杜璟
- 作品数：12 被引量：10H指数：2
- 供职机构：温州医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省大学生科技创新活动计划(新苗人才计划)项目浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 真核细胞顺乌头酸酶活性检测新技术——胶内酶活性分析法被引量：4
- 2015年
- 顺乌头酸酶(aconitase,Aco)是细胞内重要的铁硫蛋白酶,它催化细胞内柠檬酸经中间产物顺乌头酸生成异柠檬酸.真核细胞中顺乌头酸酶有两种,分别定位在细胞质的顺乌头酸酶1(cAco)和定位在线粒体的顺乌头酸酶2(m-Aco).检测它们活性的变化能敏感地反映出细胞中能量代谢、自由基产生、铁硫簇组装及铁代谢水平的改变.顺乌头酸酶活性的传统检测方法通常是测定细胞中总的顺乌头酸酶活性,该方法难以准确区分出c-Aco和m-Aco各自的活性变化.因此我们建立一种胶内酶活性分析法检测顺乌头酸酶活性.该方法利用非变性电泳技术将c-Aco和m-Aco浓缩分离,通过泡染底物显色,条带颜色深浅反映了酶活性的强弱.同时,比较了胶内酶活性分析法和分光光度法检测细胞内c-Aco和m-Aco的活性,并对比检测了过氧化氢处理细胞前后Aco活性的变化.结果显示,这两种方法均可敏感地检测出Aco的活性改变,并有广泛的细胞系实用性,但胶内酶活性分析法可区别测定c-Aco和m-Aco活性,不需繁琐的细胞质和线粒体分离,简便易行.文中介绍的线粒体分离纯化技术也为线粒体功能深入研究提供了一个快速、高效的分离纯化方法.
- 杜璟李艳纯任雪营谭国强吕建新
- 关键词：分光光度法铁硫蛋白
- 铜对线粒体中铁硫蛋白功能的毒性机制研究被引量：1
- 2016年
- 该文探讨了铜对线粒体内铁硫蛋白的毒性机理。通过包装慢病毒将Hep G2细胞中铜转运蛋白ATP7B(ATPase copper transporting beta)基因敲低,并用铜离子处理构建高铜细胞模型。通过免疫印迹、胶内酶活、紫外–可见光分光光度法检测细胞线粒体内铁硫蛋白、非铁硫蛋白及铁硫簇组装蛋白量和活性的改变;用电镜观察高铜模型中线粒体的形态改变;用海马能量代谢分析仪检测铜离子对细胞能量代谢的影响。结果发现,高铜细胞模型线粒体内铁硫簇组装蛋白ISCA2(ironsulfur cluster assembly 2)及ISCU(iron-sulfur cluster assembly enzyme)水平下降,抑制了铁硫簇的组装,并进一步影响了线粒体内[2Fe-2S]型及[4Fe-4S]型铁硫蛋白功能,但并不影响非铁硫蛋白。高铜状态也影响了呼吸链复合体活性及线粒体能量代谢,并导致线粒体形态发生改变。这些结果表明,异常累积的铜离子也会通过抑制线粒体中铁硫簇的组装,影响线粒体内铁硫蛋白的功能。
- 李艳纯杜璟刘若兰任雪营林楚贤李江辉谭国强吕建新
- 关键词：铁硫簇铁硫蛋白能量代谢
- 利用非离子去污剂提取PBMC中线粒体筛查线粒体功能紊乱性疾病
- 线粒体作为真核细胞中重要的细胞器,在人体生命活动中扮演着许多重要的角色。它们通过氧化磷酸化为机体提供能量,参与了脂肪酸氧化、尿素循环、氨基酸和一些蛋白辅基的生物合成等过程。这些功能使得线粒体成为细胞生命活动中必不可少的一...
