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朱彤: 作品数：23 被引量：52H指数：4; 供职机构：山东省农业科学院更多>>; 发文基金：山东省自然科学基金国家自然科学基金山东省农业重大应用技术创新课题更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生自动化与计算机技术更多>>

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四种常见猪肠道病毒多重RT-PCR检测方法的建立及临床应用被引量：4: 2022年; 【背景】猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)、猪δ冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)和猪轮状病毒(porcinerotavirus,PoRV)是当前导致猪群发生病毒性腹泻的4种主要病原,并且常发生混合感染。【目的】建立一种可鉴别诊断这4种腹泻病毒病的检测方法,对于临床诊断具有重要意义。【方法】针对PEDV的M蛋白基因、TGEV的N蛋白基因、PDCoV的N蛋白基因和PoRV的VP7蛋白基因分别设计特异性引物,进而构建相应的重组质粒标准品。通过对PCR反应条件优化,建立可同时检测PEDV、TGEV、PDCoV和PoRV的多重RT-PCR检测方法。随后通过敏感性、特异性和重复性试验对该方法的有效性进行验证。【结果】敏感性试验结果显示,对PEDV-M、TGEV-N、PDCoV-N和PoRV-VP7重组质粒标准品的最低检测下限分别为1.75×10^(2)、1.5×10^(3)、1.6×10^(2)和1.6×10^(2)copies/μL;特异性试验结果显示,仅可检出本研究中的4种靶病毒,而猪群常见病毒CSFV、PRRSV、PCV2和PRV未能检出。重复性试验结果显示,选取10^(8)、10^(6)和10^(4)copies/μL3个不同浓度的重组质粒作为模板,其他条件不变,分别进行5次重复试验,5次试验均扩增出清晰、均匀的条带。对山东各地区送检的52份临床腹泻样品通过建立的四重RT-PCR方法进行检测,发现PEDV、TGEV、PDCoV和PoRV的阳性率分别为37%(19份)、6%(3份)、10%(5份)和25%(13份)。其中PEDV和PoRV混合感染2份(4%),PEDV和TGEV混合感染2份(4%),PEDV和PDCoV混合感染1份(2%)。通过单重RT-PCR对该多重RT-PCR临床样品检测结果进行重复验证,结果显示多重RT-PCR与常规单重RT-PCR结果符合率为100%。最后随机挑选5个检测为阳性的临床样本进行测序验证,结果均为相应病毒的基因片段。【结论】本研究建立了可同时检测PEDV、TGEV、PDCoV和PoRV的四重RT-PCR检测方法,研究结果为临床4; 辛忠昊焦安琪朱彤刘丽萍黄兵于江郭效珍吴家强; 关键词：多重RT-PCR 猪流行性腹泻病毒猪传染性胃肠炎病毒猪轮状病毒

牛肠道病毒VP2蛋白免疫原性研究及诊断方法的建立: 牛肠道病毒（Bovine enterovirus，BEV）属于小RNA病毒科，肠道病毒属成员，该病霉于1959年被Moll和Davis首次报道，已在全世界主要养牛国家和地区导致疾病发生和流行。目前该病在我国内蒙古、山东、...; 朱彤; 关键词：多克隆抗体免疫原性分子生物学检测; 文献传递

牛肠道病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用被引量：14: 2015年; 牛肠道病毒（Bovine enterovirus,BEV）是2011年在我国部分牛场新发现的一种消化道病毒病病原,因此亟需建立针对BEV快速、有效的检测方法。本研究根据BEV 3D基因保守序列,设计并合成一对特异性引物,建立了检测BEV的SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR方法。该方法与引起牛的病毒性腹泻的其它几种牛的病毒均无交叉反应,检出敏感度达7.13×10^1拷贝/μL,比常规RT-PCR检测方法高10倍。应用该方法检测了3个规模化奶牛场送检的41份奶牛腹泻样本和3份气溶胶样本,腹泻样品阳性检出率为39.02%（16/41）;3份气溶胶样本均为阳性,表明该方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可同时检测大量临床样本,本方法为BEV的早期快速诊断和定量分析提供了技术支撑。; 朱彤赵贵民沈付娆侯佩莉王洪梅李杰何洪彬; 关键词：荧光定量PCR 3D基因

一种构建H13N2亚型流感病毒反向遗传操作系统的方法及其应用: 本发明提供一种构建H13N2亚型流感病毒反向遗传操作系统的方法及其应用。所述构建方法包括：将H13N2亚型流感病毒内部8个基因PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M和NS共同导入宿主细胞，培养，即获得重组病毒。本发明...; 于志君朱彤吴家强; 文献传递

