俞静 作品数:8 被引量:6 H指数:2 供职机构: 江苏大学临床医学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 江苏省高校自然科学研究项目 江苏省“333工程”科研项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
MicroRNAs与肾相关疾病诊断的研究进展 2015年 肾脏代偿功能强大,肾相关疾病早期症状不明显,易延误治疗契机导致肾脏不可逆性病变,严重影响人类生存和生活质量。微小RNAs(microRNAs,miRNAs)在机体的生长发育中必不可少,研究表明,miRNAs在疾病的发生、发展以及预后中发挥着重要作用。本文就近年来miRNAs在肾相关疾病早期诊断和预后评价中的研究进展作一综述。 祝源 张娇 俞静 贾浩源 尹磊 许文荣 钱晖关键词:微小RNA 肾病 应用CRISPR/Cas9技术构建IL-15敲除的MGC-803胃癌细胞株 被引量:2 2016年 目的 :运用CRISPR/Cas9基因编辑技术,建立IL-15基因敲除的MGC-803胃癌细胞株。方法 :针对IL-15基因作用的功能域,设计了靶向IL-15基因Exon2的gRNA。构建PX458-gRNA重组质粒并转化感受态细胞Stbl3,筛选出重组子后进行测序,通过测序确认了所设计的gRNA的有效性。并进一步通过流式细胞分选以及ELISA法检测筛选出的MGC-803胃癌细胞株IL-15基因的表达水平。结果 :测序结果显示敲除质粒构建成功,与阴性对照组相比,转染PX458-IL-15-g RNA质粒组IL-15的表达水平明显低于阴性对照组,差异具有统计学意义(P<0.001)。结论:利用CRISPR-Cas9系统成功构建了IL-15基因敲除的MGC-803细胞,为后续研究IL-15在肿瘤中的作用机制和功能奠定了基础。 俞静 孙丽 孙晓仙 陈志红 钱晖 许文荣 朱伟关键词:IL-15 基因敲除 PEG诱导间充质干细胞与胃癌细胞融合的研究 2015年 目的探讨聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)1500诱导人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesechymal stem cell,huc MSC)与胃癌细胞系(HGC-27)融合的可能性及融合细胞(hybrids)的活力。方法荧光染料DIO、DID分别标记HGC-27与huc MSC;细胞计数法观察标记前后细胞增殖情况;PEG1500诱导细胞融合后,用荧光显微镜观察双色的融合细胞;CCK-8法检测融合细胞的活性;流式细胞术分析融合细胞的细胞周期。结果 DIO与DID荧光染料可分别标记HGC-27(表达绿色荧光)与huc MSC(表达红色荧光),且标记对细胞增殖无明显影响;荧光显微镜可观察到双色双核的融合细胞;流式细胞术结果表明,与HGC-27细胞相比,融合细胞活性增强,细胞周期中G1期比例降低,S期比例升高(P<0.01)。结论 PEG可诱导huc MSC与HGC-27细胞融合,且融合后的细胞表现很强的体外增殖活性。 薛建国 尹磊 祝源 纪润璧 贾浩源 张娇 俞静 纪成 王娟娟 许文荣 钱晖关键词:脐带间充质干细胞 胃癌细胞 细胞融合 聚乙二醇 人脐带间质干细胞来源的外泌体对顺铂抗肿瘤疗效的影响 被引量:1 2017年 目的:探讨人脐带间质干细胞来源的外泌体(exosome from human umbilical cord mesenchymal stem cells,hucMSC-ex)对顺铂抗肿瘤效果的影响,评价hucMSC-ex的安全性。方法:蛋白质印迹法检测外泌体的表面特异性分子CD9、CD63以鉴定hucMSC-ex。通过细胞抑制率测定、克隆形成实验、细胞迁移实验,检测hucMSC-ex存在条件下顺铂对HGC-27细胞和MGC-803细胞抑制率、克隆形成及迁移效率的影响。