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5-氮杂-2′-脱氧胞苷对小鼠海马神经元细胞系HT22细胞DNA甲基转移酶表达和细胞周期的影响被引量：4: 2018年; 目的:探究5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对小鼠海马神经元细胞系HT22细胞增殖及其对DNA甲基化转移酶(DNMT)表达的影响。方法:5-Aza-CdR处理HT22细胞,采用Real-time PCR和免疫印迹检测DNMT1、DNMT3A、DNMT3BmRNA及蛋白的表达;甲基转移酶活性试剂盒检测DNMTs活性;流式细胞仪对其细胞周期及凋亡进行检测。结果:5-Aza-CdR处理HT22细胞24h后,不同浓度5-Aza-CdR均显著抑制HT22细胞增殖,且使胞质空泡化。5-Aza-CdR降低了HT22细胞早期凋亡,但促进晚期凋亡,并诱导细胞周期发生S期阻滞。DNMT1和DNMT3A的mRNA和蛋白表达下降,但DNMT3B表达未发生明显变化。DNMT1和DNMT3B活性降低。结论:5-Aza-CdR可降低DNMT1和DNMT3A mRNA和蛋白表达以及DNMT1和DNMT3B活性,影响HT22细胞周期及凋亡。; 田小莉杨洁杨洁闫少春杨静邵国; 关键词：5-AZA-CDR 细胞周期 DNA甲基转移酶小鼠

5-aza-cdR对神经细胞NG108-15细胞周期的影响被引量：1: 2015年; 目的:观察DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase,DNMT)抑制剂5-氮-2'脱氧胞苷(5-aza-2'deoxycytidine,5-aza-cdR)对神经细胞系NG108-15细胞周期的作用,并探讨相关的机制。方法:NG108-15细胞用10μmol/L 5-aza-cdR处理,RTCA分析细胞指数,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡,8-PCR检测DNMTs及细胞周期相关基因CCND1和CCND2 mRNA的表达。结果:5-aza-cdR能抑制NG108-15细胞的增殖,5-aza-cdR处理细胞后使细胞周期发生变化,同时使DNMT1的表达降低(P<0.05)而DNMT3A和DNMT3B mRNA表达不变,并且CCND1和CCND2 mRNA表达也不变。结论:10μmol/L 5-aza-cdR可以抑制NG08-15细胞的增殖,其抑制作用可能是通过降低DNMT1表达实现的,这种抑制作用不影响CCND1和CCND2的表达。; 张柱霞孙明英杨洁姜树原刘友闫少春邵国; 关键词：NG108-15细胞细胞周期

5-aza-cdr对低氧预适应神经细胞NG108的DNMTs表达的影响被引量：1: 2015年; 目的观察低氧预适应和DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase,DNMT)抑制剂5-氮-2'脱氧胞苷(5-aza-2'deoxycytidine,5-aza-cdR)对神经细胞系NG108-15的DNMTs表达的影响,研究DNA甲基转移酶抑制剂对重复低氧NG08-15细胞的神经保护作用的可能分子机制。方法 NG08-15细胞随机分为药物处理组(5-aza-cdR)和正常组(control),每组又分为C组(未低氧)、H组(1%低氧处理8 h)和HP组(1%低氧/21%复氧4个循环后1%低氧预处理后低氧8h)处理,5-aza-cdR的浓度为10.0μM,Q-PCR检测DNMTs mRNA的表达。结果C,H和HP的DNMT1在5-aza-cdR和control组内和组间无显著性变化;在control组中,HP较H的DNMT3A mRNA表达降低(P<0.05),HP较C的DNMT3B mRNA降低(P<0.05);5-aza-cdR组中,H较C和HP的DNMT3B mRNA降低(P<0.05);HP的DNMT3B mRNA在5-aza-cdR组和control组之间有差异(P<0.05)。结论单纯低氧预适应可以使DNMT3A和DNMT3B mRNA表达降低,5-aza-cdR+低氧预适应可以影响DNMT3BmRNA的表达。; 孙明英张柱霞杨洁姜树原王光丽张颜波邵国; 关键词：低氧预适应 NG108-15细胞 DNA甲基转移酶

