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阿魏酸抗LPS诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞炎性作用被引量：3: 2016年; 【目的】为了探明阿魏酸的抗炎机制。【方法】采用组织块培养法获得奶牛子宫内膜上皮细胞。用噻唑蓝(MTT法)检测细胞活力。采用荧光定量PCR方法,分别对对照组、模型组、药物作用高、中、低剂量组在LPS作用3h、6h炎症基因IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α的mRNA变化进行检测。【结果】阿魏酸在一定浓度范围内对细胞增殖无显著影响。药物预处理细胞能够显著降低LPS诱导的IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α的mRNA表达。【结论】阿魏酸能够显著降低LPS刺激细胞后炎症细胞因子的表达,说明阿魏酸是通过抑制炎症因子的表达发挥其抗炎作用。; 张志聪吕安宫平张彤刘艺林李德琰姜晓茜刘蓓桦刘凤华; 关键词：阿魏酸细胞因子脂多糖抗炎作用

LPS诱导奶牛子宫内膜上皮细胞氧化损伤模型的建立被引量：3: 2016年; 【目的】采用脂多糖(LPS)作为刺激源,建立奶牛子宫内膜上皮细胞(BEEC)氧化损伤模型。【方法】体外培养BEEC并进行细胞鉴定,用不同浓度的LPS刺激细胞,在不同时间点用CCK-8法测定细胞存活率,以确定BEEC氧化损伤模型条件。倒置显微镜下观察细胞形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡率,DCFH-DA检测细胞内活性氧(ROS)含量,比色法检测细胞中的丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)。【结果】与空白对照组相比,当LPS浓度为80μg/mL,作用时间为12h时,造成细胞损伤,其细胞凋亡率、ROS产生量和MDA含量明显高于对照组,SOD和CAT活性显著低于对照组。【结论】建立奶牛子宫内膜上皮细胞氧化损伤模型的条件为LPS作用浓度80μg/mL,作用时间12h。; 吕安张志聪宫平张彤刘艺林李德琰姜晓茜刘蓓桦刘凤华; 关键词：脂多糖细胞凋亡

奶牛乳腺上皮细胞的原代培养被引量：6: 2017年; 【目的】探索一种简单且高效的原代奶牛乳腺上皮细胞的培养方法。【方法】采用组织块培养法、酶消化法培养奶牛乳腺上皮细胞;通过MTT法检测吸光度绘制细胞生长曲线;通过免疫组化法鉴定角蛋白-18的表达。【结果】酶消化法相比组织块培养法获得的细胞具有耗时短,获得量高等优点,MTT法绘制的生长曲线符合一般生物学特性,呈"S"型,奶牛乳腺上皮细胞中角蛋白-18阳性表达。【结论】酶消化法是一种简单且高效的培养原代奶牛乳腺上皮细胞的方法。; 宫平刘凤华; 关键词：乳腺上皮细胞酶消化法

比较MTS与MTT用于大鼠热应激模型中肠上皮细胞活力检测被引量：7: 2016年; 【目的】MTT法与MTS法线性关系比较与热应激模型筛选。【方法】以IEC-6及SF9细胞为研究对象,取对数生长期细胞,设置4个接种浓度,将两种细胞制成对应浓度细胞悬液接种于96孔板24h,分别加入两种试剂后在490nm处读取OD值。根据OD值确定两种细胞最佳接种浓度。并根据OD值比较两种检测细胞活力方法哪种更加适合于动物贴壁细胞IEC-6细胞活力测定。取最适浓度的IEC-6细胞加入MTS后孵育1.5、2.5、3.5h三个不同时间点检测OD值,根据OD值确定最佳孵育时间。将IEC-6细胞在最佳接种浓度下接种于96孔板24h,分别在43、41、39℃下采用不同热应激时间4、8、12、24h,测定OD值,根据OD值确定IEC-6细胞热应激模型。【结果】MTS法在动物贴壁细胞IEC-6及植物半贴壁细胞SF9中检测的准确度度高,灵敏度好,是比MTT法更优的检测贴壁细胞增殖活性的方法。IEC-6细胞最佳接种浓度为4.1×104/mL至5.5×104/mL,SF9细胞最佳接种浓度为3.28×105/mL至4.4×105/mL。MTS最佳孵育时间为3.5h,并确定大鼠空肠上皮细胞热应激模型为43℃,6h。【结论】检测贴壁不牢的细胞活力时MTS法优于MTT法,并成功建立IEC-6细胞热应激模型。; 梅晨何莎莎许磊李德银吕安张志聪张彤宫平刘凤华蒋林树; 关键词：细胞活力 MTT MTS IEC-6

