熊辉 作品数:15 被引量:56 H指数:5 供职机构: 黑龙江中医药大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 黑龙江省教育厅科学技术研究项目 黑龙江省自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
大黄酚及P38阻断剂对紫外线诱导人永生化表皮细胞光老化的影响及机制研究 被引量:1 2017年 目的 研究大黄酚及P38阻断剂SB203580抑制中波紫外线诱导的人永生化表皮细胞(HaCaT immortalizedhuman epidermal cells,HaCaT)光老化的作用及其作用机制.方法 采用MTT法检测不同浓度的大黄酚及SB203580对HaCaT细胞增殖的影响;将细胞按随机数字表法分为空白组、模型组、大黄酚组、P38阻断剂组.培养24 h后,大黄酚组及P38阻断剂组分别加入10-6 mol/L大黄酚及10-7 mol/L SB203580溶液.继续培养24 h,除空白组外,其他各组细胞于紫外灯下照射,照射强度0.61 mW/cm2,照射时间7 min,照射距离10 cm.继续培养24 h后,采用MTT法检测各组细胞的增殖活性;Western Blot检测各组细胞中P38、磷酸化P38(P-P38)、TNF-α 及IL-6蛋白表达.结果 与空白组比较,模型组HaCaT细胞增殖率降低(P〈0.01);与模型组比较,大黄酚组及P38阻断剂组HaCaT细胞增殖率升高(P〈0.01);与模型组比较,大黄酚组及P38阻断剂组细胞P-P38[(0.419±0.029)、(0.398±0.015)比(0.497±0.051)]、TNF-α[(0.435±0.025)、(0.411±0.021)比(0.509±0.040)]及IL-6[(0.457±0.027)、(0.432±0.018)比(0.478±0.036)]蛋白表达降低(P〈0.01).结论 大黄酚及SB203580可抑制紫外线诱导的HaCaT细胞光老化,其作用机制可能与抑制P38MAPK通路及炎症因子表达有关. 熊辉 杨柳 李建民 王业秋 胡中花 耿放 张宁关键词:大黄酚 光老化 补阳还五汤的HPLC指纹图谱研究 被引量:6 2016年 目的:采用HPLC法建立补阳还五汤的指纹图谱,对多批成方制剂进行质量控制。方法:实验采用Welch Materials XB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm;5μm),乙腈-0.2%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,柱温为35℃;流速为1.0 m L/min;检测波长为280 nm进行实验,通过中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(版本2004 A)结合"相关系数法"和"夹角余弦法",对10批补阳还五汤的色谱图进行比较,建立平均值生成的共有模式并指认各峰归属。结果:建立了补阳还五汤的HPLC指纹图谱,以阿魏酸作为参照物,得到22个共有峰,与对照指纹图谱的相似度比较分析,10批样品的指纹图谱均在0.99以上。结论:补阳还五汤指纹图谱的构建和共有峰的确定可为补阳还五汤成分分析和质量控制提供依据。 刘斌 熊辉 朴成玉 祁永华 曲岩 董晓红 陈景华 耿放关键词:补阳还五汤 指纹图谱 高效液相色谱法 染料木素对人胚皮肤成纤维细胞胶原、基质金属蛋白酶和基质金属蛋白酶组织抑制剂mRNA表达的影响 2015年 目的:探讨染料木素对人胚皮肤成纤维细胞(CCC-ESF-1)胶原(collagen, Col)、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)和基质金属蛋白酶组织抑制剂(tissue inhibitors of matrix metalloproteinase, TIMP)mRNA表达的影响。方法体外培养的CCC-ESF-1细胞按随机数字表法分为空白对照组、雌二醇组以及染料木素小、中、大剂量组。采用MTT法检测细胞活力,RT-PCR技术检测ColⅠ、ColⅢ、MMP-1、TIMP-1和TIMP-2 mRNA表达。