雷喜梅
- 作品数：6 被引量：34H指数：4
- 供职机构：浙江大学动物科学学院动物预防医学研究所更多>>
- 发文基金：河南省高校科技创新团队支持计划国家重点基础研究发展计划浙江省重大科技专项基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 中国东部5省猪呼肠孤病毒流行病学调查与分析被引量：1
- 2017年
- 从核酸和抗体水平对我国东部5省猪呼肠孤病毒的流行情况进行研究。针对L1基因设计特异性引物,成功建立了猪呼肠孤病毒巢式反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测方法,利用该方法对2013—2014年从浙江、江西、山东、河南、黑龙江等5省共58个猪场采集的224份腹泻猪粪便样品进行检测。同时,建立了血清型3型哺乳动物呼肠孤病毒(mammalian orthoreovirus,MRV)中和抗体检测方法和以病毒衣壳蛋白δ1重组蛋白为包被抗原的间接酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)的血清学检测方法,并利用该方法分别测定了37份腹泻猪血清样品中和抗体滴度和抗σ1 Ig G抗体水平。结果表明,从55个猪场中共检出147份阳性样品,猪场阳性率和样品阳性率分别为94.8%和65.6%。在37份血清样本中,中和抗体效价高于4的有33份(89.2%);而采用间接ELISA方法测定在450 nm处的吸光度值高于临界值(0.32)的样品为32份(86.49%),二者具有较好的相关性:说明建立的间接ELISA检测方法比较可靠。此外,利用建立的间接ELISA方法检测了2015—2016年从江西、河南、浙江、黑龙江和山东等省收集的262份具有腹泻症状的母猪、初生仔猪和3周龄断奶仔猪血清样品。结果表明,抗σ1 Ig G抗体检出率为84.4%。根据核酸和抗体水平检测结果,我们认为呼肠孤病毒广泛存在于中国东部5省各个猪场中,应该引起足够的重视。
- 覃盼王经纬王斌雷喜梅李龙黄耀伟
- 关键词：L1基因中和抗体流行病学调查
- 猪丁型冠状病毒荧光定量RT-PCR与S1蛋白间接ELISA检测方法的建立及应用被引量：10
- 2017年
- 最近,新发现的猪丁型冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCo V)可导致仔猪腹泻,亟待建立有效准确的核酸及血清学检测方法并调查猪场的PDCo V感染情况。本研究采用针对病毒M基因的探针荧光定量RT-PCR检测方法,对2014-2015年间收集的河南、湖南、浙江、江西、安徽、河北、黑龙江、江苏、山东和上海等10个省市收集的共254份腹泻仔猪小肠匀浆或粪便样本进行检测,共检出11份PDCo V阳性样本,总阳性率为4.33%。采用在昆虫细胞表达纯化的PDCo V囊膜S1蛋白为包被抗原,建立间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,检测2015-2016年间收集的来自江苏、湖南、浙江等7个省份的609份具有腹泻症状的猪血清样品,抗PDCo V S1抗体检出率为44.17%(269/609)。上述建立的两种方法分别针对病毒的RNA或抗体对PDCo V进行特异性检测,可以应用于PDCo V流行情况的监控。
- 王经纬雷喜梅覃盼赵鹏伟王斌王逸雯李懿婷金颢蕊李龙黄耀伟
- 关键词：实时荧光定量RT-PCR
- 猪流行性腹泻病毒血清学及临床诊断方法研究进展被引量：4
- 2018年
