田永杰
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
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- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：环境科学与工程农业科学生物学更多>>
- 比较两种RAD54启动子调控的全酵母发光细胞对化学诱变原的评价效果
- 2016年
- 通过分子生物学技术构建2种不同RAD54启动子调控的yEGFP重组报告载体p RAD54-yEGFP和p RAD54S-yEGFP,前者启动子DNA为1.8 kb,后者为0.5 kb,分别转入W303-1A酵母细胞,构建2种启动子调控的发光酵母细胞,用不同化学诱变原作用后,用流式细胞仪和多功能发光仪测定酵母的发光强度。结果发现2种启动子调控的酵母细胞的发光强度均与化学诱变原(甲磺酸甲脂、4-硝基-N-氧化喹啉和5-氟尿嘧啶)有明显的剂量效应关系,但是W303-1A/RAD54-yEGFP剂量效应关系较为明显,产生的最大诱导倍数(5.96、2.19和2.71)明显高于W303-1A/RAD54S-yEGFP所产生的最大诱导倍数(2.53、1.50和1.91),可能与启动子序列中转录因子的数量以及转录因子间协同增效作用有关。同时发现,流式细胞仪测定效果明显优于发光仪测定效果。所以在构建RAD54启动子调控重组酵母细胞筛选诱变时,选用全启动子序列效果较好。
- 田永杰徐秀举陆益新王超周天祺李湘鸣
- 关键词：酵母细胞绿色荧光蛋白剂量效应关系
- 快速检测四环素类抗生素的重组Lac Z基因酵母细胞的建立
- 2016年
- 以载体双表达的方式构建监测环境中四环素类抗生素污染的重组酵母细胞。在表达载体中,用3-磷酸甘油醛脱氢酶(GPD)启动子驱动四环素阻遏蛋白基因(TR)的表达,并使其与V5抗原表位编码基因相融合。在报告载体中,用四环素效应元件(TRE)调控的Lac Z作为报告基因。将两者转化于酵母细胞中,构建成四环素类抗生素调控的重组Lac Z基因酵母细胞。用不同浓度的四环素类抗生素和非四环素类抗生素对重组酵母细胞分别进行敏感度和特异度研究。结果表明四环素类抗生素与该重组酵母细胞报告基因表达水平有明显的剂量效应关系,说明对检测四环素类抗生素有较好的敏感性,而非四环素类药物与重组酵母细胞报告基因表达水平之间无明显的剂量效应关系,说明其检测具有良好的特异性。该重组基因酵母细胞可用于对环境四环素类抗生素污染程度的监测。
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- 关键词：酵母细胞四环素LAC
- 密码子优化的隔孢伏革菌植酸酶基因在毕赤酵母中高效表达被引量：1
- 2015年
- 本研究目标是建立隔孢伏革菌植酸酶(6-phy A)分泌表达量高的毕赤酵母株,其作为饲料添加剂,可促进单胃类动物消化道对饲料磷的吸收,减少家畜粪便中磷对环境的污染,又可满足饲料加工的需要。按照毕赤酵母对遗传密码子的偏好性,利用重叠P CR方法人工合成6-phy A,将其插入到p PIC9K载体,构建成6-phy A整合型毕赤酵母表达载体,通过电转化转入G S115酵母细胞,并筛选出M ut+高拷贝转化子。通过S DS-PAGE分析,发现在该酵母细胞克隆株的发酵液中,见有一明显6-phy A条带,经测表达产物酶活性,发现均为对照酵母株的7.5倍以上,说明6-phy A在所构建的毕赤酵母株中成功、有效的表达。
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- 关键词：毕赤酵母
