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转LdOA1基因果蝇品系GSTs基因表达及对溴氰菊酯胁迫响应被引量：1: 2016年; 舞毒蛾是重要林业食叶害虫,揭示其G蛋白偶联受体介导G蛋白对GSTs的调控,这对于挖掘分子靶标开发新型杀虫剂具有重要意义。本文构建转LdOA1基因果蝇载体,获得表达LdOA1基因果蝇品系,分析了转基因果蝇GSTs基因表达量及对溴氰菊酯胁迫的响应,为明确昆虫OA1基因功能提供理论依据。通过传统的酶切-连接方法构建重组载体pUAST-att B-LdOA1,采用转基因技术构建表达LdOA1基因的纯合果蝇品系;利用PCR技术验证转基因果蝇品系;并运用实时荧光定量RT-PCR技术测定转基因果蝇GSTs Delta家族基因表达量及低浓度溴氰菊酯胁迫对GSTs基因表达量的影响。PCR扩增条带显示转LdOA1基因果蝇品系均能检测到453 bp目的基因条带。与非转基因果蝇相比,转LdOA1基因果蝇品系中GSTs Delta家族基因（除GSTd4和GSTd7）均上调表达,为非转基因组1.01-3.27倍。低浓度溴氰菊酯胁迫6 h,非转基因果蝇GSTd6和GSTd10基因被显著诱导激活,而其他GSTs基因被显著抑制,抑制率为6.48%-95.84%;胁迫12-72 h,GSTs基因（除GSTd1和GSTd10外）均被显著抑制。低浓度溴氰菊酯胁迫转基因果蝇GSTs表达量变化趋势与非转基因果蝇基本一致,但转基因果蝇品系GSTs表达量显著高于非转基因果蝇品系（除12-48 h GSTd1和GSTd10）,且胁迫6 h表达量最大。这些结果表明LdOA1基因可能介导G蛋白信号通路调控下游GSTs Delta亚家族基因表达响应溴氰菊酯胁迫。; 孙丽丽刘鹏王志英梁斌曹传旺; 关键词：舞毒蛾 GSTS

转舞毒蛾LdCYP6AN15v1基因果蝇品系对氯虫苯甲酰胺胁迫响应被引量：1: 2017年; 【目的】舞毒蛾是林业重要害虫,细胞色素P450是昆虫体内广泛分布的参与外源化合物代谢关键酶系,探讨P450家族基因CYP6AN15v1对杀虫剂代谢解毒功能,为舞毒蛾有效治理提供依据。【方法】通过RT-PCR法获得Ld CYP6AN15v1基因c DNA全长,采用传统酶切连接的方法构建转CYP6AN15v1基因果蝇载体,通过转基因技术获得表达Ld CYP6AN15v1果蝇品系(命名为att P40>CYP6AN15v1)。采用分光光度计法研究低剂量氯虫苯甲酰胺(7.17mg·L^(-1))处理对转基因和非转基因果蝇品系细胞色素P450活性的影响,并采用qRT-PCR法测定其对CYP6AN15v1基因表达的影响。【结果】从舞毒蛾无参照转录本文库中克隆获得CYP6AN15v1全长基因,编码512个氨基酸,蛋白分子质量为59.02 k Da;系统进化树分析表明CYP6AN15v1与甜菜夜蛾和棉铃虫关系较近。以DNA和c DNA为模板,att P40>CYP6AN15v1果蝇品系均检测到1 539 bp目的基因,表明Ld CYP6AN15v1基因成功整合到果蝇基因组。与非转基因att P40果蝇品系相比,转基因att P40>CYP6AN15v1果蝇品系对氯虫苯甲酰胺的敏感性显著降低,致死中浓度LC50为非转基因果蝇的2.92倍;低剂量(7.17 mg·L^(-1))氯虫苯甲酰胺胁迫下,舞毒蛾细胞色素P450酶活性和CYP6AN15v1基因的诱导作用呈现时间效应,att P40>CYP6AN15v1果蝇品系P450活性为非转基因果蝇的1.09~1.93倍,主要表现为诱导效应;att P40>CYP6AN15v1果蝇品系的CYP6AN15v1基因mRNA表达量呈诱导激活,其表达量为非转基因的44.54~137.80倍。【结论】利用转基因技术成功构建了转Ld CYP6AN15v1果蝇品系att P40>CYP6AN15v1;氯虫苯甲酰胺可能通过诱导Ld CYP6AN15v1基因mRNA的上调表达而增强黑腹果蝇P450酶活性,从而参与对氯虫苯甲酰胺的解毒作用。; 党英侨殷晶晶陈传佳孙丽丽刘鹏曹传旺; 关键词：舞毒蛾氯虫苯甲酰胺