结果与空白对照组比较,雌二醇组、染料木素中剂量组[(0.451±0.037)、(0.446±0.047)比(0.385±0.061)]均可促进CCC-ESF-1细胞增殖(P均<0.05),且雌二醇组、染料木素中剂量组细胞 ColⅠ[(0.960±0.012)、(0.929±0.015)比(0.812±0.014)],Col Ⅲ[(0.892±0.009)、(0.824±0.022)比(0.768±0.025)]、TIMP-1[(0.841±0.023)、(0.838±0.053)比(0.751±0.027)]、TIMP-2[(0.456±0.017)、(0.448±0.036)比(0.381±0.029)]mRNA 水平较空白组增高(P 均<0.01),MMP-1[(0.398±0.043)、(0.402±0.044)比(0.525±0.006)]mRNA水平较空白组降低(P均<0.01)。结论染料木素可促进 CCC-ESF-1细胞增殖,可能与上调 ColⅠ、Col Ⅲ、MMP-1、TIMP-1、TIMP-2以及下调MMP-1有关。 徐红丹 李孟 高晓波 胡中花 熊辉 王志刚 耿放关键词:染料木黄酮 胶原 基质金属蛋白酶1 基质金属蛋白酶抑制物 甘草次酸和甘草甜素雌激素样作用研究 被引量:10 2017年 目的探讨甘草次酸和甘草甜素两种三萜类成分的雌激素样作用,为开发新的活性植物雌激素成分奠定基础。方法采用溴化噻唑蓝四氮唑(MTT)法观察两种三萜成分对雌激素受体(ER)阳性人乳腺癌细胞系MCF-7细胞增殖的影响,Western Blot法和半定量RT-PCR法测定两种三萜成分对MCF-7细胞ER亚型蛋白及mRNA表达的影响。实验数据(±s)采用SPSS 23.0进行统计分析,基于单因素方差分析的方法,组间比较用SNK法和LSD法。结果 100μmol/L和10μmol/L甘草甜素能够抑制MCF-7细胞的增殖;100μmol/L、1μmol/L和10-2μmol/L甘草次酸能够促进MCF-7细胞的增殖;10μmol/L的甘草次酸可诱导MCF-7细胞ERα、ERβ蛋白表达,mRNA表达均显著升高(P<0.05);加入1×10^(-7)μmol/L的雌激素受体拮抗剂ICI182780均能抑制甘草次酸的以上效应。结论甘草次酸具有促进MCF-7细胞增殖作用,其作用机制可能是上调MCF-7细胞ERα、ERβ基因和蛋白的表达,显示有雌激素样作用,且其雌激素样作用可能是ER介导产生的。抗雌激素样作用的甘草甜素的作用机制还有待于深入研究。 李建民 杨柳 王业秋 胡中花 熊辉 于修芳 徐红丹 张宁 刘海洋 耿放关键词:植物雌激素 MCF-7细胞 三萜类 补骨脂素对人皮肤成纤维细胞衰老相关基因的调控作用 被引量:9 2015年 目的研究补骨脂素对人皮肤成纤维细胞(ESF-1)衰老相关基因的影响。方法以雌二醇为阳性对照,采用MTT法检测补骨脂素高、中、低剂量组(100,10,1μmol·L-1)对细胞增殖的影响,用RT-PCR技术检测补骨脂素作用于ESF-1细胞后对衰老相关基因Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)、Ⅲ型胶原蛋白(ColⅢ)、基质金属蛋白酶1(MMP-1)、基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)及基质金属蛋白酶抑制剂2(TIMP-2)mRNA表达水平的影响。结果补骨脂素中剂量组的作用与雌二醇相似,能使ESF-1细胞的增殖明显提高,同时使ColⅠ、ColⅢ、T I M P-1、TIMP-2 mRNA的表达水平显著增强,MMP-1 mRNA的表达水平显著降低。结论补骨脂素具有促E S F-1细胞增殖的作用,可促进胶原蛋白合成,提示其具有潜在的抗皮肤衰老作用。 胡中花 祁永华 熊辉 徐红丹 高晓波 刘国良 张宁 刘海洋关键词:补骨脂素 成纤维细胞 抗皮肤衰老 基质金属蛋白酶1 基质金属蛋白酶抑制剂1 补骨脂素对中波紫外线导致人皮肤HaCaT细胞光老化的保护作用 被引量:9 2017年 目的:研究补骨脂素对中波紫外线(UVB)导致人皮肤HaCaT细胞光老化的保护作用及其作用机制。方法:选择不同浓度的补骨脂素,MTT法筛选药物的浓度;使用中波紫外线(UVB)照射永生化的HaCaT细胞建立UVB光老化模型;使用三种不同浓度的补骨脂素处理光老化模型,MTT法检测细胞的增殖及氧化试剂盒检测细胞中氧化酶的活性。RT-PCR及Western Blot分别检测JNK和白介素-8(IL-8)mRNA及蛋白表达量。