李婷婷
- 作品数：16 被引量：12H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金甘肃省自然科学基金家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 弓形虫HAD2b基因缺失株的构建及生物学功能研究被引量：3
- 2021年
- 弓形虫是一种很成功的专性细胞内寄生的机会性致病原虫,可感染几乎所有温血动物,导致的弓形虫病是一种重要的人兽共患寄生虫病,目前尚无有效的疫苗。为了研究弓形虫卤代酸脱卤酶(haloacid dehalogenase,HAD)家族中一个保守蛋白HAD2b的功能,本研究通过利用CRISPR/Cas9技术成功构建了弓形虫Ⅰ型RH虫株HAD2b基因缺失株(RHΔHAD2b)。通过噬斑试验分析发现,RHΔHAD2b形成的噬斑大小和数量与野生株相比无显著差异。通过逸出试验发现,大部分RHΔHAD2b和野生株在钙离子的刺激下,在2 min内完成逸出,差异不显著。小鼠毒力试验发现,昆明鼠分别感染RHΔHAD2b和野生株后均在7~10 d内死亡,无显著差异。对HAD2b基因转录组数据库现有数据分析表明,HAD2b在弓形虫RH株的表达量显著低于其它虫株,说明HAD2b在不同虫株可能发挥不同的功能。本研究成功构建了弓形虫HAD2b基因缺失株(RHΔHAD2b),为进一步研究HAD2b基因在Ⅰ型虫株的其它生物学功能奠定了基础,也为构建弓形虫其它基因型虫株的HAD2b基因缺失株奠定了技术基础。
- 张海生梁勤立李婷婷朱兴全王金磊
- 关键词：弓形虫生物学功能
- 弓形虫弱毒株PruΔpp2a-b的构建方法及其应用
- 本发明提供了弓形虫弱毒株PruΔpp2a‑b的构建方法及其应用，属于生物医药技术领域。本发明通过敲除TgPP2A‑B基因，获得了TgPP2A‑B基因缺失的弓形虫弱毒株，缺失该基因后大量淀粉颗粒在虫体间聚集，且弓形虫丧失形...
- 李婷婷王萌王金磊张念章李月梅付宝权朱兴全
- 弓形虫弱毒株PruΔpp2a-c的构建方法和应用
- 本发明提供了弓形虫弱毒株PruΔ<I>pp2a‑c</I>的构建方法和应用，属于生物医药技术领域。本发明通过敲除TgPP2A‑C基因，获得了TgPP2A‑C基因缺失的弓形虫弱毒株，缺失该基因后大量淀粉颗粒在虫体间聚集，且...
- 王金磊王萌李婷婷张念章李月梅付宝权朱兴全
- 多头带绦虫cAMP依赖性蛋白激酶A催化亚基TmPKA-C基因的克隆及原核表达
- <正>为鉴定多头带绦虫cAMP依赖性蛋白激酶催化亚基基因(TmPKA-C)作为诊断抗原的潜能,以多头带绦虫成虫RNA为模板,利用RT-PCR扩增TmPKA-C基因。将TmPKA-C基因片段连接至pET-30a原核表达载体...
- 杨洋李文卉张念章李婷婷李立闫鸿斌贾万忠付宝权
- 文献传递
- 小鼠AIM2分子结构特征及天然免疫模式识别功能的研究被引量：1
- 2017年
- 应用RT-PCR技术,从小鼠脾淋巴细胞中克隆AIM 2基因,通过生物信息学软件对AIM2的遗传演化关系、分子结构特征以及氨基酸序列进行分析,并应用q RT-PCR检测在不同组织中的m RN A转录水平。结果显示,克隆的小鼠AIM2基因开放阅读框全长1 065 bp,编码354个氨基酸,与其他动物的AIM2基因序列具有较高的同源性(56.9%~88.9%);q RT-PCR检测表明,AIM2基因在肌肉和心脏组织中转录水平较高。此外,将AIM2基因亚克隆至真核表达载体p CMV-Tag 2B进行W estern-blot验证,然后将正确的重组表达质粒转染H EK 293T细胞,进而应用双荧光素酶报告系统检测证实在poly(d A-d T)和poly(d G-d C)刺激下,过表达小鼠AIM2对转录因子NF-κB和AP-1的活化过程有显著增强作用。上述研究结果表明,小鼠AIM2能够识别富含A/T或C/G的D NA,是重要的胞浆DNA识别受体,这为进一步探讨AIM2与DNA病毒的相互作用机制奠定基础。
- 王聪李婷婷成温玉何小兵金启旺贾怀杰陈国华曾爽房永祥景志忠刘翊中
- 关键词：天然免疫
- 弓形虫4个假定蛋白基因缺失株的构建及其基本生物功能学研究被引量：1
- 2022年
