袁帅
- 作品数：16 被引量：71H指数：5
- 供职机构：广东检验检疫技术中心更多>>
- 发文基金：广东出入境检验检疫局科技计划项目广东省科技计划工业攻关项目国家质检总局科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 新疆出血热病毒实时荧光RT-PCR检测方法的假病毒阳性对照品制备被引量：3
- 2016年
- 目的制备安全、稳定的新疆出血热病毒实时荧光RT-PCR检测阳性对照品。方法人工合成含实时荧光RT-PCR扩增片段的新疆出血热病毒核苷酸序列,连接入慢病毒载体,将重组慢病毒载体与慢病毒包装载体共转染293T细胞,培养48 h后采用实时荧光RT-PCR方法检测假病毒包装情况,随后将包装成功的假病毒颗粒加核酸保护剂制备成阳性对照品,并进行稳定性试验。结果重组慢病毒载体与慢病毒包装载体共转染293T细胞后,将收集到的细胞培养上清采用实时荧光RT-PCR进行检测,结果显示10、100、1 000、10 000倍4个倍比稀释度扩增后所得的Ct值分别为13、19、25、33,显示含高浓度的假病毒颗粒。取经1 000倍稀释后制备的阳性对照品于37℃孵箱中放置0、3、7、15、21和30 d后,提取的RNA经实时荧光RT-PCR检测,所得Ct值在25~28之间,表明阳性对照品有较高的热稳定性。结论本研究通过慢病毒包装技术制备的假病毒颗粒,是新疆出血热病毒荧光RT-PCR核酸检测过程中理想的阳性对照品。
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- 关键词：新疆出血热病毒实时荧光RT-PCR
- 一种埃博拉病毒分型检测引物、探针和试剂盒
- 本发明公开了一种埃博拉病毒分型检测引物和探针，包括扎伊尔型埃博拉病毒的检测引物和探针、苏丹型埃博拉病毒的检测引物和探针、科特迪瓦型埃博拉病毒的检测引物和探针、本迪布焦型埃博拉病毒的检测引物和探针以及莱斯顿型埃博拉病毒的检...
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- 文献传递
- 我国口岸首例输入性寨卡病毒感染病例的实验室检测被引量：15
- 2016年
- 目的对从广州白云国际机场口岸入境的1例自委内瑞拉归国发热人员进行寨卡病毒实验室检测。方法同时使用自主研制的和中国疾病预防控制中心发放的实时荧光RT-PCR检测试剂,对发热人员的血清、全血、尿液、唾液和咽拭子等多种样本进行寨卡病毒核酸检测;对唾液样本进行寨卡病毒RT-PCR扩增和序列分析。结果入境第一天上午采集的血清、全血和咽拭子样本的实时荧光RT-PCR结果显示寨卡病毒核酸阳性,当天下午采集的血清样本检测结果显示核酸弱阳性,第二天采集的血清样本为寨卡病毒核酸阴性,但尿液和唾液样本仍为阳性,且唾液中病毒载量较高。RT-PCR结果显示,唾液样本扩增出了预期片段,测序结果表明该片段与巴西寨卡病毒毒株相应序列的同源性为99.8%。中国疾病预防控制中心复核检测确认为寨卡病毒核酸阳性。结论根据流行病学史、临床表现和病例样本核酸检测情况,确诊该入境人员为口岸截获首例、广东省首例、我国第二例输入性寨卡病毒感染病例。
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- 广东首例苏里南输入性寨卡病毒感染病例的实验室检测被引量：7
- 2017年
- 目的对从广州白云国际机场口岸入境的一例自苏里南归国发热人员进行寨卡病毒实验室检测。方法采集发热人员的血液和唾液样本,同时使用两种寨卡病毒实时荧光RT-PCR试剂进行寨卡病毒核酸检测。RT-PCR扩增寨卡病毒部分基因片段,并进行序列测定和同源性比较。基于扩增片段构建系统进化树,分析输入性病例的来源。结果实时荧光RT-PCR结果显示,该病例血清样本寨卡病毒核酸弱阳性、唾液样本寨卡病毒核酸阳性。RT-PCR扩增出预期大小约1.5Kb片段,测序结果表明该片段与巴西寨卡病毒株(GenBank号KX197250)相应序列的同源性为99%。系统进化树显示该病毒属亚洲谱系。结论根据患者流行病学史、临床表现和病例标本核酸检测情况,确诊该病例为广东首例从苏里南地区输入性寨卡病例。