舞毒蛾小分子热激蛋白基因分析及对甲萘威胁迫的响应被引量：2: 2017年; 昆虫小分子热激蛋白(smHsp)是分子质量在12~43 k Da、具有分子伴侣活性的应激蛋白,可以在环境胁迫下帮助蛋白质折叠和转运。本文为明确舞毒蛾的smHsp基因特性及对杀虫剂甲萘威胁迫的响应,从舞毒蛾无参照全转录本文库中鉴定获得6个小分子热激蛋白家族基因,全长基因开放阅读框为444~567 bp,编码147~188个氨基酸,理论等电点为5.58~6.17。根据分子质量大小分别命名为Ld Hsp17.0、Ld Hsp18.7、Ld Hsp19.1、Ld Hsp20.3、Ld Hsp21.3和Ld Hsp21.4。亚致死剂量(LC_5、LC_(10)和LC_(30))的甲萘威处理可诱导舞毒蛾smHsp家族中Ld Hsp20.3、Ld Hsp19.1和Ld Hsp17.0上调表达,但抑制了Ld Hsp21.4、Ld Hsp21.3和Ld Hsp18.7的表达,且甲萘威处理对smHsp基因表达量的影响存在质量浓度和剂量效应。以上结果为进一步研究舞毒蛾小分子热激蛋白功能及其参与对杀虫剂抗性的机制提供了基础。; 刘鹏孙丽丽张琪慧曹传旺; 关键词：舞毒蛾甲萘威

表达LdCYP6B53果蝇品系建立及对杀虫剂的敏感性被引量：2: 2016年; 旨在探索舞毒蛾CYP6B53基因对百树菊酯、溴氰菊酯、辛硫磷、氯虫苯甲酰胺4种杀虫剂的敏感性。通过转基因技术将LdCYP6B53基因转入果蝇体内,分别建立att P40>CYP6B53和VK5>CYP6B53转基因果蝇品系,并测定杀虫剂对转基因果蝇毒力。限制性内切酶消化、RT-PCR和核酸序列测定表明转基因果蝇品系中稳定表达LdCYP6B53基因。与对照att P40、VK5果蝇品系相比,转基因果蝇品系att P40>CYP6B53和VK5>CYP6B53对百树菊酯的敏感性显著降低,LC50分别为对照组的1.83和1.61倍;而对溴氰菊酯敏感性显著增加,LC50分别为对照组的0.52和0.21倍;对辛硫磷和氯虫苯甲酰胺的敏感性与对照组差异不显著。本研究利用转基因技术成功构建了转舞毒蛾P450基因CYP6B53的果蝇品系att P40>CYP6B53和VK5>CYP6B53,可用于杀虫剂筛选,为LdCYP6B53功能研究提供了手段。; 薛绪亭孙丽丽刘鹏王志英曹传旺; 关键词：舞毒蛾杀虫剂敏感性

转舞毒蛾CYP6B53基因果蝇品系对2种杀虫剂的胁迫响应被引量：3: 2018年; 昆虫细胞色素P450是重要的解毒酶,参与杀虫剂代谢。利用转基因果蝇技术探究舞毒蛾CYP6B53基因对溴氰菊酯和百树菊酯的胁迫响应:通过药膜法以低剂量(0.77 mg/L)溴氰菊酯和百树菊酯胁迫转CYP6B53基因果蝇(命名为att P40>CYP6B53)及非转基因对照果蝇(命名为att P40),分别测定了细胞色素P450酶活性和CYP6B53基因表达量对2种杀虫剂的胁迫响应。结果表明:低剂量拟除虫菊酯胁迫下,转CYP6B53基因果蝇体内细胞色素P450活性表现出不同的时间效应,以24 h时表现为例,溴氰菊酯胁迫24 h显著抑制P450活性,而百树菊酯胁迫则显著诱导P450活性;转基因果蝇体内CYP6B53 m RNA表达水平对2种杀虫剂24 h胁迫响应呈现出相似的结果。综上,CYP6B53基因调控P450活性参与溴氰菊酯和百树菊酯胁迫响应,但胁迫响应存在显著的时间效应。; 张琪慧孙丽丽刘鹏曹传旺; 关键词：舞毒蛾溴氰菊酯

舞毒蛾DnaJ1基因克隆分析及对甲萘威胁迫响应: 2016年; Dna J蛋白是Dna K/Hsp70的辅助分子伴侣,通过调节Hsp70的ATPase活性来影响蛋白复合体的合成与组装。为明确舞毒蛾Lymantria dispar的LdDnaJ1基因特性及对杀虫剂甲萘威的胁迫响应,通过克隆LdDnaJ1全长基因并运用实时荧光定量RT-PCR技术测定了甲萘威对其LdDnaJ1基因表达量的影响。结果表明,舞毒蛾Ld Dna J1全长基因开放阅读框为1 062 bp,编码353个氨基酸,分子质量为39.91 kD,理论等电点为5.65;舞毒蛾Dna J与柑橘凤蝶Papilio xuthus Dna J亲缘关系较近。甲萘威对舞毒蛾2龄幼虫24 h和48 h的致死中浓度LC50分别为74.04 mg/L和31.48mg/L。低剂量(LC_5、LC_(10)和LC_(30))甲萘威胁迫下,舞毒蛾2龄幼虫Ld Dna J1基因表达量均下调,LC_(30)甲萘威处理后72 h时LdDnaJ1基因表达量最低,仅为对照的15.70%。表明甲萘威可抑制舞毒蛾LdDnaJ1基因的表达,且呈现明显的时间和剂量效应。; 问荣荣刘鹏邹传山王志英曹传旺; 关键词：舞毒蛾甲萘威基因表达量

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刘鹏

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