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F基因型腮腺炎减毒活疫苗(人二倍体细胞)SP-A株工作种子批的建立与检定: 2021年; 目的:以人二倍体细胞KMB-17株为细胞培养基质建立F基因型腮腺炎减毒活疫苗SP-A株工作种子批。方法:在细胞工厂中以血清浓度为5%的MEM培养基培养KMB-17细胞,待细胞生长至单层后,分别按照0.020,0.050和0.100感染复数(multiplicity of infection,MOI)的比例接种病毒,逐日检测病毒滴度,绘制病毒增殖动力曲线以确定最适MOI和最佳收获时间。制备工作种子批,测定其病毒滴度及热稳定性,同时进行鉴别实验、无菌检查、分枝杆菌检查、支原体检查、病毒外源因子检查和小疏水蛋白(small hydrophobic protein,SH)核酸序列检查。利用该工作种子制备3批病毒收获液和疫苗原液并进行相关质量检定。结果:根据病毒增殖动力曲线,确定工作种子批的最适MOI为0.020,接种后d 7为病毒最佳收获时间,按此条件制备了工作种子批并完成检定,结果符合《中华人民共和国药典》2020年版三部腮腺炎减毒活疫苗毒种制造及检定质量要求。利用该工作种子批制备了3批病毒收获液和疫苗原液,经检定均符合《中华人民共和国药典》2020年版三部病毒收获液和原液的制造及检定规程要求。结论:建立F基因型腮腺炎减毒活疫苗SF-A株工作种子批,为后续F基因型腮腺炎减毒活疫苗的产业化提供了支持。; 邱恒田文志王微郑俊杰任芳芳段颖融李琦涵王晶晶; 关键词：腮腺炎疫苗检定

牛多瘤病毒PCR检测方法的建立及验证被引量：1: 2021年; 目的建立牛多瘤病毒(bovine polyomavirus,BPyV)的PCR检测方法,并进行验证。方法根据NCBI中登录的BPyV主要衣壳蛋白基因序列(BPyV_gp4 VP1,NC_001442.1)设计2对引物:9PF、9PR和3PF、3PR。合成BPyV主要衣壳蛋白基因序列,并与pUC57质粒构建重组质粒。以重组质粒为模板进行PCR扩增,优化退火温度。验证方法的灵敏度及特异性,并使用该方法对Vero、MDBK、KMB17和BT细胞的培养上清液进行检测。结果建立的PCR法可以BPyV-frag重组质粒为模板扩增出特异性条带,最适退火温度为60℃。2对引物的灵敏度均达2 fg/μL(558 copies/μL),引物对9PF、9PR的灵敏度略高于3PF、3PR;引物3PF、3PR和9PF、9PR以高浓度的BPV DNA(101.6 ng/μL)和BAV DNA(97.5 ng/μL)为模板时,均无扩增条带,微量BPyV-frag重组质粒产生扩增条带。Vero、MDBK、KMB17和BT细胞培养上清液中均未检出BPyV。结论成功建立了BPyV的PCR检测方法,该方法灵敏度高,特异性强,可用于检测细胞培养上清液中的BPyV。; 牛步青胡术然高有张海浩陈蕾西常亚军易力姚宇峰任芳芳; 关键词：聚合酶链反应细胞培养上清液

树鼩CD4及IL-6分子的克隆及分析: 2015年; 目的克隆野生型中缅树鼩的CD4及IL-6分子,并分析其核苷酸、氨基酸序列的多态性及重要的功能位点。方法经野生型树鼩尾静脉采血,分离外周血单核淋巴细胞,经植物血球凝集素(phytohemagglutinin,PHA)刺激24 h后,提取细胞总RNA,以其为模板,进行RT-PCR扩增,扩增产物插入p MD-19T载体,提取阳性重组质粒,经双酶切鉴定及测序;采用Lasergene分析目的基因核苷酸及氨基酸序列,并构建进化树,分析野生型树鼩与已知中缅树鼩的亲缘关系。结果野生型树鼩CD4全长编码序列的开放阅读框长度为1 365 bp,编码454个氨基酸,IL-6全长编码序列的开放阅读框为627 bp,编码208个氨基酸,22只野生型树鼩成功克隆出CD4分子,23只野生型树鼩成功克隆出IL-6分子。不同野生型中缅树鼩的CD4及IL-6分子有不同程度的核苷酸和氨基酸位点的突变,但分别有35%和26.7%的碱基突变为同义突变,且发生非同义突变的位点对树鼩CD4和IL-6分子重要的功能位点无影响。由CD4核苷酸及氨基酸序列构建的系统进化树基本一致;由IL-6核苷酸及氨基酸序列构建的系统进化树中,23只野生树鼩分为2个分支。结论 CD4和IL-6分子具有重要功能的氨基酸位点是保守稳定的,为今后树鼩CD4和IL-6单克隆抗体的制备及树鼩实验动物模型的建立奠定了基础。; 任芳芳徐婧雯张雪梅吴忠香马娜卢孔杰董少忠; 关键词：树鼩 CD4 IL-6 克隆系统进化树