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- 关键词：实时荧光RT-PCR核酸检测进化分析
- 科特迪瓦型埃博拉病毒实时荧光PCR方法的建立被引量：1
- 2018年
- 目的建立科特迪瓦型埃博拉病毒实时荧光PCR检测方法,并在广东口岸进行应用。方法分析埃博拉病毒基因组的同源性,设计3组引物和探针用于科特迪瓦型埃博拉病毒核酸检测。对不同浓度的科特迪瓦型埃博拉病毒体外转录RNA进行检测,确定最佳的引物和探针组合、用量,以及Mg^(2+)用量,建立科特迪瓦型埃博拉病毒实时荧光PCR方法。对建立的方法进行灵敏度、特异性和灵敏度分析,并用于广东口岸非洲入境发热人员血清样本的筛查。结果经筛选,引物Ebv-C-3F/Ebv-C-3R和探针Ebv-C-3P对10~2~10~5拷贝/ml的阳性质粒的检出率为100.0%,是最佳的引物和探针组合。优化后的实时荧光PCR体系中引物和探针终浓度分别为400 nmol/L和80 nmol/L,Mg^(2+)终浓度为2 mmol/L。方法的灵敏度为50拷贝/ml,重复性好、特异性强,对扎伊尔型、苏丹型、本迪布焦型和莱斯顿型埃博拉病毒阳性对照样本、马尔堡病毒阳性对照样本和广东口岸非洲发热入境人员血清样本检测均为阴性。结论建立的科特迪瓦型埃博拉病毒实时荧光PCR检测方法灵敏度高,特异性强,重复性好,对于境外输入性埃博拉病毒病病例的早期诊断和分型鉴别具有重要意义。
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- 关键词：埃博拉病毒实时荧光PCR灵敏度特异性
- 5种埃博拉病毒多重实时荧光PCR方法的建立被引量：3
- 2019年
- 目的建立扎伊尔型(EBOZ)、苏丹型(EBOS)、科特迪瓦型(EBOC)、本迪布焦型(EBOB)和莱斯顿型(EBOR)埃博拉病毒多重实时荧光PCR检测方法,一次检测可实现5种埃博拉病毒的分型。方法比较5种15株埃博拉病毒基因组的保守性和特异性,设计5种埃博拉病毒特异性引物和探针用于核酸检测,EBOZ、EBOS、EBOC、EBOB和EBOR分别使用FAM、VIC、Texas red、FAM、VIC荧光基团标记探针。分2管对5种埃博拉病毒进行多重实时荧光PCR检测,其中管1检测EBOZ、EBOS和EBOC,管2检测EBOB和EBOR。使用不同浓度的埃博拉病毒阳性对照质粒进行检测,确定最佳的引物、探针用量和Mg2+用量,建立5种埃博拉病毒分型检测的多重实时荧光PCR方法。同时,对建立的方法进行灵敏度、特异性和灵敏度分析。结果优化的多重实时荧光PCR方法的引物和探针终浓度分别为160 nmol/L和80 nmol/L,Mg2+终浓度为2 mmol/L。建立的方法灵敏度为103拷贝/ml,EBOZ、EBOS、EBOC、EBOB和EBOR实时荧光PCR检测10次的CV值分别为0.16%、0.25%、0.24%、0.22%、0.28%。埃博拉病毒多重实时荧光PCR对马尔堡病毒阳性对照,登革病毒、黄热病毒、基孔肯雅病毒、寨卡病毒、裂谷热病毒等阳性毒株检测结果为阴性。结论建立的5种埃博拉病毒多重实时荧光PCR检测方法灵敏度高,特异性强,重复性好,可用于口岸输入性埃博拉出血热病例的早期检测和分型鉴别。
- 师永霞黄吉城袁帅黎东红孙芳芳郑夔戴俊
- 尼帕病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立被引量：3
- 2019年