安石榴苷对热应激后IEC-6细胞HSPs表达及凋亡影响被引量：1: 2016年; 【目的】本试验旨在研究安石榴苷对热应激大鼠肠上皮细胞(IEC-6)损伤的预防作用。【方法】通过MTT法检测细胞活力,倒置显微镜观察细胞形态学变化;RT-PCR检测HSP27、HSP70、HSP90的mRNA变化;AO/EB检测细胞凋亡。【结果】筛选热应激最佳时间为42℃6h,安石榴苷预处理细胞低中高浓度分别为2.5、5、10μmol/L;药物预处理细胞后细胞损伤及凋亡程度减轻,能够显著抑制HSP27、HSP70、HSP90的高表达。【结论】安石榴苷对IEC-6细胞热应激损伤具有显著预防作用,HSP27、HSP70、HSP90参与安石榴苷对IEC-6细胞热损伤预防作用的调控。; 许磊梅晨李德银宫平吕安张志聪张彤蒋林树刘凤华; 关键词：IEC-6细胞热应激热休克蛋白

宫净灌注剂急性毒性和长期毒性试验研究被引量：2: 2016年; 试验旨在观察宫净灌注剂对小鼠急性毒性和大鼠长期毒性作用,评价其安全性,为临床用药提供理论依据。急性毒性试验选取昆明小鼠,以1次最大剂量灌胃宫净灌注剂,测定宫净灌注剂的急性毒性和最大耐受量(maximal tolerance dose,MTD)。长期毒性试验选取80只SD大鼠,分为低、中、高宫净灌注剂组(2.5、5.0、10.0g/(kg·d))和对照组(给予等体积的蒸馏水),灌胃给药,连续30d。给药期间每天观察大鼠一般状态、体征、饮食情况及粪便形状,每周称取1次体重并计算进食量。给药30d后,心脏取血处死动物,检测血液学、血液生化学指标并做病理组织学检查。结果显示小鼠全部存活,未测得LD50,最大耐受量为40g/kg。在长期毒性试验中,宫净灌注剂低、中、高剂量组与对照组相比,除个别指标外,其余各项指标差异均无统计学意义(P>0.05),未见与药物作用有关的病理变化。由此可见,在本试验条件下,宫净灌注剂对受试动物无明显的急性毒性和长期毒性作用,提示该药临床用药安全无毒。; 吕安张志聪宫平张彤刘艺林姜晓茜李德琰刘凤华; 关键词：急性毒性长期毒性安全性

甘草多糖提取工艺的研究及其对小鼠免疫口蹄疫疫苗后细胞免疫的影响被引量：7: 2015年; 以优化甘草多糖的提取工艺及开发其有效成分的药用价值为研究目的。本研究采用水提醇沉、膜提取法2种工艺提取甘草中有效成分甘草多糖(GPS)并测定其含量,以筛选最佳的提取工艺。研究不同工艺条件下提取的甘草多糖对小鼠脾脏淋巴细胞增殖的影响、以及口服用于猪O型口蹄疫疫苗免疫后的小鼠,检测血中IL-2、IL-6含量,观察甘草多糖(GPS)对小鼠细胞免疫功能的影响。结果显示膜提取法对甘草多糖提取效果最好(P<0.05);在静止态淋巴细胞增殖试验中,所表现出的促增殖作用强于甘草多糖其他各组(P<0.05);GPS-2组也能升高口蹄疫疫苗免疫后小鼠血液中IL-2、IL-6含量(P<0.05)。; 程鹏白云静于晓红宫平张彤李德银徐宏伟蒋林树刘凤华; 关键词：甘草多糖口蹄疫

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宫平