俞欢
- 作品数：2 被引量：5H指数：1
- 供职机构：新疆大学生命科学与技术学院生物资源基因工程重点实验室更多>>
- 发文基金：病毒学国家重点实验室开放研究基金国家自然科学基金科技基础性工作专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 新疆出血热病毒截短糖蛋白的原核表达及抗体制备被引量：4
- 2015年
- 目的：原核表达纯化新疆出血热病毒79121毒株糖蛋白截短片段（ Gn、Gc1和Gc2）并分别制备其多克隆抗体。方法采用反转录PCR的方法克隆79121毒株Gn、Gc1及Gc2基因片段，并将其构建到原核表达载体pET-28a（＋）中，转化到E．coli BL21（DE3）中进行诱导表达，经镍柱亲和层析法纯化Gn-His、Gc1-His及Gc2-His融合蛋白，SDS-PAGE分析蛋白相对分子质量（ Mr ）。用纯化蛋白免疫新西兰白兔制备抗血清，ELISA和Western blot法检测血清效价和特异性。结果双酶切鉴定和测序证实构建的pET-28a-Gn、pET-28a-Gc1和pET-28a-Gc2重组表达载体正确，表达的融合蛋白Gn-His、Gc1-His和Gc2-His其Mr 分别约为25×103、33×103和34×103。 ELISA法检测抗体效价分别为1∶25600、1∶6400及1∶25600。 Western blot结果表明兔多克隆抗体均能特异性识别相应的重组蛋白。结论新疆出血热病毒截短糖蛋白的表达纯化和效价高、特异性好的兔抗血清的制备，为新疆出血热病毒的检测和糖蛋白生物学功能的深入研究提供资料。
- 俞欢汪梅芳张渝疆彭倩寇春达尔肯·托肯李阳李轶杰孙素荣
- 关键词：新疆出血热病毒糖蛋白原核表达多克隆抗体
- 新疆出血热病毒多表位基因的原核表达及间接ELISA方法的建立被引量：1
- 2016年
- 目的：原核表达纯化新疆出血热病毒（ XHFV） YL04057株的多表位肽,以其为抗原建立检测动物血清抗XHFV抗体的间接ELISA方法。方法依照对XHFV YL04057株核蛋白和糖蛋白氨基酸序列的亲水性和抗原决定簇位点分析,设计包含有保守性强的共6个优势B细胞表位的多表位基因片段,经串联重复成为双拷贝多表位基因 MEPX2,采用化学法合成后构建原核表达质粒pET-32a（＋）-MEPX2,经诱导表达和镍柱亲和层析纯化获得重组rMEPX2多表位肽,Western blot检测其抗原性,以其作为包被抗原采用方阵滴定法建立间接ELISA方法检测动物血清,并与商品化试剂盒检测结果进行比较。结果经双酶切鉴定和测序证实构建的重组表达质粒pET-32a（＋）-MEPX2正确,经SDS-PAGE分析和Western blot鉴定证实rMEPX2表达正确,相对分子质量约为49＆#215;103,能被His-tag单抗及天然感染XHFV的羊血清特异性识别。以纯化的rMEPX2为抗原建立了检测XHFV IgG抗体的间接ELISA方法,用此法对108份绵羊血清样品进行检测,并与双抗原夹心法商品化试剂盒检测比较,结果显示基于rMEPX2建立的检测方法具有较高的特异性。结论成功获得抗原性强的重组多表位肽rMEPX2,以其为抗原建立的间接ELISA方法可用于XHFV特异性抗体的检测。
- 俞欢雒涛常晨晨李阳邓菲张渝疆孙素荣
- 关键词：新疆出血热病毒原核表达间接ELISA
