王玉刚
- 作品数：11 被引量：70H指数：5
- 供职机构：北京医科大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Magic/WizardDNA纯化试剂盒的再生利用被引量：1
- 1998年
- ＤＮＡ的提取是分子生物学的常规操作，美国Ｐｒｏｍｅｇａ公司推出的Ｍａｇｉｃ／Ｗｉｚａｒｄ试剂盒大大简化了这一烦琐、费时的工作，但试剂盒一次性使用的价格使多数国内实验室难以承受，摸索出一种简单的试剂盒再利用的方法，使再生试剂盒的纯化效果与原装试剂盒无显著差别，在方便了研究工作的同时也大大降低了实验成本．
- 袁勇宋泉声刘红涛狄春辉王玉刚
- 关键词：DNA提取试剂盒再利用
- 一个人类凋亡相关新基因TFAR15的cDNA克隆化与表达被引量：7
- 1999年
- 运用cDNA RDA(cDNA Representationaldifferencesanalysis)的方法 ,已获得了在细胞因子依赖性红白血病细胞系TF 1中撤除GM CSF(Granulocytemacrophage colonystimulatingfactor)后表达增高的多个基因片段 ,其中一个经GenBank检索为新基因 .利用RACE (rapidamplificationofcDNAends)和EST (expressedsequencetags)重叠片段拼接的方法克隆了该基因的cDNA全长序列 ,命名该基因为TFAR1 5 (TF 1cellapoptosisrelatedgene 1 5 ) .TFAR1 5全长cDNA由 1 2 1 8个碱基组成 ,其分布十分广泛 .随着GM CSF的去除 ,TF 1细胞中TFAR1 5的mRNA和蛋白表达水平均有不同程度的增高 .体外活性研究发现 ,重组TFAR1 5蛋白片段可抑制人胚肾细胞 2 93的自然凋亡 .
- 王玉刚刘洪涛张颍妹马大龙
- 关键词：克隆细胞凋亡基因表达
- 人重组IL-3受体α链片段的表达及其对TF-1细胞的刺激活性
- 1997年
- ＩＬ－３是一种造血生长因子，通过其受体α和β两条链向细胞内传递信号。为研究ＩＬ－３，ＩＬ－３Ｒα，β三者之间的相互作用模式，利用大肠杆菌系统表达了４种ＩＬ－３Ｒα胞外片段：ＩＬ－３Ｒ－Ｐ（氨基酸１～３０７），ＩＬ－３Ｒ－２（１～２６３），ｎＩＬ－３Ｒ－２（１～７５），ｃＩＬ－３Ｒ（１０５～２６３）。活性研究发现，除ｎＩＬ－３Ｒ－２外，其余３个片段对ＩＬ－３依赖性细胞株ＴＦ－１有不同程度的刺激活性，并且ＦＩＴＣ标记的ＩＬ－３Ｒ－Ｐ可与ＴＦ－１细胞结合，βｃ真核表达质粒转染ＣＴＬＬ细胞后，ＦＩＴＣ标记的ＩＬ－３Ｒ－Ｐ可与之结合。实验结果提示ＩＬ－３Ｒα链存在潜在的β链结合位点，一旦暴露可以激活β链传递信号。
- 王玉刚马大龙张颖妹宋泉声狄春辉袁勇刘红涛王露陈章国梁红梅
- 关键词：白细胞介素3
- 人Nmi mRNA编码区存在变异形式被引量：2
- 1998年
- Ｎｍｉ基因编码一种可与Ｍｙｃ相互作用的蛋白质．在人红白血病细胞系ＴＦ－１细胞去细胞因子ＧＭ－ＣＳＦ后８ｈ，发现ＮｍｉＲＮＡ表达水平升高．利用ＰＣＲ方法从中扩增ＮｍｉｃＤＮＡ编码区，发现除正常大小的扩增片段外，还有一比公布核酸序列小约１００～２００ｂｐ的扩增片段．序列分析表明该片段为编码区第３３７～５０９位的碱基缺失，由ＧＴＴＣＣＡＴＴＧＣＧ１１个碱基取代，形成一个开放读码框架，编码２５４个氨基酸，比野生型Ｎｍｉ编码的３０７个氨基酸少５３个氨基酸．
- 王玉刚刘红涛马大龙
- 关键词：变异体凋亡
- 人重组血管生成素在大肠杆菌的表达与鉴定被引量：5
- 1996年
- 利用ＰＣＲ技术从人肝细胞文库中扩增出血管生成素（Ａｎｇ）的ｃＤＮＡ，将其连入大肠杆菌表达载体后，在大肠杆菌成功地表达出人重组的Ａｎｇ融合蛋白和Ａｎｇ非融合蛋白，表达量占菌体蛋白的２５％，有明显的促进新生血管生成作用和ＲＮＡ酶及Ｌ９２９细胞粘附活性。
- 王露马大龙张颖妹袁勇宋泉声王玉刚李建远
- 关键词：血管生成素大肠杆菌RNA酶
- 人硫氧还蛋白存在不同的选择性剪切形式被引量：7
- 1998年
- 利用RT_PCR技术、基因克隆化和基因表达技术 ,首次在人胎肝细胞中发现了人硫氧还蛋白 (hTRX)的另外一种选择性剪切形式 (hTRXδ3) .经测序证实hTRXδ3缺失正常hTRX第 3外显子的 6 0bp ,无其他编码区域改变 ,其酶活性位点依然存在 .经大肠杆菌表达重组蛋白的活性分析 ,hTRXδ3依赖DTT催化胰岛素还原的活性明显低于完整的hTRX蛋白 .
