张君丽
- 作品数：12 被引量：11H指数：1
- 供职机构：中国科学院微生物研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 一种气相色谱质谱检测系统及方法
- 本发明涉微生物代谢复杂样品的检测技术领域。本发明提供了一种气相色谱质谱检测系统，其包括：第一柱箱色谱柱1、第二柱箱色谱柱2、中心切割单元3、三通阀4、质谱仪接口5、进样口6。本发明实现了微生物发酵液中的微量次级代谢产物的...
- 柳国霞蔡真张君丽唐双焱
- 文献传递
- 用于生产D-对羟基苯甘氨酸的DNA分子、重组质粒以及重组菌
- 本发明公开了一种用于生产D-对羟基苯甘氨酸的DNA分子、重组质粒以及重组菌。本发明提供的DNA分子，包括PL启动子、D-海因酶基因和N-氨甲酰水解酶基因，由所述PL启动子启动所述D-海因酶基因和所述N-氨甲酰水解酶基因的...
- 蔡真张君丽
- 文献传递
- 枯草芽胞杆菌L-天冬氨酸?脱羧酶的酶学性质被引量：11
- 2015年
- ?-丙氨酸是一种重要的医药化工原料,目前主要依靠化学法进行生产。探寻更为环保和高效的生物生产法是未来研究的一个方向。L-天冬氨酸?脱羧酶(Pan D)能特异地脱去L-天冬氨酸的?羧基,生成?-丙氨酸。本文比较了3种分别来源于大肠杆菌、谷氨酸棒状杆菌及枯草芽胞杆菌的Pan D比酶活(分别为0.98、7.52和8.4 U/mg)。后两者的最适p H均为6.5,最适反应温度分别为65℃及60℃。与目前研究最多的来源于大肠杆菌和谷氨酸棒状杆菌的Pan D相比,来源于枯草芽胞杆菌的Pan D具有更好的活性和热稳定性,具有更强的工业应用潜力。同时,本文对该酶特有的翻译后自剪切及机理性失活现象进行了分析和讨论。
- 邓思颖张君丽蔡真李寅
- 关键词：Β-丙氨酸枯草芽胞杆菌谷氨酸棒状杆菌酶学性质
- 高效Rubisco羧化活性筛选体系的设计与构建
- 2020年
- 【背景】广泛存在于植物、藻类及其他自养微生物中的核酮糖-1,5-二磷酸羧化/加氧酶(Rubisco)是卡尔文循环中固定CO2的关键酶及限速酶,在生物质合成和全球碳循环中扮演着重要角色。鉴于Rubisco的重要性以及极低的固碳羧化活性,对Rubisco的筛选进化研究具有重要意义。【目的】构建一种适用于筛选高效Rubisco羧化活性的筛选体系。【方法】分析现有筛选体系对Rubisco羧化活性筛选压力缺失的原因,设计构建适用于高效Rubisco羧化活性的筛选体系,以BWLac产乳酸菌株为宿主,在含有5%CO2的N2环境下厌氧培养,比较不同羧化活性Rubisco对细胞生长的影响,通过HPLC及LCMS检测总乳酸及固定CO2生成乳酸的产量评估筛选体系。【结果】通过终端代谢产物乳酸产生下拉力,以及甘油代谢产生的剩余还原力需要平衡消耗掉的设计靶点,增强Prk和Rubisco的固碳支路代谢通量,加强RuBP对细胞的毒性抑制作用,使细胞生长与Rubisco活性有效偶联,构建高通量筛选办法。在新构建的筛选体系中,Rubisco失活突变体BWLac/197不能生长,Rubisco和Prk双失活突变体BWLac/197-2021生长未受影响,菌落大小约1.58 cm。粗酶液羧化活性相差2倍以上的RBC1和7002,其细胞生长在筛选条件下受不同程度抑制,菌落大小分别有1.06 cm和0.65 cm。通过检测乳酸产量及甘油消耗量对筛选体系验证评估,RBC1消耗甘油1.39 g/L,产乳酸2.82 g/L,其中来自于NaH13CO3的标记乳酸含量为18.05μmol/L,比7002的相应检测结果高1.3-1.6倍,检测结果与筛选体系设计原理相符,即乳酸产量越高,甘油消耗越多,Rubisco羧化活性越高,细胞生长得越好。【结论】成功设计构建了高效Rubisco羧化活性筛选体系,为进化或探索更高羧化活性Rubisco提供有效的高通量筛选办法。
- 王斐张君丽张君丽蔡真赵春华蔡真李寅
- 关键词：乳酸CO2固定
- 光合生物固定CO2的关键酶和限速酶的分子改造
- 蔡真柳国霞张君丽李寅
- 光合生物固定CO2的关键酶和限速酶的分子改造
- 地球上所有有机物归根结底都源于光合作用对大气CO的固定。核酮糖-l,5-二磷酸羧化/加氧酶(Rubisco)是光合作用固定CO的第一步酶,也是整个光合固碳的关键酶。但是,由于Rubisco对CO的催化效率低(kcat约为...
- 蔡真柳国霞张君丽李寅
- 文献传递
- 天冬氨酸α羧化酶筛选体系的构建
- 天冬氨酸α羧化酶主要用于将底物天冬氨酸转化成β-丙氨酸,生物酶走向工业化的的两个的重要方面依然是高酶活和高稳定性。目前该酶的酶活可以达到2U/ml,产β-丙氨酸达到170 g/L,酶活已经达到工业化应用的水平。然而天冬氨...
- 张君丽
- 文献传递
- 一种气相色谱质谱检测系统及方法
- 本发明涉及微生物代谢复杂样品的检测技术领域。本发明提供了一种气相色谱质谱检测系统，其包括：第一柱箱色谱柱1、第二柱箱色谱柱2、中心切割单元3、三通阀4、质谱仪接口5、进样口6。本发明实现了微生物发酵液中的微量次级代谢产物...
- 柳国霞蔡真张君丽唐双焱
- 一种高L-天冬氨酸α羧化酶活性的工程菌及其在生产β-丙氨酸中的应用
- 本发明公开了一种工程菌及其在生产β-丙氨酸中的应用。本发明提供的工程菌，其构建方法依次包括如下步骤：（1）将目的蛋白的编码基因插入载体pET-30a(+)的多克隆位点，得到的重组质粒pET30-panD<Sub>B</S...
- 蔡真张君丽邓思颖李寅
- 文献传递
- 一种制备高效合成泛酸基因工程菌的方法及其应用
- 本发明通过将不同来源泛酸合成酶基因导入到大肠杆菌中，获得高产泛酸的基因工程菌。采用高效的大肠杆菌蛋白表达系统，异源表达多种不同来源的泛酸合成酶，获得高活性的泛酸合成酶菌株，该菌株可以高效表达泛酸合成酶，将底物泛解酸和β‑...
- 蔡真张君丽奇古王瑞研李寅
- 文献传递
