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鸡滑液支原体乳酸脱氢酶基因的克隆表达及其蛋白活性研究: 根据GenBank中鸡滑液支原体(Mycoplasma synoviae,MS)MS53株的乳酸脱氢酶序列设计一对特异性上下游引物,通过PCR扩增获得MSWVU1853菌株的乳酸脱氢酶基因并将其克隆至pGEM-T Eas...; 任峰谭磊包世俊张凡庆陆凤仇旭升宋翠萍孙英杰陈书明丁铲; 关键词：滑液支原体原核表达酶活性

鸡滑液支原体乳酸脱氢酶基因的克隆表达及其蛋白活性研究: 根据GenBank中鸡滑液支原体(Mycoplasma synoviae,MS)MS53株的乳酸脱氢酶序列设计一对特异性上下游引物,通过PCR扩增获得MSWVU1853菌株的乳酸脱氢酶基因并将其克隆至pGEM-T Eas...; 任峰谭磊包世俊张凡庆陆凤仇旭升宋翠萍孙英杰陈书明丁铲; 关键词：滑液支原体原核表达酶活性; 文献传递

滑液支原体乳酸脱氢酶生物学功能的研究: 鸡滑液支原体（Mycoplasma Synoviae, MS）是鸡的主要致病性支原体之一,其主要引起鸡和火鸡的关节肿大、滑液囊及肌腱发炎和实质器官的肿大。虽然滑液支原体的感染不会引起家禽的直接死亡,但其一旦在鸡群中感染就...; 任峰; 关键词：滑液支原体乳酸脱氢酶亚细胞定位生物学功能; 文献传递

滑液支原体灭活疫苗体外诱导T淋巴细胞增殖及免疫保护研究被引量：6: 2015年; 滑液支原体感染是由滑液支原体(Mycoplasma synoviae,MS)引起的鸡和火鸡的一种急性或慢性传染病。为控制滑液支原体感染,本研究利用MS WVU1853株辅以Montanide ISA 206 VG佐剂制备了灭活疫苗,研究发现MS灭活疫苗在体外能够激活鸡骨髓来源的树突状细胞(dendritic cell,DCs),DCs能够摄取MS灭活疫苗抗原提呈给T淋巴细胞并刺激T细胞增殖,利用流式细胞术方法检测增殖的T淋巴细胞亚群,CD4+T细胞增殖比率高于CD8+T细胞。SPF鸡免疫高剂量(1010cfu·m L-1)MS灭活疫苗后IFN-γ表达量显著高于对照组(P<0.05),CD4+T细胞主要向Th1类细胞分化并分泌IFN-γ促进CTL细胞发挥杀伤作用,证明灭活MS疫苗能够有效激发免疫鸡群的细胞免疫反应。利用MS灭活疫苗免疫7日龄SPF鸡,单次免疫可以对MS攻毒产生完全保护,另外对疫苗安全性进行检验显示疫苗安全性良好,对鸡安全有效。; 陆凤谭磊王欣包世俊任峰张凡庆刘芳仇旭升宋翠萍孙英杰伏小平丁铲; 关键词：滑液支原体灭活疫苗细胞免疫免疫保护

鸡滑液支原体乳酸脱氢酶的克隆表达及其表达产物活性研究被引量：3: 2014年; 根据GenBank中鸡滑液支原体(Mycoplasma synoviae,MS)MS53株的乳酸脱氢酶序列设计一对特异性上下游引物,通过PCR扩增获得MS WVU1853菌株的乳酸脱氢酶基因并将其克隆至pGEM-T Easy载体,测序正确并成功完成点突变后连接表达菌pET-28a(+),将重组表达质粒pET-28a-ldh转化表达菌BL21(DE3)。经IPTG诱导成功表达蛋白rMSLDH并测定其酶促活性。结果显示,重组表达的rMSLDH具有较强酶活性;最适反应温度40℃,最适pH7.5;Al2+和Ba2+可增加酶活性;Cr3+作为该酶的辅因子,在一定浓度内能有效的促进酶促反应进行;Cu2+作用下酶几乎失活,Fe3+、Mn2+、Ni2+、Zn2+对酶产生不同程度的抑制作用;其米氏常数(Km)为0.365 mmol/L,最大反应速率(Vm)为0.98μmol(L●min)。本研究结果为更好地研究鸡滑液支原体乳酸脱氢酶的生物学功能提供了参考。; 任峰谭磊包世俊张凡庆陆凤仇旭升宋翠萍孙英杰陈书明丁铲; 关键词：滑液支原体乳酸脱氢酶原核表达酶活性

鸡毒支原体丙酮酸脱氢酶E1β亚基单克隆抗体的制备和鉴定被引量：1: 2014年; 为制备鸡毒支原体丙酮酸脱氢酶E1β亚基(PDHB)的单克隆抗体,将鸡毒支原体Rlow株的pdhb基因进行克隆和原核表达。表达产物纯化后作为免疫原,按常规方法免疫BALB/c小鼠。取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经过克隆和筛选,获得3株能稳定分泌抗鸡毒支原体PDHB抗体的杂交瘤细胞株,分别被命名为2D11、3B5和4D9。ELISA检测结果表明,3株杂交瘤细胞培养上清的抗体效价为1∶1 024~1∶2 048,小鼠腹水的抗体效价为1∶12 800~1∶25 600。单克隆抗体特异性试验显示,获得的腹水单克隆抗体均能与鸡毒支原体各菌株发生反应,而不与其他禽类病原发生反应。3株单克隆抗体的抗体亚型均为IgG1,轻链均为κ链。稳定性鉴定结果表明,获得的3株杂交瘤细胞均能稳定分泌单克隆抗体。鸡毒支原体PDHB单克隆抗体的成功制备,为研究丙酮酸脱氢酶的生物学功能和进一步建立检测方法奠定了基础。; 张凡庆谭磊包世俊任峰陆凤费荣梅丁铲; 关键词：鸡毒支原体单克隆抗体

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任峰