高振宇
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
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- miR-363、Eomes在人脐带间充质干细胞诱导神经样细胞中的表达及意义
- 2017年
- 目的观察miR-363、脱中胚蛋白(Eomes)在人脐带间充质干细胞(HUMSCs)诱导的神经样细胞中的表达变化,并探讨其意义。方法培养HUMSCs并应用3-异丁基-1-甲基黄嘌呤、视黄酸、丁基羟基茴香醚联合诱导分化为神经样细胞,采用免疫荧光化学法检测诱导前后细胞β-Ⅲ-tubulin和NSE的表达;real-time PCR检测诱导前后细胞中miR-363和Eomes mRNA的表达,Western blot检测诱导前后细胞中Eomes蛋白的表达;运用生物信息学方法(Target Scan和miRanda)对miR-363和Eomes基因的靶向配对关系进行预测,采用荧光素酶报告系统进行鉴定。结果光镜下可见HUMSCs呈梭形均匀分布,诱导分化后细胞呈圆形、有长的突起;免疫荧光检测发现诱导14 d的细胞β-Ⅲ-tubulin和NSE表达呈阳性,神经样细胞诱导成功。HUMSCs诱导分化前后miR-363相对表达量分别为1.00±0.31、0.32±0.02,Eomes mRNA相对表达量分别为1.00±0.22、15.73±0.85,Eomes蛋白相对表达量分别为0.21±0.02、0.78±0.06,两者比较,P均<0.05。生物信息学软件结果显示miR-363和Eomes基因靶向配对良好,荧光素酶报告系统鉴定发现miR-363能够抑制Eomes mRNA表达。结论 miR-363能够靶向作用Eomes 3'UTR负性调控HUMSCs神经样细胞分化后Eomes的表达。
- 赵晓彬杨子微高振宇
- 关键词：人脐带间充质干细胞神经样细胞
- 大鼠BMSCs向心肌样细胞分化过程中miR-128对Nkx2-5基因的调控作用被引量：1
- 2015年
- 目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向心肌样细胞分化过程中miR-128对Nkx2-5基因的调控作用。方法分离培养大鼠BMSCs,应用5-氮杂胞苷将其诱导为心肌样细胞,采用Real-time PCR法检测诱导6、10、14、18、22 d时miR-128、Nkx2-5基因的表达。用生物信息学方法对miR-128和Nkx2-5基因的靶向匹配关系进行预测,显示miR-128与Nkx2-5 mRNA的3'UTR结合情况良好。提取心肌细胞总RNA,扩增Nkx2-5 mRNA 3'UTR片段,构建Nkx2-5 3'UTR-pmir GLO荧光素酶报告载体,双荧光素酶检测转染Nkx2-5 3'UTR-pmir GLO以及miR-128模拟物或对照miRNA的荧光强度,鉴定miR-128与Nkx2-5的靶向关系。结果将诱导6 d的Nkx2-5和miR-128的表达量分别设为1,诱导10 d的Nkx2-5表达量为4.33±1.32、22 d为14.78±6.05,诱导10 d的miR-128表达量为0.776 2±0.054 3、22 d为0.197 6±0.083 6。miR-128与Nkx2-5的表达呈负相关(r=-0.546,P=0.021)。相对于转染对照miRNA(设定其荧光素酶活性为1),转染miR-128能使Nkx2-5 3'UTR-pmir GLO的荧光素酶表达下降为0.435 4±0.072 6。结论 miR-128通过结合Nkx2-5 mRNA 3'UTR抑制其表达,具有负性调控BMSCs向心肌样细胞分化过程中Nkx2-5表达的作用。
- 朱国伟鞠延玲高振宇
- 关键词：微小核糖核酸心肌样细胞
