胡平雄
- 作品数：3 被引量：0H指数：0
- 供职机构：天津科技大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金河北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学化学工程更多>>
- 巨大芽孢杆菌WSH-002丙氨酸脱氢酶066晶体制备及X-射线衍射分析（英文）
- 2015年
- 丙氨酸脱氢酶可逆催化丙氨酸脱氨生成丙酮酸,在氨基酸和酮酸的合成及代谢中至关重要.本研究通过PCR从巨大芽孢杆菌WSH-002中克隆并构建了丙氨酸脱氢酶基因(aldBM066)的原核表达载体,经原核表达后,采用Ni-NTA亲和层析法和阴离子交换色谱法纯化获得蛋白AldBM066,在289 K下以座滴法进行晶体生长条件筛选和制备.通过对蛋白质结晶条件的筛选,最终在蛋白质浓度为15 mg/mL及含有0.1 mol/L乙酸钠(p H 5.0)和2.4 mol/L甲酸钠的缓冲液中获得了理想的蛋白质晶体,晶体大小约为210μm×180μm×150μm,X-射线衍射数据显示,该蛋白质晶体衍射分辨率为2.88,空间群为三方晶系,晶胞参数为a=b=118.71,c=150.51,α=β=90°,γ=120°,每个不对称单位中含有1个AldBM066单体,马修斯系数为2.623/Da,溶剂含量约为53.02%.衍射数据的成功收集为解析巨大芽孢杆菌WSH-002中丙氨酸脱氢酶的三维结构奠定了前期基础,将有助于阐明以单体存在的丙氨酸脱氢酶的催化机制.
- 胡平雄王青青关婉怡鞠建松董辉徐书景
- 关键词：丙氨酸脱氢酶X-射线衍射
- 假坚强芽孢杆菌丙氨酸脱氢酶的原核表达纯化与结晶
- 2015年
- 丙氨酸脱氢酶(alanine dehydrogenase,Ald)是一种NAD+依赖性的氨基酸脱氢酶,能可逆地催化丙氨酸氧化脱氨生成丙酮酸和氨.实验以假坚强芽孢杆菌的丙氨酸脱氢酶为研究对象,将目的基因克隆到p ET-22,b(+)原核表达载体上,并在大肠杆菌中完成蛋白的高效表达.通过镍离子亲和层析、离子交换层析和凝胶过滤层析等纯化方法,得到了高纯度的目的蛋白.利用气相扩散法对目的蛋白进行结晶,最终得到分辨率为0.31,nm的蛋白晶体.
- 唐昭娜张翠英胡平雄易秋分杨江丽董辉
- 关键词：丙氨酸脱氢酶纯化
- 巨大芽孢杆菌丙氨酸脱氢酶的复合物结构研究
- 丙氨酸脱氢酶(alanine dehydrogenase，Ald，EC1.4.1.1)是一种以烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（辅酶Ⅰ，NAD+）为辅酶的氨基酸脱氢酶，它能可逆催化丙氨酸氧化脱氨生成丙酮酸、氨及NADH。丙氨酸脱氢酶...
- 胡平雄
- 关键词：丙氨酸脱氢酶基因表达纯化工艺晶体结构
- 文献传递