结果:HucMSC-ex表达外泌体特异性分子标志物CD9、CD63;hucMSC-ex能减弱顺铂对HGC-27细胞和MGC-803细胞的生长抑制作用,但不影响顺铂作用后的HGC-27细胞和MGC-803细胞克隆形成及迁移效率。结论:hucMSC-ex对顺铂抗肿瘤疗效无明显影响,具有一定的安全性。 王娟娟 贾浩源 张斌 俞静 纪成 毛飞 许文荣 钱晖关键词:顺铂 化疗 大鼠骨髓间质干细胞来源的外切体抑制顺铂诱导的肾小管上皮细胞凋亡 被引量:1 2015年 目的:观察大鼠骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)来源的外切体(exosome)对顺铂诱导的肾小管上皮细胞凋亡的影响。方法:原代培养大鼠骨髓MSC并提取外切体鉴定。构建顺铂损伤NRK-52E细胞模型,损伤组为5μmol/L顺铂处理6 h后正常营养液培养48 h,处理组为顺铂损伤后以100μg/m L外切体共培养48 h。未经任何处理的NRK-52E细胞为对照组。TUNEL-FITC,凋亡双染流式细胞术,蛋白质免疫印迹技术检测各组细胞凋亡情况。结果:与对照组比较,损伤组NRK-52E细胞肿大,胞核不规则样改变,凋亡细胞增多,凋亡相关蛋白Bax上调而Bcl-2下调;处理组NRK-52E细胞肿大较损伤组缓解,胞核形态改善,凋亡细胞减少,Bax下调且Bcl-2上调。结论:大鼠骨髓MSC来源的外切体对顺铂诱导的NRK-52E细胞凋亡有一定的抑制作用。 祝源 杨芳 张娇 薛建国 尹磊 俞静 贾浩源 纪成 钱晖关键词:顺铂 肾小管上皮细胞 凋亡 脐带间质干细胞来源的外泌体抑制TGF-β_1诱导的NRK-52E细胞上皮-间质转化 被引量:2 2017年 目的:探讨脐带间质干细胞来源的外泌体(exosome from human umbilical mesenchymal stem cells,huc MSCex)对转化生长因子β_1(TGF-β_1)诱导的NRK-52E细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响及其机制。方法:体外培养大鼠肾小管上皮NRK-52E细胞,TGF-β_1诱导使其发生EMT作为诱导组,未经任何处理的NRK-52E细胞为对照组,TGF-β_1处理24 h后加入huc MSC-ex共培养48 h为干预组。倒置显微镜下观察各组细胞形态;蛋白质印迹法检测细胞中E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型胶原α1链(Col1A1)和TGF-β_1等蛋白表达,qRT-PCR检测miR-199a表达。结果:TGF-β_1诱导24 h后,细胞由卵圆形变为长梭形,且细胞密度降低。给予huc MSC-ex干预后,细胞形态恢复。与对照组相比,诱导组E-钙黏蛋白表达降低,N-钙黏蛋白,α-SMA、Col1A1和TGF-β_1表达升高;干预组相关蛋白表达较诱导组发生逆转;诱导组中miR-199a表达下调,而huc MSC-ex干预组表达增加。结论:huc MSC-ex通过上调NRK-52E细胞miR199a表达逆转由TGF-β_1诱导的EMT作用。 俞静 张荣雪 贾浩源 王娟娟 纪成 许文荣 钱晖关键词:脐带间质干细胞 外泌体 上皮-间质转化 MIRNA 胃癌微环境中IL-15的表达及在胃癌生长中的作用 目的 :研究胃癌微环境中IL-15表达水平与胃癌发生发展的关系及可能的免疫调节机制。方法 :收集37例健康人血清及96例胃癌病人术前、术后血清,比较血清中IL-15含量;随机选取40例胃癌病人并做免疫组化切片染色,检测I... 孙丽 俞静 韩奕文 徐蓉曼 朱伟关键词:胃癌 IL-15 TREG细胞 TH17细胞 文献传递 胃癌微环境中IL-15的表达及在胃癌生长中的作用 目的:研究胃癌微环境中IL-15表达水平与胃癌发生发展的关系及可能的免疫调节机制。方法:收集37例健康人血清及96例胃癌病人术前、术后血清,比较血清中IL-15含量;随机选取40例胃癌病人并做免疫组化切片染色,检测IL-... 孙丽 俞静 韩奕文 徐蓉曼 朱伟关键词:胃癌 IL-15 TREG细胞 TH17细胞