陈亚红
- 作品数：6 被引量：6H指数：2
- 供职机构：中南民族大学生命科学学院武陵山区特色资源植物种质保护与利用湖北省重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 一种水稻广谱抗性负调控基因OsSSI2的原核表达方法及表达载体
- 本发明提供了一种水稻广谱抗性负调控基因OsSSI2的原核表达方法，包括以下步骤：1、pGEX-6P1-OsSSI2原核表达载体的构建。2、重组蛋白的诱导表达：将构建好的pGEX-6P1-OsSSI2的重组质粒和pGEX-...
- 刘新琼陈亚红刘早利王春台
- 文献传递
- 水稻OsAAA1蛋白的原核表达载体构建及其可溶性表达研究被引量：3
- 2015年
- 为使用外源表达载体表达并纯化有活性的水稻ATP酶蛋白Os AAA1,构建了p ET-32a-Os AAA1原核表达载体并进行体外IPTG诱导表达和Ni＋柱亲和层析纯化.利用SDS-PAGE和Western Blot检测了目的蛋白.结果表明：将成功构建的p ET-32a-Os AAA1原核表达载体,转化到大肠杆菌Origami菌株后,在70~100 KD之间检测到可溶性目的蛋白带,并优化了诱导表达的较适温度、IPTG诱导浓度和诱导表达时间.故成功构建了p ET-32a-Os AAA1原核表达载体并获得了可溶性Os AAA1目的蛋白,为其后续研究奠定了基础.
- 刘新琼徐玮玉刘早利陈亚红程钢
- 关键词：OS原核表达载体可溶性蛋白
- 水稻广谱抗性负调控基因OsSSI2的克隆及原核表达
- 2016年
- 水稻Os SSI2基因负调控水稻的抗病反应,为了研究该基因的抗性机理,构建p GEX-6P1-Os SSI2原核表达载体,转化大肠杆菌BL21细胞后利用IPTG诱导外源蛋白表达并优化表达条件,使用SDS-PAGE和Western Blot检测分析表达产物。结果表明:成功构建了p GEX-6P1-Os SSI2原核表达载体后进行原核表达,在IPTG浓度为0.3 mmol/L,温度为25℃,诱导表达7 h,通过SDS-PAGE和Western Blot检测发现Os SSI2蛋白的可溶性表达量最多,为进一步研究水稻Os SSI2蛋白的抗性机理奠定了基础。
- 陈亚红刘早利王春台刘新琼
- 关键词：水稻原核表达载体
- 水杨酸应答新基因OsAAA1在水稻广谱抗病反应中的分子机理初步研究
- AAA-ATPases基因家族(ATPases associated with various cellular activities)是一类与多种细胞活动有关的ATPase类，在真核生物和原核生物中广泛存在。该基因家族...
- 陈亚红
- 关键词：水稻种植稻瘟病防治抗病育种
- 文献传递
- 水稻细胞色素P450基因家族成员CYP81A6基因RNAi载体构建被引量：1
- 2016年
- 水稻P450基因家族成员CYP81A6参与稻瘟病抗性反应,为了深入研究该基因的功能,本研究利用3次克隆的策略构建了该基因的RNAi载体。首先设计带有酶切位点的基因特异性引物,以c DNA为模板扩增3'非翻译区的特异片断,将目的产物连接到T载体上,经菌落PCR和酶切鉴定后进行测序。测序结果表示,目的片断已正确克隆到T载体上。然后利用双酶切通过2次亚克隆将目的片断以反向重复克隆到RNAi载体ds1301,通过分子检测表明,CYP81A6的RNAi载体构建成功,有助于后续的基因功能和作用机理的研究。
- 田迪刘早利陈亚红王春台刘新琼
- 关键词：水稻RNA干涉基因克隆
- 稻瘟病新抗性基因Pi39候选基因CRISPR/Cas9敲除载体的构建被引量：2
- 2016年
- Pi39是位于水稻第12染色体上的稻瘟病新抗性基因,为了明确其功能,本研究利用CRISPR/Cas9系统构建候选基因的敲除载体。通过对候选基因序列分析,将合成的靶位点序列插入入门载体p ENTR-sg RNA,再与表达载体Cas9发生重组。本研究首先在候选基因的第一个外显子区域找到了2个带有PAM序列的靶位点,将2个目的小片段依次克隆到p ENTR-sg RNA载体上。通过菌落PCR检测及测序,结果表明目的小片段插入位置正确。将入门载体与表达载体进行重组反应后,阳性克隆经菌落PCR和质粒DNA酶切鉴定并测序,结果表明重组载体构建成功。本研究利用CRISPR/Cas9系统构建敲除载体操作简单,耗时短,为进一步开展Pi39候选基因的功能研究奠定了基础。
- 刘早利陈亚红王春台刘新琼
- 关键词：水稻稻瘟病抗性基因