钒化钠对人食管癌细胞系EC109的增殖抑制作用与诱导凋亡作用: 2018年; 目的探索不同浓度钒化钠对食管癌细胞系EC109的抑增殖和促凋亡作用。方法体外培养食管癌细胞系EC109,给予0、0.1、1.0、5.0、10.0、50.0、100.0和200.0μmol/L钒化钠处理,分别培养15、30 min、1、2和4 h后,通过Western blot检测细胞周期蛋白Cyclin D1与细胞凋亡蛋白Caspase-3在不同时间、不同浓度的表达变化。给予以上相同浓度的钒化钠分别处理细胞4、12、24和48 h后,MTT法与流式细胞术检测不同时间、不同浓度的钒化钠对食管癌细胞系EC109细胞株的增殖与周期影响。结果蛋白印迹结果显示,在100~200μmol/L的浓度范围内随着钒化钠药物浓度的增加,药物处理时间的延长,Cyclin D1的表达呈现逐渐下降的趋势(P<0.05);当钒化钠浓度小于10μmol/L时,Caspase-3的表达变化无统计学意义(P>0.05),当处理浓度达到50μmol/L或者更高以及处理时间达到30 min甚至更长时,Caspase-3的蛋白表达水平明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。MTT法结果显示,钒化钠浓度达到50~200μmol/L时,EC109细胞的增值受到抑制(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,当钒化钠浓度为50~200μmol/L时,随着处理时间24和48 h时的增加,EC109细胞被阻滞在S期,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论一定浓度的钒化钠能明显抑制食管癌细胞系EC109的生长,表现出一定的抗肿瘤作用,为钒化钠成为食管癌的临床治疗药物提供实验依据。; 时静华杨洁田小莉许晟迪姜树原刘晓蕾闫少春邵国; 关键词：EC109细胞

透明细胞肾细胞癌组织中DNMT3B异构体表达及其整体甲基化的分析: 2016年; 目的检测透明细胞肾细胞癌组织中DNA甲基转移酶3B(DNA methyltransferase 3B,DNMT3B)异构体表达及其整体甲基化的变化,探讨这些变化与透明细胞肾细胞癌的关系。方法选取15例透明细胞肾细胞癌及其癌旁组织,应用Real-time PCR技术检测DNMT1、DNMT3A、DNMT3B与DNMT3B六种主要异构体的mRNA表达,应用Western blot法检验DNMT3B4蛋白表达;应用联合亚硫酸氢钠的限制性内切酶分析法(COBRA)分析重复序列Alu和LINE-1的甲基化水平。结果透明细胞肾细胞癌组织中DNMT3B4 mRNA和蛋白表达水平比癌旁组织高;重复序列Alu和LINE-1的甲基化水平在透明细胞肾细胞癌组织中比癌旁组织低。结论 DNMT3B4表达增加可能与整体甲基化降低及透明细胞肾细胞癌的发生有密切关系。; 高永胜杨洁尹树慧崔钧贺贾晓娥谢伟闫少春邵国; 关键词：DNA甲基转移酶3B

5-Aza-CdR对低氧NG108-15细胞的影响机制研究: 2016年; 通过使用DNA甲基转移酶(DNA methyltransferases,DNMTs)抑制剂5-氮-2'脱氧胞苷(5-aza-2'deoxycytidine,5-Aza-Cd R)和低氧干预神经细胞系NG108-15,旨为揭示5-Aza-Cd R、低氧、低氧预适应对NG108-15细胞增殖和细胞周期影响的相关机制。利用5-Aza-Cd R(10.0μmol/L)孵育NG108-15细胞后进行低氧与低氧预适应处理;使用倒置显微镜观察细胞形态的变化;通过RTCA分析细胞增殖指数;收集细胞后使用流式细胞仪检测各组细胞周期和细胞凋亡的变化情况;利用Real-time PCR检测甲基转移酶DNMTs和细胞周期相关基因在m RNA水平的表达变化情况。结果表明,5-Aza-Cd R和低氧抑制NG108-15细胞增殖,促进细胞早期和晚期凋亡,低氧预适应促进细胞的增殖。然而,5-Aza-Cd R处理后再低氧与低氧预适应,DNMTs和细胞相关周期基因的m RNA转录增加(P<0.05)。10.0μmol/L的5-Aza-Cd R联合低氧处理抑制细胞的增殖,低氧预适应对细胞的增殖有促进作用。; 张柱霞孙明英杨洁姜树原闫少春邵国; 关键词：NG108-15细胞低氧低氧预适应

