刘辉
- 作品数：26 被引量：81H指数：6
- 供职机构：武汉大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划中国科学院“百人计划”更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学文化科学更多>>
- 一个东亚钳蝎蝎毒素BmTXKβ基因的克隆及其基因表达调控被引量：2
- 2002年
- 从东亚钳蝎 (ButhusmartensiiKarsch ,BmK)毒腺组织cDNA文库中分离的长链钾通道毒素BmTXKβcDNA序列 ,克隆了BmTXKβ基因组序列 .BmTXKβ基因含有一个长度为 886bp的内含子 ,定位于BmTXKβ成熟肽中 ,与其它蝎毒素基因内含子定位于信号肽的基因结构不同 .并且 ,BmTXKβ基因的内含子特征也与其它蝎毒素基因不同 .研究结果从基因水平上证实了BmTXKβ是一个新的蝎毒素样肽 .以BmTXKβcDNA序列为探针与蝎基因组DNASouthern杂交出现 2条特异性杂交带 .杂交结果为蝎毒素基因可能通过DNA重排、多拷贝或多基因家族来调控基因表达提供了证据 .
- 曹志贱肖帆毛歆刘辉李文鑫
- 关键词：东亚钳蝎蝎毒素克隆基因表达调控
- P53及其相关蛋白对X射线照射肝癌细胞周期的调节被引量：4
- 2007年
- X射线照射人肝癌细胞HepG2,照射后细胞存活随照射剂量增大明显下降。流式细胞术分析,不同剂量组照射后24h均发生G2期阻滞。照射后不同时间组的细胞周期分布也有不同,照射后12h,有显著的S期延迟。Western Blot显示照射后24hP53,MDM2,P21蛋白表达上升,并有时间效应:P53在照射后24h之内始终维持较高表达,MDM2和P21分别在照射后6和12h的表达最高。X射线照射通过影响P53及其相关蛋白的表达影响细胞周期。
- 刘辉张红刘兵王小虎郝冀芳段昕
- 关键词：X射线照射HEPG2细胞周期P53
- 足叶乙甙诱导的鼻咽癌细胞亚系共表达多药耐药相关蛋白和P-gp被引量：10
- 2000年
- 杨红枚李文鑫章小平刘辉
- 关键词：鼻咽癌多药耐药
- 东亚钳蝎蝎毒素BmKBT基因组序列的克隆及其分析被引量：6
- 2004年
- 东亚钳蝎 (ButhusmartensiiKarsch ,BmK)蝎毒素BmKBT(又名BmKabT)是一个在初级结构上相似于β类哺乳动物毒素和功能接近于α类哺乳动物毒素的Na+ 通道毒素 .基于从毒腺cDNA文库中筛选得到的全长BmKBT前体核苷酸序列设计引物 ,以蝎基因组总DNA为模板进行聚合酶链式反应 (PCR) ,将PCR产物克隆至T载体、测序 .序列分析表明 :在BmKBT信号肽编码区的 3′端的- 4位Gly密码子的第 1位与第 2位碱基中有 1个长 2 2 5nt的内含子 ,插入位点距离该基因的起始密码子 4 6nt ,AT含量为 78 7% ,其内含子可能的剪接分枝位点距离 3′剪接受体位点 4 7nt.内含子的大小及其基因组织结构分析表明 :BmKBT具有与α类哺乳动物毒素类似的基因组织结构 ,进一步说明BmKBT是一个介于α类和β类Na+ 通道毒素之间的中间型蝎毒素 。
- 盛继群曹志贱刘万红徐秀玲蒋达和毛歆刘辉李文鑫
- 关键词：东亚钳蝎进化
- 人nov基因全长cDNA克隆、测序及其组织表达谱分析被引量：2
- 2003年
- 采用特异性mRNA富集技术,从人早期胚胎中得到人nov基因(novH)的cDNA克隆,序列分析表明,该基因cDNA序列由2389个碱基对组成,包含一段长1071bp的开放阅读框(ORF),3′端含有加尾信号AATAAA和ply(A)尾巴.Northern杂交显示,在Hela细胞和肾上腺组织中有表达的novHmRNA,大小约为2.5kb;多组织RNA点杂交分析结果进一步表明,novH基因在肾上腺和主动脉中的表达水平相对较高,在成人肾、肝、肺和小肠组织中亦有少量的表达.
