目的 :探究转谷氨酰胺酶1(transglutaminase 1,TGM1)基因过表达对乳腺癌细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响。方法 :采用实时荧光定量PCR法检测鼠源性乳腺癌FE1.2和FE1.3细胞中TGM1 m RNA的表达水平。采用脂质体法将携带有TGM1基因全长序列的重组载体质粒p CMV3-TGM1-GFPspark转染至FE1.2细胞中,构建TGM1基因过表达的FE1.2细胞株(FE1.2-TGM1)。光学显微镜下观察FE1.2细胞形态的变化,FCM法测量细胞粒径的大小;MTT法检测TGM1基因过表达对鼠乳腺癌细胞增殖能力的影响;实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法分别检测EMT相关分子标志物上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、β-链蛋白(β-catenin)以及细胞周期调节蛋白D1(cyclin D1)m RNA和蛋白的表达水平。最后,采用细胞划痕愈合实验检测TGM1过表达对细胞迁移能力的影响。结果 :FE1.3细胞中TGM1 m RNA的表达水平明显高于FE1.2细胞(P<0.001)。将重组载体p CMV3-TGM1-GFPspark转入FE1.2细胞后,FE1.2细胞中TGM1 m RNA和蛋白的表达水平明显上调(P<0.001和P<0.01),细胞形态发生明显改变,细胞的粒径增大(P<0.01),而FE1.2细胞的增殖能力明显降低(P<0.001)。TGM1基因过表达的E1.2细胞中E-cadherin m RNA的表达水平明显上调(P<0.01),vimentin m RNA及蛋白的表达水平均明显下调(P值均<0.001),cyclin D1 m RNA的表达水平明显上调(P<0.05),而cyclin D1蛋白表达水平无明显变化(P>0.05),β-catenin m RNA的表达水平无明显变化(P>0.05),β-catenin蛋白的表达水平明显下调(P<0.01);TGM1过表达后FE1.2细胞的迁移能力明显减弱(P<0.05)。结论 :TGM1基因过表达能抑制乳腺癌细胞的EMT。
目的:研究双吲哚马来酰亚胺衍生物GZWM-051(简称化合物GZWM-051)对人白血病HEL细胞周期及分化的影响。方法: HEL细胞分为对照组(DMSO处理)和化合物GZWM-051组(0.025、0.050、0.100 μmol/L化合物GZWM-051处理,分别为低剂量、中剂量、高剂量组),采用流式细胞术检测细胞周期及分化水平,采用Western blot法检测细胞Cyclin B1、c-Myc、STAT3及P-STAT3蛋白表达水平。结果:处理24 h后,与对照组HEL细胞相比,化合物GZWM-051中、高剂量组 HEL细胞处于G1和S期细胞数量显著减少,处于G2期的数量显著增加,差异有高度统计学意义( P <0.01);相比对照组,作用48 h后化合物GZWM-051低、中、高剂量组HEL细胞的CD41a和CD71均上调;与对照组HEL细胞对比,中剂量及高剂量化合物GZWM-051组HEL细胞生长相关蛋白c-Myc表达水平降低,差异有统计学意义( P <0.05或 P <0.01);与对照组HEL细胞对比,低、中及高剂量的化合物GZWM-051组HEL细胞的P-STAT3表达水平降低( P <0.05或 P <0.01),中、高剂量化合物GZWM-051组HEL细胞周期蛋白Cyclin B1表达水平降低( P <0.05)。结论:化合物GZWM-051不仅能诱导白血病HEL细胞发生G2周期阻滞,促进其向巨核及红系进行分化,抑制细胞恶性增殖,还能失活STAT3关键通路。
目的:探讨双吲哚马来酰亚胺衍生物GZWM-051诱导人白血病HEL细胞凋亡的作用及机制。方法:分别使用不同浓度的GZWM-051处理HEL细胞,采用MTT法测定HEL细胞的存活率,计算抑制率及 IC 50 值;采用Hoechst 33258染色观察处理HEL细胞24 h时的凋亡现象,采用流式细胞术检测处理HEL细胞24及48 h时细胞凋亡水平,Western blot法检测处理HEL细胞24 h时细胞凋亡蛋白表达水平。结果: GZWM-051能抑制HEL细胞的增殖活性,显著提高其凋亡率( P <0.01);Western blot结果显示,0.050 μmol/L或0.100 μmol/LGZWM-051处理HEL细胞后,其Bcl-2蛋白表达水平显著下调( P <0.01),Caspase-3剪切体表达水平显著上调( P <0.01)。结论: GZWM-051可能是通过下调抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平和激活Caspase-3剪切体水平诱导HEL细胞凋亡。