牛冠状病毒S蛋白抗原表位基因的串联表达及抗血清制备被引量：3: 2018年; 为了构建牛冠状病毒(BCoV)抗原表位基因原核表达载体,并制备多克隆抗体,利用基因合成技术获得BCoV S蛋白两段抗原表位(351 aa～403 aa、771 aa～784 aa)的基因串联体R,将其重组到pET-28a(+)质粒中,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,诱导表达抗原表位融合蛋白,用纯化的蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体。结果显示,成功构建了BCoV抗原表位基因重组表达质粒,获得了融合蛋白的抗血清,Western-Blot检测显示,该抗血清可与BCoV的融合蛋白特异性结合。表明成功构建了BCoV抗原表位基因原核表达载体并获得了BCo V抗血清,本研究为BCoV诊断试剂盒的开发和BCoV多表位疫苗的研究奠定了基础。; 程凯慧沈付娆邹积振朱彤苗自利张亮解晓莉杨宏军何洪彬; 关键词：牛冠状病毒抗原表位抗血清

一种检测牛C型流感病毒的引物对、试剂盒及其应用: 本发明提供一种检测牛C型流感病毒的引物对、试剂盒及其应用，属于生物工程和分子检测技术领域。所述引物对由引物F1和引物R1组成。采用本发明提供的引物对、试剂盒进行检测，检测方法简便快捷，重复性好，敏感度高，特异性强，可以实...; 于志君朱彤高月花吴家强陈为京; 文献传递

牛肠道病毒VP2基因的原核表达及其多克隆抗体的制备被引量：7: 2015年; 应用RT-PCR方法扩增牛肠道病毒(Bovine enterovirus,BEV)VP2基因,构建重组质粒pET32a(+)-VP2。转化大肠杆菌菌株BL21,IPTG诱导其表达VP2融合蛋白,Western-blot检测目的蛋白。将纯化的重组蛋白(pET32a(+)-VP2)免疫新西兰大白兔,制备VP2多克隆抗体,iELISA方法检测抗体效价,同时利用血清中和试验评估其诱导中和抗体的能力。SDS-PAGE分析结果显示,融合蛋白的相对分子质量为50 000,与预期值大小相符;iELISA检测其抗体效价为1∶25 600;血清中和试验表明,原核表达的VP2蛋白诱导产生的中和抗体效价为1∶107.4。结果表明,成功克隆和表达了具有免疫原性的VP2蛋白,其可诱导产生较高效价的多克隆抗体,为BEV血清学诊断方法的建立及亚单位疫苗的研制奠定了基础。; 朱彤侯佩莉刘晓王洪梅何洪彬李杰; 关键词：VP2 多克隆抗体

山东省农业科学院家禽研究所监测中心2022年第三季度检测数据统计分析被引量：2: 2022年; 1鸡病原检测结果统计分析2022年7~9月共收到鸡疑似病例样品799份。检测结果显示,以免疫抑制性病原、呼吸道疾病病原和肝损伤性病原检出率相对较高。其中,在免疫抑制性病原中,以鸡呼肠孤病毒(C-REOV)居多,其次是鸡传染性贫血病毒(CAV)、鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)、网状内皮增殖症病毒(REV)、禽白血病病毒(ALV)和马立克氏病病毒(MDV)。; 马秀丽刘丽萍高月花朱彤鞠艳李玉峰亓丽红徐怀英黄兵李琦吴静秦卓明宋敏训; 关键词：呼吸道疾病病原检测疑似病例

2023年监测中心第一季度禽病检测动态: 2023年; 1鸡病原检测结果统计分析2023年1~3月共收到鸡疑似病例样品696份。检测结果显示,以免疫抑制性病原、呼吸道疾病病原、肝损伤性病原和细菌病原检出率相对较高。在免疫抑制性病原中,以鸡传染性贫血病毒(CAV)居多,其次是呼肠孤病毒(REOV)、马立克氏病毒(MDV)和传染性法氏囊病毒(IBDV)。; 马秀丽刘丽萍高月花朱彤鞠艳于可响胡峰刘存霞李玉峰徐怀英黄兵李琦吴静秦卓明宋敏训; 关键词：呼吸道疾病呼肠孤病毒病原检测禽病疑似病例细菌病原

牛病毒性腹泻病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用被引量：6: 2019年; 本研究旨在建立一种灵敏度高、特异性强、重复性好,能快速检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的方法。根据BVDV的E2基因保守序列,设计合成一对特异性引物,建立了检测BVDV的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。将标准阳性样品10倍梯度稀释检测灵敏度,用能感染奶牛的其它病毒做对照检测特异性,用临床样本检测重复性。结果表明,该方法与能感染奶牛的其它几种病毒均无交叉反应,检出敏感度达4.87×10^1 copies/μL,比常规PCR检测方法高10倍。同时检测了5个规模化奶牛场送检的67份奶牛腹泻样本,其BVDV检出率为46.27%(31/67)。本研究成功建立了BVDV SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法,为BVDV的快速诊断和定量分析提供了技术支撑,具有很好的应用前景。; 任亚初朱彤楚会萌程凯慧解晓莉张亮孙阳阳杨宏军; 关键词：E2基因

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