结果:与空白组相比,10^(-7)mol/L、10^(-6)mol/L、10^(-5)mol/L补骨脂素组对HaCaT具有无明显的增殖作用(P>0.05);与模型组相比,10^(-7)mol/L、10^(-6)mol/L、10^(-5)mol/L补骨脂素组对HaCaT具有无明显的增殖作用(P>0.05),但是10^(-7)mol/L、10^(-6)mol/L、10^(-5)mol/L补骨脂素组SOD、GSH、CAT活性升高(P<0.01),细胞JNK、IL-8 mRNA表达量均降低(P<0.01),细胞JNK、IL-8蛋白表达量均降低(P<0.05或P<0.01)。结论:补骨脂素能够显著的保护HaCaT细胞的光老化,其机制可能与增强抗氧化酶活性,及抑制JNK信号通路,减少炎症因子的分泌有关。 李建民 杨柳 王业秋 张宁 陈丽娟 胡中花 徐艳明 李娜 熊辉关键词:补骨脂素 UVB 光老化 JNK信号通路 雌激素受体介导的柚皮苷抗Aβ_(25-35)损伤PC12细胞凋亡作用研究 被引量:4 2023年 目的探讨雌激素受体介导的柚皮苷(NG)抗β淀粉样蛋白25-35(Aβ_(25-35))诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞的凋亡作用及其与雌激素受体(ER)信号通路的关系。方法实验分为空白组、Aβ_(25-35)组、E2+Aβ_(25-35)组、NG+Aβ_(25-35)组、ICI182780+E2+Aβ_(25-35)组、ICI182780+NG+Aβ_(25-35)组。实验采用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(WB)检测细胞Bax、Bcl-2和Caspase-3的表达;RT-qPCR法检测细胞凋亡因子mRNA的表达。结果Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞术结果显示,与空白组相比,Aβ_(25-35)组细胞凋亡率升高(P<0.01);与Aβ_(25-35)组相比,NG+Aβ_(25-35)组细胞凋亡率降低(P<0.01);与NG+Aβ_(25-35)组相比,ICI182780+NG+Aβ_(25-35)组细胞凋亡率升高(P<0.01)。WB结果显示,与空白组相比,Aβ_(25-35)组细胞Bax和Caspase-3蛋白表达量升高(P<0.01),Bcl-2则相反(P<0.01);与Aβ_(25-35)组相比,E2+Aβ_(25-35)组Bax和Caspase-3蛋白表达量降低(P<0.01),Bcl-2则相反(P<0.01);雌激素受体介导的NG的作用与E2相似,而ICI182780逆转了NG的作用。RT-qPCR结果显示,NG对细胞Caspase-3、Bax和Bcl-2 mRNA表达的影响与蛋白结果一致。说明NG是通过激活ER信号通路发挥抗凋亡作用,作用与E2一致。结论雌激素受体介导的NG有明显的抗凋亡作用,通过提高Bcl-2的正常表达,降低Bax和Caspase-3的正常表达发挥抗凋亡作用,其抗凋亡作用可能经ER介导。 王媛 武凤 熊辉 徐艳明 雷霞 徐红丹 孙慧峰 张宁 杨波关键词:柚皮苷 Β淀粉样蛋白25-35 雌激素受体 抗凋亡作用 松脂醇二葡萄糖苷对人皮肤成纤维细胞胶原蛋白分泌机制的研究 被引量:3 2017年 目的观察松脂醇二葡萄糖苷(pinoresinol diglucoside,PDG)对人皮肤成纤维细胞ESF.1细胞胶原蛋白分泌的基因调控作用,探讨PDG对烧伤皮肤的修复机制。方法体外培养细胞按随机数字表法分为空白组,雌二醇组,PDG高、中、低剂量组。PDG高、中、低剂量组分别加入100、10、1μmol/L的PDG溶液,雌二醇组加入100μmol/L的雌二醇。采用MTT法检测细胞增殖活性。采用RT-PCR技术测定细胞中I型胶原蛋白(collagenI,ColI)、III型胶原蛋白(Col III)、组织金属蛋白酶抑制剂(tissueinhibitors of matrix metalloproteinase,TIMP)-1、TIMP-2、MMP.1mRNA表达水平。