人用疫苗生产用工作细胞库Vero细胞的鉴别被引量：3: 2017年; 目的采用两种不同的方法进行人用疫苗生产用工作细胞库Vero细胞的鉴别,为提高人用疫苗生产用细胞的准确性及疫苗的安全性提供保障。方法采用短串联重复序列(short tandem repeat,STR)-PCR基因分型法对本所疫苗生产用Vero细胞的8个STR位点(D8S1106、D1S518、D6S1017、D17S1304、D4S2408、D5S1467、D19S245和DYS389)进行测定,并与文献报道的结果进行比对分析;采用染色体核型检查法,将Vero细胞经Giemsa染料染色,于显微镜下精确计数100个细胞的染色体后,统计染色体数为58或60条的细胞所占比例。结果 STR基因分型得到的特征性图谱与文献报道的结果完全相同,未出现三单位基因,且STR的重复数完全相同;高倍镜下精确计数100个细胞染色体数为58或60条的细胞所占比例为79%。结论本所疫苗生产用工作细胞库Vero细胞为正确细胞株,不存在污染或交叉污染的情况,为本所人用疫苗的安全性和准确性提供了保障。; 钱兴丽宋彩花任芳芳赵勇段男李娅娴俞建昆洪超杨晓蕾; 关键词：非洲绿猴肾细胞细胞鉴别染色体核型分析

Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗研究进展被引量：5: 2015年; 口服脊髓灰质炎减毒活疫苗(OPV)和脊髓灰质炎灭活疫苗(IPV)在消灭脊髓灰质炎的过程中发挥了极大的作用。在全球消灭脊髓灰质炎的关键时刻以及在后脊髓灰质炎时代,更需要价格低廉且安全性好的IPV,以减毒Sabin株制备的IPV应运而生。目前全球已有4个国家的研究机构研制的Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗或百日咳-白喉-破伤风-Sabin株脊髓灰质炎联合疫苗完成或进入到临床试验阶段。而最近中国医学科学院医学生物学研究所研发的Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗已完成生产注册申请,这将对我国乃至全球、特别是发展中国家消灭脊髓灰质炎病毒发挥至关重要的作用。本文主要以Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗的临床试验研究最新进展做一综述。; 任芳芳董少忠; 关键词：脊髓灰质炎病毒口服脊髓灰质炎减毒活疫苗脊髓灰质炎灭活疫苗

树鼩CD4蛋白多克隆抗体的制备及检测被引量：1: 2016年; 目的原核表达、纯化树鼩CD4蛋白并制备多克隆抗体,检测树鼩体内的CD4蛋白.方法克隆树鼩CD4基因并连接到表达载体,构建重组质粒pET30a（＋）-CD4和pGEX-5X-1-CD4,表达并纯化重组蛋白His-CD4和GST-CD4,用不同佐剂[弗氏佐剂、MF59和A1（OH）3]制备多抗,用Western blot法检测血清抗体特异性.结果蛋白表达产物His-CD4和GST-CD4的相对分子质量分别约为53.5×103和70.0×103,纯化后蛋白浓度分别为600 μg/mL和1 mg/mL;三组佐剂均能诱导产生抗体,抗体几何平均滴度（Geometric Mean Titer,GMT）的比较结果为：弗氏佐剂组（GMT：97 420）＞Al（OH）3佐剂组（GMT：67 202）＞MF59佐剂组（GMT：55 128）;其中弗氏佐剂组显著高于原蛋白组（P＜0.001）;Al（OH）3组显著高于原蛋白组（P＜0.01）;而MF59组显著高于原蛋白组（P＜0.05）.结论制备了特异性良好的小鼠抗血清,能够特异性地结合树鼩的CD4蛋白.为下一步本实验室制备CD4单克隆抗体、CD4蛋白分子的功能研究以及树鼩的病毒感染模型等免疫相关实验的进行提供了基础.; 卢孔杰徐婧雯张雪梅吴忠香任芳芳马娜巩蔚严丽蔚朱文兵董少忠; 关键词：树鼩纯化多克隆抗体

人用疫苗检定用MRC-5和人横纹肌肉瘤细胞的短串联重复序列图谱鉴定: 2021年; 目的用短串联重复序列(short tandem repeat,STR)基因分型法对人用疫苗检定用MRC-5和人横纹肌肉瘤细胞进行鉴定,确认无污染。方法选取人源细胞的20个STR位点进行等位基因PCR扩增及荧光检测,将得到的STR图谱与美国典型培养物保藏中心和德国微生物菌种保藏中心数据库比对分析。结果两株细胞均得到清晰的STR特征性图谱,未出现3单位基因,在两个数据库中均找到与其细胞分型完全匹配的细胞株。结论人用疫苗检定用MRC-5和人横纹肌肉瘤细胞均为正确细胞株,不存在污染和交叉污染。; 宋彩花段男任芳芳高有杨欢李娜雷银瓶蔡秋龙乔燕易力; 关键词：短串联重复序列