- 蒋达和苟德明毛歆朱帆刘辉李文鑫
- 关键词：CDNA克隆表达谱基因工程
- 生物实验室常见有害物质处理的初探被引量：6
- 2009年
- 生物实验室废物的生成,如何处理问题现已被人广泛关注,根据长期实践经验,该文讨论了生物实验室有害物质的处理方法,并制定了相应的制度确保实验室的安全。
- 刘辉
- 关键词：生物实验室有害物质实验室安全
- 复制缺陷型人泡沫病毒载体辅助质粒pΔGP的构建及转染小肠癌细胞的研究被引量：3
- 2003年
- 在人泡沫病毒原病毒全长克隆pHRSV13的基础上,缺失突变gag和pol基因,并且用SV40polyA加尾信号替代人泡沫病毒的3′LTR,构建辅助质粒pΔGP.将复制缺陷型人泡沫病毒载体质粒pGPSNI EGFP和辅助质粒pΔGP分别转染和共转染小肠癌HIC细胞系,荧光显微镜检测发现共转染pGPSNI EGFP和pΔGP的HIC细胞能够强烈表达绿色荧光蛋白,转染有复制缺陷型人泡沫病毒载体质粒pGPSNI EGFP的HIC细胞能够表达少量的绿色荧光蛋白,而转染有辅助载体pΔGP的HIC细胞不表达绿色荧光.结果证明复制缺陷型人泡沫病毒载体的构建成功,表明人泡沫病毒env基因3′端的内部启动子IP具有弱启动子的活性,并且bel基因产生的调控蛋白能够反式激活人泡沫病毒内部启动子IP和5′LTR的启动子.
- 张良李治刘万红刘辉何小华李文鑫
- 关键词：共转染小肠癌癌细胞复制缺陷型
- 生物专业高年级本科生科研创新能力培养被引量：8
- 2009年
- 科研创新能力和素质,是大学本科高年级生应该具备的重要学术能力。国家大学生创新性实验计划,旨在通过以国家级重点实验室为平台,提高高年级本科生科研创新能力和素质。武汉大学该项目资助的人泡沫逆转录病毒介导IL-24对肿瘤细胞的抑制作用研究课题,让2名本科生进入实验室,抓住科研实践机遇,对其进行系统的培训,提高了他们的科研创新能力和素质,文中对如何培养生物专业高年级本科生科研创新能力及素质的过程作初步探讨。
- 刘辉
- 人补体调节蛋白DAF、MCP在哺乳动物细胞中的共表达及协同作用研究被引量：3
- 2008年
- 利用双启动子构建含人补体调节蛋白DAF和MCP cDNA的双顺反子重组表达载体pcDNA3-DAFMCP-DP,以磷酸钙沉淀法转染NIH3T3细胞,用G418筛选获得NIH3T3 pcDNA3-DAFMCP-DP转化细胞。PCR实验结果显示人补体调节蛋白基因DAF和MCP整合在转化的异源细胞的染色体上。RT-PCR和Western blot印迹实验分别从RNA水平和蛋白质水平证实了人补体调节蛋白分子DAF和MCP在细胞系中皆获得同步表达。检测连续传代30次的NIH3T3 pcDNA3-DAFMCP-DP结果表明人DAF和MCP基因仍稳定整合在细胞基因组中,并未随着传代而丢失,为稳定的转双基因细胞系。补体依赖的细胞毒反应表明,pcDNA3-DAFMCP-DP转染细胞系由于DAF和MCP的共表达获得较DAF或MCP单一表达时更强的保护能力,能更好地抑制人补体依赖的细胞毒作用的发生,保护宿主细胞免受人补体的攻击。以上结果表明,DAF和MCP双基因重组表达载体实现了人补体调节蛋白基因高效转移和高水平共表达,为获得表达多种人补体调节蛋白的理想供体提供了有效策略。而且共表达的DAF和MCP具有协同效应,能更有效地阻止补体激活造成的细胞损伤,在克服超急性排斥反应的基因治疗中具有潜在的临床应用价值。
- 徐莉赵舟宙刘辉蒋达和李文鑫
- 关键词：共表达超急性排斥反应
- 人补体调节蛋白MCP、CD59共表达体系的构建及其功能研究被引量：1
- 2007年
- 利用双启动子构建含人补体调节蛋白MCP和CD59 cDNA的双顺反子重组表达载体pcDNA3-MCPCD59-DP,以磷酸钙沉淀法转染NIH3T3细胞,用G418筛选获得NIH3T3pcDNA3-MCPCD59-DP转化细胞。PCR实验结果显示人MCP和CD59整合在转化的NIH3T3细胞的染色体上,RT-PCR和Western blot实验分别从RNA水平和蛋白质水平证实了人MCP和CD59在转化细胞中的共表达。检测连续传代30次的NIH3T3pcDNA3-MCPCD59-DP结果表明人MCP和CD59基因仍稳定整合在细胞基因组中,并未随着传代而丢失,为稳定的转双基因细胞系。补体溶破实验表明,pcDNA3-MCPCD59-DP转染细胞由于人MCP和CD59的共表达获得了较MCP或CD59单一表达时更好的保护功效,能有效地保护NIH3T3细胞免受人补体的攻击,从而抑制补体依赖的细胞毒反应的发生。以上结果表明所构建的双基因重组表达载体实现了人补体调节蛋白基因高效转移和高水平共表达,在克服超急性排斥反应的基因治疗中有潜在的应用价值。
- 徐莉赵舟宙刘辉李文鑫
- 关键词：共表达超急性排斥反应