结果与空白组比较,雌二醇组、PDG中剂量组ESF-1细胞增殖率[(0.559±0.027)、(0.552±0.034)比(0.489±0.027)]升高护〈0.05);雌二醇组与PDG中、低剂量组细胞ColI[(0.958±0.021)、(0.929±0.031)、(0.916±0.015)比(0.844±0.022)]、Col III[(0.783±0.038)、(0.918±0.021)、(0.855±0.017)比(0.678±0.024)]、TIMP-1[(0.939±0.025)、(0.889±0.036)、(0.853-0.015)比(0.780±0.023)]、TIMP-2[(0.507±0.024)、(0.655±0.037)、(0.572±0.025)比(0.405±0.062)]mRNA表达水平升高(P〈0.05或P〈0.01),MMP-1[(0.3434-0.038)、(0.4074-0.046)、(0.435±0.037)比(0.519±0.041)]mRNA表达水平下降(P〈0.05或P〈0.01)。结论PDG可提高ESF-1细胞的增殖活性,促进相关胶原蛋白和TIMP的表达,抑制MMP的表达,减少胶原的降解,从而发挥修复烧伤皮肤的作用。 高晓波 徐红丹 祁永华 熊辉 胡中花 刘海洋 耿放关键词:烧伤 松脂醇二葡萄糖苷 胶原 基质金属蛋白酶类 白桦脂醇对人皮肤成纤维细胞胶原蛋白及相关蛋白酶基因的调控机制研究 被引量:5 2016年 目的研究自桦脂醇对人皮肤成纤维细胞(ESF-1)相关抗衰老基因mRNA的调控作用,探讨白桦脂醇对皮肤皱纹的修复机制。方法将细胞分为空白对照组,雌二醇组,白桦脂醇高、中、低剂量组。采用MTT法测定各组细胞活力,RT-PCR法测定各组细胞中I型及Ⅲ型胶原蛋白(collagen,Col)、基质金属蛋白酶抑制剂(tissueinhibitors of matrix metalloproteinase,TIMP)1和2、基质金属蛋白酶1(matrix metallo Droteinase1,MMP-1)mRNA的表达水平。结果与空白对照组比较,雌二醇组与白桦脂醇中剂量组细胞增殖率[(0.455±0.037)、(0.445±0.040)比(0.385±0.601)]增高(P〈0.05);ColImRNA[(0.960±0.012)、(O.929±0.015)比(0.842±0.014)],ColIIImRNA[(0.892±0.009)、(0.824±0.022)比(O.768±0.025)]、TIMP.1mRNA[(0.938±0.026)、(0.878±0.035)比(0.796±0.022)]、TIMP-2mRNAl(0.557±0.025)、(0.506±0.036)比(0.436±0.063)]表达水平均升高(P〈0.01)。结论白桦脂醇通过促进细胞增殖,提高Col合成及相关蛋白酶的表达等途径发挥对皱纹的修复作用。 张丽宏 熊辉 胡中花 刘国良 徐红丹 张宁 李建民关键词:皮肤衰老 胶原 基质金属蛋白酶类 温肾降浊散治疗大鼠C-BSA肾炎模型的代谢组学研究 被引量:2 2015年 目的:通过代谢组学方法探究温肾降浊散治疗大鼠阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)肾炎模型的作用机理。方法:以GC-MS法测定温肾降浊散治疗前后C-BSA肾炎模型大鼠血清中内源性代谢产物,计算其含量变化,结合主成分分析法对这一变化过程进行模式识别。结果:确定了血清中39种代谢产物,经方法学考察,其精密度良好,制备后的样品在12 h内稳定,方法重复性良好。对内源性代谢物数据进行PCA主成分分析、OPLS-DA分析和t检验分析,确定了15个具有显著贡献率的潜在生物标记物;与正常组比较,模型组大鼠血清中乳酸、苹果酸、棕榈酸、亚油酸、反油酸、花生四烯酸、1-磷酸肌醇、胆固醇、2-单棕榈酸甘油酯、1-单硬脂酸甘油酯的相对峰面积均明显升高,L-亮氨酸、L-缬氨酸、氨基丙二酸则有所降低,硬脂酸与花生酸则无明显变化;与模型组比较,温肾降浊散组大鼠血清中乳酸、棕榈酸、亚油酸、反油酸、花生四烯酸、1-磷酸肌醇、胆固醇、2-单棕榈酸甘油酯、1-单硬脂酸甘油酯的相对峰面积均有回落,L-亮氨酸、L-缬氨酸、氨基丙二酸则有所回升,而苹果酸、硬脂酸与花生酸则无明显变化。结论:温肾降浊散可通过改善肾小球通透性,提高自由氨基酸浓度及肾脏清除率等方式来调节机体脂代谢、氨基酸代谢和糖代谢紊乱,进而使肾脏恢复正常功能。 耿放 葛雅南 张宁 熊辉 刘斌 刘海洋 李光关键词:代谢组学 氨基酸代谢