赵龙
- 作品数：2 被引量：5H指数：2
- 供职机构：包头市肿瘤医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 生物制品中猪细环病毒污染检测方法的建立和初步应用被引量：3
- 2015年
- 目的：建立生物制品中猪细环病毒（ Torque teno sus virus，TTSuV）污染的检测方法，并进行方法学分析及初步的应用。方法针对TTSuV保守序列设计引物和探针，建立荧光PCR方法，对方法的特异性、线性、精密度、最低检测限等参数进行验证，并对试验样本对检测的干扰性进行分析。利用该方法对猪全血样品、生产用细胞及轮状病毒疫苗样品进行检测，通过建立TTSuV分型检测的PCR方法对阳性样品进行分型。结果荧光PCR法的特异性较好，与不同种属的细小病毒、猴SV40病毒及猪圆环病毒无明显的交叉反应，TTSuV1和TTSuV2荧光PCR分别在109～103拷贝／μl和109～102拷贝／μl范围内线性较好，R2值达到0．993以上，TTSuV1和TTSuV2的最低检测限分别为1×103拷贝／μl和1×102拷贝／μl，试验内和试验间的Ct的精密度CV值均小于7％，试验内病毒拷贝数的CV值小于25％，试验间CV值小于45％。细胞样品成分对病毒检测无明显的干扰性。对20份猪全血样品进行检测，8份为阳性，其中1份为TTSuV1阳性，4份为TTSuV2阳性，3份为TTSuV1／2混合感染。 TTSuV1和TTSuV2型与标准株序列同源性分别为98％～99％和98％。对细胞样品和轮状病毒疫苗进行检测，结果均为阴性。结论成功建立了TTSuV荧光PCR检测法，能够用于生物制品TTSuV污染的检测，进一步提高了生物制品的安全性。
- 吴雪伶赵龙冯建平樊金萍赵翔孟淑芳
- 关键词：荧光PCR细胞
- STR图谱法从疫苗成品中鉴别生产用人源细胞株的研究被引量：2
- 2015年
- 目的:探讨采用短串联重复序列(STR)图谱分析法检测人二倍体细胞生产的疫苗成品,判定生产所用细胞基质种类的可能性,为疫苗的质量控制及监测等环节提供参考。方法:研究用疫苗均以人二倍体细胞为生产基质,品种包括水痘减毒活疫苗、甲肝减毒活疫苗、麻疹风疹联合减毒活疫苗、甲肝灭活疫苗、狂犬灭活疫苗,分别来自11个厂家共22批。其中甲肝灭活疫苗均经过纯化,且均以甲醛为灭活剂。狂犬灭活疫苗来自2个厂家,1家疫苗采用了柱层析纯化工艺,2家疫苗均以β-丙内酯为病毒灭活剂。首先提取疫苗成品中的DNA,然后采用STR图谱分析方法对DNA进行检测,并对所获得的指纹图谱与标准图谱数据进行比对,判定生产所用细胞的正确性。结果:对减毒活疫苗进行检测可准确地判定生产用细胞的种类,结果显示8家疫苗生产企业中1家使用了错误的细胞。在对灭活疫苗的检测中,无柱层析纯化工艺的狂犬灭活疫苗可得到良好的STR数据,且比对结果正确。经柱层析的狂犬灭活疫苗经酚抽提法提取的DNA检测可获得STR信号,尽管Penta E位点信号缺失也可判定出生产所用的细胞基质种类及正确性。含有铝佐剂的甲肝灭活疫苗检测均未获得STR图谱数据。进一步对2种病毒灭活剂进行初步分析,结果显示:利用β-丙内酯进行病毒灭活,对疫苗中STR检测存在干扰,甲醛灭活对检测无明显影响。结论:利用STR图谱分析法能够直接从人二倍体细胞生产的减毒活疫苗和不含铝佐剂的灭活疫苗中鉴别生产所用的细胞基质种类,可为疫苗生产的质量控制及监测等环节提供参考。
- 吴雪伶赵龙樊金萍曹守春孟淑芳
- 关键词：减毒活疫苗灭活疫苗