- 目的建立快速检测尼帕病毒的实时荧光RT-PCR方法。方法分析尼帕病毒N基因片段核苷酸序列的保守性,设计实时荧光RT-PCR引物和探针,优化引物和探针浓度,利用尼帕病毒DNA质粒作为阳性对照,确定最佳反应体系,并进行灵敏性、重复性、特异性检测。结果该方法对尼帕病毒DNA的最适线性检测范围为102~108拷贝/μl,检测下限为102拷贝/μl。对2个不同浓度(102、104拷贝/μl)的尼帕病毒DNA进行4次重复检测,具有良好的重复性。与登革病毒、基孔肯雅病毒、黄热病毒、乙脑病毒和汉坦病毒等无交叉反应。结论建立的尼帕病毒实时荧光RT-PCR法能准确、快速地检测尼帕病毒。
- 梁洁怡郑夔袁帅戴俊孙芳芳林泽凯师永霞李小波
- 关键词：尼帕病毒实时荧光RT-PCR核蛋白
- 黄热病毒可视化RT-LAMP检测方法的建立被引量：2
- 2019年
- 目的建立一种根据颜色变化判断结果的黄热病毒可视化RT-LAMP快速核酸检测方法。方法针对112株目前GeneBank上所有基因亚型黄热病毒株的5’端非编码区保守性核苷酸序列,设计黄热病毒特异性LAMP引物,建立黄热病毒可视化RT-LAMP检测方法。评价该方法的特异性、灵敏性,并用临床样本和模拟样本进行应用性验证。结果建立的RT-LAMP方法有较高的特异性,与登革病毒、裂谷热病毒、西尼罗病毒、乙脑病毒及基孔肯雅病毒无交叉反应;用体外转录的RNA模板评估,其灵敏性可达102拷贝/μl;用口岸发热病例血清样本验证,该方法可检出血清中的黄热病毒。结论建立的黄热病毒可视化RT-LAMP检测方法操作简便、快速、特异性好,可应用于黄热病毒的现场检测。
- 郑夔戴俊刘丽娟袁帅孙芳芳黄吉城
- 关键词：黄热病毒环介导等温扩增
- 重组酶介导扩增方法快速检测寨卡病毒被引量：5
- 2018年
- 目的 建立寨卡病毒一步法重组酶聚合酶等温扩增检测方法(reverse transcription recombinase aid amplification,RT-RAA),为国境口岸提供现场快速检测方法。方法 根据寨卡病毒基因组保守片段NS2a设计引物和探针,建立寨卡病毒RT-RAA检测方法。用合成的含有寨卡病毒基因序列的质粒测试方法的重复性和灵敏度,用登革病毒、基孔肯雅病毒、黄热病毒、乙脑病毒核酸测试方法的特异性。结果 寨卡病毒一步法RT-RAA检测时间短(<20min),对寨卡病毒阳性质粒检测下限为10~3拷贝/μl,重复性好,与登革病毒、基孔肯雅病毒、黄热病毒、乙脑病毒无交叉反应。结论 建立的寨卡病毒一步法RT-RAA方法具有快速、特异以及灵敏的特点,适用于口岸现场快速检测。
- 袁帅郑夔洪烨孙芳芳黄吉城李小波戴俊师永霞康晓平李裕昌
- 2013—2016年广东口岸输入性流感病例流行病学分析被引量：3
- 2018年
- 目的 对2013—2016年广东口岸输入性流感病例的流行病学特征进行分析,为流感的监测及其疫情防控提供依据。方法 采集广东25个口岸有咳嗽、咽痛、发热、体温≥37℃等症状的入境人员的鼻咽拭子样本,采用实时荧光RT-PCR法对样本进行流感病毒核酸检测和分型,通过Excel、SPSS 22.0等软件对流感病例进行描述和统计分析。结果 2013—2016年,广东口岸共采集14566名流感样病例样本,检出流感病例2984例,阳性率为20.49%。其中,2013年以甲型H1N1(2009)流感为主,2014和2015年均以季节性H3N2流感为主,2016年2-4月甲型H1N1(2009)流感和乙型流感共同流行,之后季节性H3N2流感逐月增多,成为2016年下半年的主要流行株。检出的流感病例主要来自我国香港地区,共检出1 339例,占总病例的44.87%。各年龄组均有流感病例检出,以25~59岁年龄组为主,共检出1 712例,占总流感病例数的57.37%。结论 2013—2016年,广东口岸输入性流感以季节性H3N2、乙型和甲型H1N1(2009)流感交替流行,各年龄组均有流感病例检出。
- 黎东红孙芳芳袁帅范秀莹郑夔李小波戴俊黄吉城师永霞
- 关键词：流感流行病学