- 猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是急性、高度传染性猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)的致病原,可感染所有日龄的猪,并在哺乳仔猪中引起较高的死亡率。当前使用的疫苗难以对感染仔猪提供有效保护。因此,研制高效安全的PEDV疫苗是防控PED的关键。同时,建立敏感有效的血清学检测方法对于PEDV感染的临床诊断以及免疫后体液免疫应答水平的监测与评估至关重要。本文对当前主要的PEDV血清学研究结果进行概述,并对感染或免疫后抗体消长规律进行讨论,以期为PEDV的诊断与防控提供参考。
- 雷喜梅杨永乐许姝雅赵鹏伟王斌黄耀伟
- 关键词：猪流行性腹泻病毒血清学临床诊断方法疫苗
- 分泌抗猪流行性腹泻病毒中国变异株S蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立被引量：7
- 2016年
- 以纯化的猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)中国变异株(CH/ZMDZY/11)S蛋白N端高变区(22-380aa)重组蛋白为抗原免疫BALB/C小鼠,以纯化CH/ZMDZY/11全病毒及带His标签的重组蛋白分别为筛选抗原,利用淋巴瘤杂交技术获得了一株稳定分泌抗S蛋白特异性单克隆抗体细胞株,命名为2D1。该株杂交瘤细胞诱生小鼠产生的腹水抗体效价为1∶3 200,免疫球蛋白类型为IgM。ELISA检测该单抗与PEDV流行株及PEDV CV777疫苗株全病毒的反应显著差异,可区分流行毒株和疫苗毒株;但该单抗用于Western blot不能区分PEDV流行株和疫苗株。ELISA及Western blot试验结果显示,该单抗有较好的PEDV特异性,可用于检测PEDV。
- 雷喜梅陈静杨盼盼赵永祥王晓梦赵军王川庆
- 关键词：猪流行性腹泻病毒纤突蛋白单克隆抗体BLOT
- 基于PEDV中国变异株S蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立与应用被引量：6
- 2014年
- 以纯化的重组猪流行腹泻病毒(PEDV)中国变异株S蛋白为包被抗原,建立了检测PEDV流行株抗体的间接ELISA方法。所建方法最佳反应条件为:抗原最适包被量为1μg/孔,包被时间为37℃1h后4℃过夜;血清工作浓度为1∶100,作用时间为1.5h;二抗选用HRP标记的兔抗猪IgG稀释度为1∶4 000,作用时间为1.5h;显色液TMB作用时间为15min;判定标准为,样品S/P值大于等于0.058判定为阳性,小于0.045判定为阴性。所建ELISA方法具有良好的特异性和重复性。对50份疑似猪流行性腹泻血清样品进行检测,该方法与PEDV病原检测结果有较高的符合率。结果表明本研究所建立ELISA方法可用于PEDV流行株抗体检测和疫病监测。
- 陈静王晓梦杨盼盼雷喜梅刘金玲李晓静赵军王川庆
- 关键词：S蛋白间接ELISA
- PEDV中国流行株和疫苗株S蛋白免疫反应性差异分析被引量：7
- 2015年
- 为分析PEDV流行株和疫苗株S基因差异对疫苗免疫效果影响,分别在大肠杆菌中表达PEDV流行株CH/ZMDZY/11与疫苗株CV777S蛋白差异较大的N端（22～380aa）区域（SA）,将纯化的SA蛋白免疫小鼠获得多克隆抗体,并以SA蛋白为抗原,通过Western Blot及间接ELISA的方法检测2种蛋白与多克隆抗体的反应性差异。结果表明,抗PEDV疫苗株SA蛋白（YSA）多抗与疫苗株SA蛋白的反应性明显高于与流行株SA蛋白（LSA）的反应性;与此相反,抗PEDV流行株SA蛋白多抗与流行株SA蛋白的反应性明显高于与疫苗株SA蛋白的反应性。研究结果提示,PEDV S蛋白22～380aa区域存在差异性抗原表位,PEDV流行株和疫苗株S基因的差异可能是导致基于CV777疫苗株的PED疫苗免疫效果不好的原因。本研究将为开发PEDV流行株亚单位疫苗用于预防临床PEDV流行株的感染提供理论依据。
- 陈静杨盼盼雷喜梅王晓梦高冬生常洪涛杨霞陈陆赵军王川庆
- 关键词：S蛋白免疫反应性
