目的探讨小檗碱对人黑素瘤A375细胞周期相关miRNA及其靶基因表达的影响。方法体外培养人黑素瘤A375细胞，经不同浓小檗碱（20、40、60、80μmol／L）处理48h后，采用qRT-PCR检测miRNA-582-5p及其靶基因CDK1mRNA的表达，以及miRNA-188-5p和其靶基因CDK2、Cyclin D1、Cyclin A mRNA的表达。Western印迹检测细胞周期相关蛋白CDK1、CDK2、CyclinD1和CyclinA的表达。结果qRT-PCR显示，与空白对照组相比，20、40μmol／L小檗碱组miRNA-582-5p的表达无明显变化（均P〉0．05），60、80μmol／L组miRNA-582-5p的表达明显上调（均P〈0．05）。与空白对照组相比，各浓度小檗碱组miRNA-188-5p表达均增强（F=22．600，P=0．002），CDK2、CDK1、CvclinA、CyclinDlmRNA表达随小檗碱浓度增加逐渐减弱（F=51．976、248．510、626．671、312．740，均P〈0．001）。Western印迹显示，小檗碱可降低CDK1、CDK2、CyelinD1、CyclinA蛋白的表达（F=138．124、110．966、278．772、140．167，均P〈0．001）。结论小檗碱可能通过降低mRNA表达量与升高miRNA．582．5p和miRNA一188-5p含量共同使黑素瘤A375细胞周期相关蛋白CDK1、CDK2、CyclinDl和CyclinA表达降低，进而阻滞细胞周期进程，抑制肿瘤生长。
目的探讨食管鳞状细胞癌成纤维细胞hedgehog通路是否应答SHH蛋白。方法分离、原代培养食管鳞状细胞癌成纤维细胞,用Western blot方法检测培养的细胞是否为成纤维细胞,SHH蛋白与细胞孵育后提取细胞总RNA,荧光定量PCR方法检测细胞中hedgehog通路是否应答。结果 Western blot结果显示培养细胞表达间质细胞标记Vimentin和Fibronectin,不表达上皮细胞标记E-cadherin。三株细胞中有两株应答SHH蛋白,一株不应答。结论食管鳞状细胞癌中,成纤维细胞对SHH配体是否应答存在着不同的情况,因此,检测间质中Hh通路的活性可为临床上选择对Hh抑制剂应答的肿瘤提供重要的生物标记。
