袁伟
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
- 供职机构：南京医科大学基础医学院病理学系更多>>
- 发文基金：江苏省社会发展科技计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 狂犬病病毒糖蛋白在昆虫细胞中的表达及其免疫学特性分析被引量：2
- 2015年
- 目的 :利用Bac-To-Bac杆状病毒昆虫细胞表达系统对狂犬病病毒糖蛋白(rabies virus glycoprotein,RVG)基因进行克隆、表达、纯化,并对重组RVG进行免疫学特性鉴定。方法:参照Gen Bank收录的狂犬病病毒CVS-11株RVG基因序列,设计特异性引物,扩增目的基因。RVG基因经Bam HⅠ/KpnⅠ双酶切后定向克隆到p Fast Bac-GP67B载体上,阳性重组转座质粒进一步转化E.Coli DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选及PCR鉴定后获得重组穿梭载体r Bacmid-RVG,将其转染至对数生长期的Sf-9昆虫细胞,进行重组RVG的真核表达。His-Trap HP纯化目的蛋白,SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。重组RVG免疫小鼠,检测其免疫原性和血清中和活性。结果:用Bac-To-Bac杆状病毒昆虫细胞表达系统表达并纯化了重组RVG,分子量约58 000。经重组RVG免疫后的小鼠血清具有中和活性。结论:重组RVG具有天然RVG的活性,为进一步研制亚单位疫苗及制备筛选中和抗体奠定了基础。
- 王晓蕾陈芳芳袁伟钱国强耿以如张晓杨瑾熊四平陈雅唐奇仇镇宁冯振卿朱进
- 关键词：狂犬病病毒狂犬病病毒糖蛋白纯化抗体