- 旨在探究4个与MIC相关的假定蛋白在弓形虫速殖子阶段的作用及基因缺失对毒力的影响。在线设计TGME49_222975、TGME49_275798、TGME49_238220和TGME49_238210的sgRNA序列,用PCR将pSAG1::CAS9-U6::sgUPRT模板上的sgUPRT突变为相应的sgRNA,获得目的基因的CRISPR质粒。将获得的目的基因质粒和DHFR片段混合后电转入弓形虫速殖子,经乙胺嘧啶单克隆筛选后,PCR鉴定成功即得目的基因缺失株。再用目的基因缺失株和RH野生株进行复制、逸出、噬斑和小鼠毒力试验,比较二者各项试验结果,以评定目的基因对于弓形虫速殖子功能和毒力的影响。结果显示:目的基因缺失株和野生株RH在相同时间内形成的含有1、2、4、8、16个速殖子的纳虫空泡数占比差异不显著(P>0.05),纳虫空泡内速殖子在钙离子刺激下2 min内均可全部逸出,相同条件和时间培养形成的噬斑大小和面积差异不显著(P>0.05),接种相同数目速殖子的小鼠自开始死亡到全部死亡时间差别不显著(P>0.05)。本研究成功构建了4个弓形虫MIC相关基因的缺失株(RHΔTGME49_222975、RHΔTGME49_275798、RHΔTGME49_238200和RHΔTGME49_238210),但毒力与野生株毒力均差异不显著,说明这4个基因均不是弓形虫的重要“独立”毒力因子,但可能在其他方面发挥着重要的生物学功能。本研究初步解析了4个弓形虫MIC相关蛋白的基本生物学功能,为后期全面解析弓形虫蛋白功能提供数据。
- 王沛王萌李婷婷郑晓楠梁勤立陈小庆
- 关键词：弓形虫基因敲除
- 三氯生在制备杀灭寄生线虫药物中的应用
- 本发明提供了一种三氯生在制备杀灭寄生线虫药物中的应用，属于药物化学技术领域，在本发明中，三氯生对旋毛虫各时期均具有明显的致死作用，且用量低，安全性高，三氯生可作为治疗线虫病的候选分子之一，对开发新杀灭线虫药物有重要的参考...
- 张念章徐媛滨付宝权李文卉王萌李婷婷曲自刚王金磊
- 小鼠DNA依赖的干扰素调节因子激活物分子结构特征及其功能
- 2015年
- 目的研究小鼠DNA依赖的干扰素调节因子激活物(DAI)的分子结构特征以及抗病毒天然免疫应答与信号转导的分子机制。方法应用反转录PCR技术从小鼠脾脏淋巴细胞中克隆DAI基因,并利用生物信息学软件对其遗传演化关系及分子结构特征进行分析;双荧光素酶报告系统检测小鼠DAI受到聚脱氧腺苷酸-脱氧胸苷酸[poly(d A-d T)]和聚脱氧鸟苷酸-脱氧胞苷酸[poly(d G-d C)]作用后β干扰素(IFN-β)启动子和核因子κB(NF-κB)调控元件启动的荧光素酶活性。结果克隆的小鼠DAI基因开放读框全长为1236 bp,编码411个氨基酸,与牛、猪、大鼠等哺乳动物DAI相应序列的同源性为60%、63.1%、84%,由2个Z-DNA结合结构域Zα和Zβ、DNA结合区3(D3)和信号转导结构域(SD)组成。小鼠DAI受到poly(d A-d T)作用后,IFN-β启动子和NF-κB调控元件起始的相对荧光素酶活性均显著增加;而小鼠DAI受到poly(d G-d C)作用后,只有NF-κB起始的相对荧光素酶活性显著增加,IFN-β启动子起始的相对荧光素酶活性并无显著变化。结论小鼠DAI能识别富含A/T或C/G的DNA序列,可能在宿主抗DNA病毒感染的天然免疫反应中发挥重要作用。
- 金启旺李婷婷何小兵贾怀杰陈国华曾爽房永祥景志忠杨孝朴
- 关键词：信号转导
- 小鼠LRRFIP1基因的克隆及LRRFIP1天然免疫模式识别功能的研究被引量：3
- 2015年
- 应用RT-PCR技术,从小鼠脾淋巴细胞中成功克隆了LRRFIP1基因,并对其遗传演化关系及LRRFIP1的分子结构特征进行了分析。结果显示,克隆的基因开放阅读框全长2 190bp,编码729个氨基酸,与大鼠、猪、牛等哺乳动物LRRFIP1相应序列的同源性为90.5%~46.5%。将克隆的小鼠LRRFIP1基因亚克隆至真核表达载体pCMV-Tag 2B,转染HEK293T细胞后,双荧光素酶报告系统证实,在poly(dA-dT)和poly(dG-dC)刺激下,过表达小鼠LRRFIP1能够通过激活IRF3而显著增强IFN-β的表达。结果表明,小鼠LRRFIP1能够识别富含A/T或C/G的DNA序列,在宿主抗DNA病毒感染的天然免疫反应中可能发挥重要作用。
- 李婷婷何小兵贾怀杰陈国华曾爽房永祥金启旺景志忠
- 关键词：小鼠信号转导
- 弓形虫RHΔgra47弱毒疫苗株及其应用
- 本发明公开了弓形虫弱毒疫苗株RHΔgra47及其应用，属于疫苗制备技术领域。该发明通过敲除GRA47基因，获得了GRA47基因缺失的弓形虫弱毒疫苗株RHΔgra47，缺失GRA47降低了弓形虫纳虫泡膜(PVM)的渗透性，...
- 王金磊郑晓楠李婷婷王萌张念章付宝权朱兴全