- 王应王玉刚张颖妹袁勇马大龙
- 关键词：人硫氧还蛋白选择性剪切大肠杆菌
- 重组小鼠Fas配体在大肠杆菌中的表达和纯化
- 1999年
- 获得纯化的由大肠杆菌表达的小鼠Ｆａｓ配体。方法：以质粒ｐＥＴ－１５ｂ为载体，在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）表达小鼠的ＦａｓＬ，用多心螯合亲和层析法纯化。结果：转化菌中，重组质粒是稳定的，异丙基－β－Ｄ硫代半乳糖苷可诱导小鼠ＦａｓＬ的表达，金属螯合亲和层析法可以初步纯化此蛋白。
- 顾维丰王玉刚殷金珠
- 关键词：FAS配体基因表达大肠杆菌
- 凋亡相关新基因 TFAR19 的 cDNA 克隆、表达和功能研究被引量：29
- 1998年
- 利用ＲＤＡ技术从人白血病细胞ＴＦ－１中克隆成功一个与凋亡相关的新基因ＴＦＡＲ１９。序列分析表明，ＴＦＡＲ１９ｃＤＮＡ全长５５９ｂｐ，其中２５—３９９ｂｐ编码１２５个氨基酸的蛋白质。ｍＲＮＡ斑点杂交分析表明ＴＦＡＲ１９在５０种组织中均有不同程度的表达。在大肠杆菌中表达并纯化了重组ＴＦＡＲ１９蛋白质，制备了多克隆抗体，ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ发现ＴＦＡＲ１９蛋白在凋亡的ＴＦ－１细胞中高表达。瞬时转染ＴＦＡＲ１９正义基因后，ＴＦ－１细胞去细胞因子后凋亡速度增加。研究表明它能抑制胃癌细胞株８０３细胞和Ｈｅｌａ细胞的生长，促进它们的去血清所致的凋亡。
- 刘红涛王玉刚张颍妹宋泉声狄春晖陈光慧汤建马大龙
- 关键词：凋亡CDNA免疫学
- 人重组白细胞介素－9对白血病细胞株TF－1的刺激效应
- 1995年
- 发现人红白血病细胞株ＴＦ－１可在人重组白细胞介素－９（ＩＬ－９）刺激下长期生长达５个月，ＩＬＬ－９可抑制ＴＦ－１细胞的ＤＮＡ片段化，抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体可抑制ＩＬ－９刺激的ＴＦ－１细胞增殖，从而提供了ＩＬ－９的一个新生物学效应。
- 张颖妹马大龙王露袁勇宋泉声王玉刚狄春辉冯丹
- 关键词：白血病白细胞介素-9免疫药理学
- TF-1细胞凋亡相关基因的研究被引量：22
- 1999年
- 利用近年来发展起来的代表差异分析（ｃＤＮＡｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎａｌｄｉｆｅｒｅｎｃｅｓａｎａｌｙｓｉｓ，ｃＤＮＡＲＤＡ）技术研究了在人红白血病细胞株ＴＦ１细胞撤除细胞因子后进入凋亡时诱导表达的基因．发现了６个新基因片段．其中有三个经与ＧｅｎＢａｎｋｎｒ和ｄｂＥＳＴ查询均没有发现同源性，已经向ＧｅｎＢａｎｋ进行登记，登记号分别为Ｕ８３２０８，Ｕ８３２７９，Ｕ８３３９７．此外还发现一批已知基因的表达与凋亡相关，其中包括Ｈｏｕ和人硫氧还原蛋白等，提示它们在凋亡中可能起作用．这项工作为进一步研究凋亡相关基因打下了良好基础．通过ＲＤＡ的研究结果，有可能发现人白血病细胞凋亡的特异标记蛋白或发挥作用的重要蛋白，以期为白血病治疗提供理论基础．
- 刘红涛王玉刚张颖妹宋泉声敬保迁袁勇马大龙
- 关键词：细胞凋亡