6种人DNA甲基转移酶3B典型异构体的克隆、表达及对293A细胞增殖的影响: 2015年; 目的构建6种人DNA甲基转移酶(DNMT)3B典型的异构体的真核表达载体并对其进行过表达,初步探讨其在人胚肾细胞系293A中的生物学作用。方法以人HCT116 c DNA为模板,采用高保真PCR获得DNMT3B1和DNMT3B2的全长,并以DNMT3B2为模板,利用特异的引物扩增出DNMT3B3、DNMT3B4、DNMT3B5和DNMT3B7,将PCR产物连接到真核表达载体p CMV-2B上,并对上述载体进行Bam HⅠ、EcoRⅠ双酶切和测序鉴定,鉴定正确后,将重组质粒转染293A细胞并利用G418筛选出稳定表达的克隆株,MTT法检测细胞增殖活力。结果双酶切和测序结果表明克隆了6种人DNMT3B异构体CDS序列,经蛋白印迹检测,DNMT3B异构体在293A细胞中获得稳定表达;稳定过表达DNMT3B3、DNMT3B4和DNMT3B7可以抑制细胞增殖。结论构建了人DNMT3B异构体真核表达载体及获得了其稳定表达细胞株,DNMT3B异构体蛋白对胚肾细胞系293A的增殖有不同的作用。; 张柱霞孙明英杨洁姜树原石蕊闫少春邵国; 关键词：DNA甲基转移酶3B 异构体增殖

5-Aza-CdR和低氧对小鼠海马中蛋白磷酸酶-1γ表达及对学习记忆的影响被引量：5: 2015年; 通过使用去甲基化试剂5-氮-2'脱氧胞苷(5-aza-2'deoxycytidine,5-Aza-CdR)和低氧处理小鼠,从而揭示低氧和5-Aza-CdR对蛋白磷酸酶1γ(protein serine/threonine phosphatase-1γ,PP1γ)表达的影响以及对小鼠学习记忆的影响。水迷宫筛选小鼠,正常小鼠随机分为对照组和试验组2组,分别给小鼠大脑立体定位注射10g/L BSA和10μmol/L 5-Aza-CdR至右侧脑室,休息1周,水迷宫测试小鼠学习记忆能力情况,然后依次处死低氧后3、2、1、0d的小鼠。最后通过Real-time PCR检测蛋白磷酸酶1的转录水平的表达。5-Aza-CdR和低氧分别处理小鼠都会提高小鼠的学习记忆能力,抑制PP1γmRNA的转录水平,但是联合处理对小鼠的PP1γmRNA转录水平却没有影响。说明5-Aza-CdR和低氧抑制PP1γ的转录水平,促进小鼠海马区突触可塑性的形成。; 张柱霞孙明英杨洁姜树原刘友闫少春邵国; 关键词：5-AZA-CDR 低氧小鼠学习记忆

DNA甲基转移酶3B异构体研究进展: 2017年; DNA甲基化是表观遗传修饰的重要组成部分,它是在DNA甲基转移酶(DNMTs)的作用下将甲基加到二核苷酸CpG岛中胞嘧啶的第五位碳原子上。DNMT3B是真核生物细胞中一种非常重要的转移酶,有近40种异构体,本文主要对DNMT3B的异构体的构成、表达及在疾病中的作用等进行综述。; 田小莉杨洁闫少春邵国; 关键词：DNA甲基化 DNMT3B 异构体

促红细胞生成素在低氧预适应中的神经保护作用被引量：3: 2015年; 促红细胞生成素(EPO)是体内一种重要的糖蛋白激素,主要由胎肝和成人的肾脏产生。EPO的表达除受到转录因子的调控之外,还受到表观遗传学的调控。研究发现,EPO及其受体(EPOR)在中枢神经系统中广泛表达,提示其对中枢系统具有神经保护作用。低氧预适应是机体抗缺氧或缺血的一种内源性保护机制,它可以促进EPO表达,减轻低氧/缺血引起的神经元损伤。EPO主要通过激活一系列信号转导通路及多种可能的机制发挥神经保护作用。; 杨洁邵国; 关键词：促红细胞生成素低氧预适应神经保护

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杨洁

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