细菌内毒素凝胶法在疫苗检定中的适应性应用和影响因素排除被引量：2: 2017年; 研究了内毒素凝胶测定法在疫苗及原辅料检定中的适应性及其影响因素.结果显示:(1)各批次疫苗采用凝胶法检测,干扰试验均成立,检测结果均符合标准;(2)水温在下限36℃和上限38℃时凝结效果均有所下降,须严格控制水温.(3)进口牛血清凝胶法适应性差,采取10倍稀释后70℃加热10min的方法可消除干扰,或采取动态浊度法也可解决.; 段男王微刘杰刘杰任芳芳谢忠平; 关键词：人用疫苗原辅料

人用疫苗生产用细胞、胰酶及疫苗成品中猪细环病毒PCR检测方法的建立及验证被引量：3: 2018年; 目的建立人用疫苗生产用细胞、胰酶及疫苗成品中猪细环病毒(Torque teno sus virus,TTSu V)的PCR检测方法,并进行验证。方法根据Gen Bank中登录的TTSu V1(JN688927)及TTSu V2(AY823991)的序列,合成TTSu V1及TTSu V2基因组部分DNA序列,连接于PUC57质粒上,制备重组质粒,以重组阳性质粒DNA为模板,PCR扩增316 bp的TTSu V1片段及252 bp的TTSu V2片段,同时验证方法的灵敏度和特异性。并采用该方法对2批0.1%胰酶、Vero、KMB17、MRC5、Hep2、BT细胞及6批疫苗[3批Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(inactivated poliomyelitis vaccine made from Sabin strain,SIPV)收获液、1批SIPV成品、1批冻干甲型肝炎减毒活疫苗[hepatitis A(live)vaccine,freezedried,f HAV]成品、1批肠道病毒71型(enterovivus type 71,EV71)灭活疫苗成品]进行检测。结果建立的PCR法最低分别可检出10 fg/μL TTSu V1和0.01 fg/μL TTSu V2的目的基因;该方法可特异性扩增出TTSu V1和TTSu V2的目的基因条带。2批0.1%胰酶、Vero、KMB17、MRC5、Hep2、BT细胞及6批疫苗均未检出TTSu V1及TTSu V2。结论成功建立了疫苗生产用原材料、细胞、疫苗收获液及成品中TTSu V的PCR检测方法,且该方法具有较高的灵敏度和特异性,可用于本所疫苗生产中对TTSu V的检测。; 任芳芳钱兴丽宋彩花陈巍赵勇刘信毅洪超杨晓蕾; 关键词：胰酶减毒活疫苗

人用疫苗及生产用细胞中猪圆环病毒PCR检测方法的建立及验证被引量：3: 2018年; 目的建立人用疫苗及生产用细胞中猪圆环病毒1型(porcine circovirus 1,PCV1)和2型(PCV2)PCR检测方法,并进行验证。方法参照Gen Bank中登录的PCV1(KC447455)和PCV2(AY578327)序列,全基因组合成PCV1和PCV2基因序列,以合成的PCV1和PCV2全基因组序列DNA为模板,进行PCR扩增,对PCR反应中的退火温度进行优化。对优化后的PCR方法进行灵敏度和特异性验证,并用该方法检测疫苗生产用细胞KMB_(17)、Vero工作种子批、脊髓灰质炎减毒活疫苗(oral poliomyelitis vaccine,OPV)收获液、冻干甲型肝炎减毒活疫苗(freeze-dried hepatitis A vaccine,f HAV)成品、肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)灭活疫苗收获液及成品、Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(inactivated poliomyelitis vaccine prepared with Sabin strain,SIPV)收获液及成品的PCV1和PCV2。结果优化后的退火温度为63℃,建立的PCR方法最低可检测出10^(-1)fg/μL的目的基因,仅对PCV基因组DNA能扩增出特异性条带。用该方法检测生产用细胞KMB_(17)及Vero工作种子批、OPV收获液、f HAV成品、EV71灭活疫苗收获液及成品、SIPV收获液及成品,均未检出PCV1和PCV2。结论成功建立了生产用细胞种子、疫苗收获液及成品中PCV的PCR检测方法,该方法具有较高的灵敏度和较强的特异性,能够用于本所生物制品生产用细胞种子、疫苗收获液及成品中PCV污染的检测,从而提高生物制品的安全性。; 钱兴丽任芳芳宋彩花段男李娅娴陈巍赵勇袁梅李亚东俞建昆杨晓蕾洪超; 关键词：疫苗猪圆环病毒聚合酶链式反应

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任芳芳

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