- 李艳纯任雪营杜璟吕建新谭国强
- 文献传递
- 一株检测砷的大肠埃希氏菌
- 本发明涉及一种检测水体中类金属砷的微生物学方法，具体涉及利用基因工程改造的大肠埃希氏菌报告菌株构建方法，及建立其在检测水体中砷的方法。本发明所述检测菌株的构建，首先采用Red重组系统敲除野生型大肠杆菌MC4100砷抗性的...
- 吕建新纪松军周怀彬杜璟郑美琴
- 文献传递
- 一种大肠杆菌冷休克助溶型表达质粒的构建方法及其应用
- 本发明涉及一种大肠杆菌助溶型表达质粒的构建方案及应用其制备水溶性异源多肽的方法。所述利用无缝克隆技术构建一类由冷休克基因的启动子控制小分子泛素相关修饰蛋白(SUMO)与外源基因融合表达的冷休克助溶型表达质粒。将一种嵌合型...
- 庞一林谭国强吕建新李江辉杜璟张涛孙倩倩韩琴霞
- 检测外周血单个核细胞中顺乌头酸酶活性筛查铁硫蛋白病
- 铁硫簇是一类古老而功能众多的蛋白辅基,它的组装是需多种组装蛋白参与、有序进行的催化反应。成熟的铁硫蛋白参与了细胞中各种生命活动,如物质代谢、能量产生、DNA复制与修复、基因转录与翻译等。所以,铁硫簇组装过程中任何一个环节...
- 杜璟李艳纯任雪营吕建新谭国强
- 文献传递
- 一种大肠杆菌冷休克助溶型表达质粒的构建方法及其应用
- 本发明涉及一种大肠杆菌助溶型表达质粒的构建方案及应用其制备水溶性异源多肽的方法。所述利用无缝克隆技术构建一类由冷休克基因的启动子控制小分子泛素相关修饰蛋白(SUMO)与外源基因融合表达的冷休克助溶型表达质粒。将一种嵌合型...
- 庞一林谭国强吕建新李江辉杜璟张涛孙倩倩韩琴霞
- 真核细胞中铁硫簇的组装机制及相关铁硫蛋白疾病被引量：7
- 2015年
- 铁硫簇是一类古老而功能众多的蛋白质辅基,在细胞中参与电子传递过程、酶促反应及感知内环境的变化而调节基因的表达等。虽然铁硫簇的组成元素和结构都较为简单,但是铁硫簇的组装是需多种组装蛋白参与、有序进行的催化反应。直至近几年,人们才逐渐阐明了在生命体中铁硫簇是如何组装并结合到未成熟的铁硫蛋白中的。如果线粒体中铁硫簇组装及转运过程发生障碍,将严重影响细胞内铁的稳态及铁硫蛋白的功能,由此可见,线粒体中铁硫簇的组装功能使得线粒体成为细胞中必不可少的一类细胞器。该文重点概述了近十年来真核生物中铁硫簇组装机制的研究进展并阐述线粒体铁硫簇组装在人体中的重要作用及其组装障碍所引起的疾病。
- 杜璟李艳纯任雪营谭国强吕建新
- 关键词：铁硫簇铁硫蛋白
- 一种检测水体类金属砷的微生物学方法
- 本发明涉及一种检测水体中类金属砷的微生物学方法，具体涉及利用基因工程改造的大肠埃希氏菌报告菌株构建方法，及建立其在检测水体中砷的方法。本发明所述检测菌株的构建，首先采用Red重组系统敲除野生型大肠杆菌MC4100砷抗性的...
- 吕建新纪松军周怀彬杜璟郑美琴
- 文献传递
- 一株检测砷的大肠埃希氏菌
- 本发明涉及一种检测水体中类金属砷的微生物学方法，具体涉及利用基因工程改造的大肠埃希氏菌报告菌株构建方法，及建立其在检测水体中砷的方法。本发明所述检测菌株的构建，首先采用Red重组系统敲除野生型大肠杆菌MC4100砷抗性的...
- 吕建新纪松军周怀彬杜璟郑美琴
- 文献传递
