细胞α钠离子通道(epithelial sodium channelα,ENa C-α)上游信号通路,探讨m TORC2/SGK1途径在急性肺损伤(acute lung injury,ALI)情况下对肺水清除方面的作用机制。方法将50只BALB/c雄性小鼠按随机数表法分成对照组、模型组、胰岛素组、雷帕霉素组及PP242抑制剂组,每组10只。滴鼻给予5 mg/kg LPS构建ALI动物模型。建模2 h后,分别腹腔注射0.8 U/kg胰岛素、4 mg/kg雷帕霉素、60 mg/kg PP242干预,8 h后处死小鼠。A549细胞分别以培养基、10 mmol/m L胰岛素、5 mmol/m L雷帕霉素、5 mmol/m L PP242处理。采用ELISA检测各组肺泡灌洗液(BALF)中IL-6及TNF-α浓度,并测量各组右上肺组织的湿/干质量比(W/D)评估肺水清除(alveolar fluid clearance,AFC),HE染色观察各组肺组织病理改变。采用Real-time PCR、Western blot、免疫荧光法检测A549细胞rictor、糖皮质激素调节蛋白激酶1(serum and glucocorticoid-regulated protein kinase1,SGK1)、磷酸泛素化连接酶(E3 ubiquitin protein ligase,Nedd4-2)及ENa C-α的表达。结果体内实验发现,与模型组比较,胰岛素组小鼠BALF中IL-6[(77.48±6.04)vs(49.17±8.49)pg/m L]和TNF-α[(116.2±13.5)vs(92.4±8.37)pg/m L]水平显著降低,并伴有湿/干质量比减低,病检示肺损伤程度减轻(P<0.05)。PP242抑制剂组BALF中IL-6[(77.48±6.04)vs(100.6±14.69)pg/m L]和TNF-α[(116.2±13.5)vs(192.5±16.01)pg/m L]水平上升,湿/干质量比显著升高,肺组织损伤明显,程度较模型组更重(P<0.05)。而雷帕霉素组与模型组中各项指标及病理学改变差异无统计学意义(P>0.05)。体外实验中,A549细胞中rictor、SGK1、Nedd4-2及ENa C-αmRNA和蛋白表达在胰岛素组明显增高,在PP242抑制剂组中明显降低(P<0.05),而在雷帕霉素组中无明显改变(P>0.05)。结论调控m TORC2/SGK1信号通路可影响ENa C-α的表达,从而发挥其在ALI情况下对肺组织的保护作用。
- 钟曦赵燕王导新
- 关键词：急性肺损伤
- 重组慢病毒沉默rictor基因对mTORC2/SGK1信号通路及肺泡上皮钠离子通道的调控作用被引量：1
- 2015年
- 目的构建针对mTORC2特异组成蛋白中rictor基因的重组慢病毒沉默载体,研究其对mTORC2/SGK1信号通路的调控机制及其对肺泡上皮细胞钠离子通道的影响,并探讨其在急性呼吸窘迫综合征及急性肺损伤中的作用。方法构建目的基因的rictor干扰质粒及空载质粒并与慢病毒包装体系共转染293T细胞,收集病毒上清液,经离心、浓缩及纯化获取重组慢病毒。测定病毒滴度,感染A549细胞并筛选细胞稳定株,RT-PCR验证目的基因rictor沉默情况。采用PCR和western blot检测该通路中各信号指标表达情况。结果成功构建沉默rictor基因的重组慢病毒并感染A549细胞和获得细胞稳定株。与空白组及对照组相比,shRNA-rictor组中rictor和下游SGK1、α-ENaC、β-ENaC、γ-ENaC mRNA水平均有明显下降(P<0.05)。同时,shRNA-rictor组中rictor和下游SGK1、P-SGK、α-ENaC、β-ENaC、γ-ENaC的蛋白水平较前两组均有明显下降(P<0.05)。结论沉默rictor基因对mTORC2/SGK1信号通路有明显的调控作用,同时从基因和蛋白水平影响肺泡上皮细胞α-ENaC、β-ENaC、γ-ENaC的表达。mTORC2/SGK1可能是调控肺泡上皮细胞对肺泡液的清除能力,同时影响肺水肿形成的重要信号通路。
- 钟曦秦克王导新
- 关键词：慢病毒属
