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番茄始花时间的遗传分析及QTL定位: 始花时间是番茄重要农艺性状之一,与番茄早熟性密切相关,因而成为番茄育种的重要目标.分析番茄始花时间的遗传特性并定位其主效QTL,可以有助于培育番茄早熟品种.本研究中以始花时间早的栽培番茄'Heinz1706' 和始花时间...; 刘晓林王孝宣高建昌国艳梅黄泽军杜永臣; 关键词：番茄开花时间 QTL定位

番茄CRISPR/Cas9介导的多基因编辑技术体系构建与应用被引量：3: 2023年; 为了构建番茄CRISPR/Cas9介导的多基因编辑体系,用SlU6-2p、SlU6-3p、SlU6-7p、SlU3-5p、SlU3-9p和SlU6-5p启动子分别替换pKSE401和pCBC-DT1T2载体中的拟南芥U6启动子,构建了1个双元载体(p MGET)、2个中间载体(pKC-S2M和pKC-S3M)和3个gRNA模块载体(pCBC-S1、pCBC-S2和pCBC-S3)。为了测试该多基因编辑体系,通过PCR扩增、Goldengate克隆和同尾酶技术,将含有6个番茄果实性状相关基因Green flesh(GF)、Ovate(O)、Locule number(LC)、SlMYB12(Y)、Tangerine(T)、Uniformripening(U)靶点序列的sgRNA聚合构建多基因编辑载体pMGET-OYGTULC和pMGET-TULCOYG,检测6个基因同时被编辑的效率分别为44.00%和11.76%。用携带pMGET-OYGTULC载体的根癌农杆菌转化番茄材料获得2株6个基因均被编辑的植株,序列变异为单个碱基的插入、单个或多个碱基的缺失及大片段的缺失等多种形式。本研究中该多基因编辑体系可以高效地应用于番茄多基因编辑,并且可以得到稳定遗传的突变体,可为番茄基础研究和遗传改良提供一个简便的工具箱。; 杨孟霞刘晓林曹雪魏凯宁宇杨沛李珊珊陈紫月王孝宣国艳梅杜永臣李君明刘磊李鑫黄泽军; 关键词：番茄果实性状

番茄短节间基因BRACHYTIC(BR)的精细定位及其候选基因特异性分子标记的开发: 2023年; 番茄株型矮化紧凑有利于实现轻简化栽培。短节间突变位点brachytic(br)已经成功应用于番茄矮化育种。利用Heinz1706与含br位点的无限生长型樱桃番茄品种VFNT Cherry构建的F2分离群体,通过交换单株筛选及后代鉴定,将br位点定位到分子标记HP5589和ZP273之间约14.9 kb的范围内。根据番茄基因组注释信息ITAG 4.0版本,该区间存在2个基因Solyc01g066970和Solyc01g066980,均为开花促进因子(Flowering Promoting Factor 1,FPF1)的同源基因。第2代重测序数据分析发现VFNT Cherry中Solyc01g066980基因的大部分序列缺失。根据该序列变异开发了1个共显性PCR分子标记BRD,试验结果将有助于番茄株型分子改良和株高调控分子机理研究。; 杨沛宁宇魏凯刘晓林杨孟霞李珊珊王孝宣国艳梅刘磊李鑫杜永臣李君明黄泽军; 关键词：番茄株高分子标记

黄瓜动蛋白特异肽段的原核表达和多克隆抗体制备: 2014年; 以黄瓜果实总RNA为模板,通过RT-PCR获得了动蛋白基因CsKF1和CsKF2的cDNA序列,进行测序,构建T-easy载体。SMART在线预测CsKF1和CsKF2均含有动蛋白(Kinesin)约340个氨基酸残基的马达区保守序列(moter domain)。体外表达蛋白的马达区和非马达区,将带有His标签的CsKF1-N、CsKF2-C、CsKF1-M、CsKF2-M融合蛋白通过E.coli BL21(DE3)表达,摸索不同诱导条件下目的蛋白的表达和纯化。其中His-CsKF1-N、His-CsKF2-C、His-CsKF1-M原核表达蛋白的分子量分别为25、30和40 kD,均以0.1 mmol·L-1 IPTG,22℃6 h诱导表达效果最好。His-CsKF2-M原核表达蛋白的分子量约38 kD,以18℃8 h诱导表达效果最好。融合蛋白His-CsKF1-N和His-CsKF2-C经过亲和纯化后作为抗原,通过5轮免疫注射兔子后,取心脏血作为抗血清,通过AminoLink Plus kit试剂盒亲和纯化得到多克隆抗体anti-CsKF1-N和anti-CsKF2-C。经过Western blot分析表明多克隆抗体具有特异性,可与抗原特异结合。; 王燕杨学勇刘晓林张晓孟余宏军蒋卫杰; 关键词：黄瓜果实动蛋白肽段原核表达

适用于黄瓜叶片、根系和果实总蛋白的双向电泳体系的建立被引量：10: 2016年; 通过对上样量、分离胶浓度、等电聚焦参数三方面条件的优化,采用三氯乙酸/丙酮法提取黄瓜叶片总蛋白,初步建立了适用于黄瓜叶片总蛋白的双向电泳体系。进一步发现此优化条件结合蛋白的酚提取法,也适用于黄瓜根系和果实总蛋白的双向电泳。具体优化条件为：选用24 cm pH 4~7线性固相化pH梯度（immobilized pH gradient,IPG）胶条,上样量为800μg,分离胶浓度为12.5%,按聚焦程序Ⅱ聚焦,采用胶体考马斯亮蓝方法染色。采用该优化的体系可以同时进行黄瓜叶片、根系和果实总蛋白的双向电泳,并获得分辨率高、重复性好的双向电泳图谱。。; 刘晓林杨学勇余宏军蒋卫杰赵文超王燕张晓孟; 关键词：黄瓜叶片根系果实双向电泳体系

番茄始花时间的遗传分析及QTL定位: 始花时间是番茄重要农艺性状之一,与番茄早熟性密切相关,因而成为番茄育种的重要目标。分析番茄始花时间的遗传特性并定位其主效QTL,可以有助于培育番茄早熟品种。本研究中以始花时间早的栽培番茄‘Heinz1706’和始花时间晚...; 刘晓林王孝宣高建昌国艳梅黄泽军杜永臣; 关键词：番茄开花时间 QTL定位; 文献传递

利用QTL-seq定位番茄果实质量QTL被引量：4: 2020年; 为了分析樱桃番茄‘VFNT Cherry’(syn.LA1221)和加工番茄‘Heinz1706’组配的F1代果实质量超亲杂种优势的遗传基础,利用其F2群体,通过QTL-seq和单标记分析法进行了果实质量QTL定位,共检测到10个果实质量位点,其中8个位点的大果等位基因为显性,包括部分显性位点5个[QTL for Fruit Weight 2.1(qFW2.1)、qFW5.2、qFW7.1、qFW8.1、qFW9.1]和超显性位点3个(qFW1.1、qFW5.1、qFW6.1)。而且qFW2.1、qFW5.1、qFW7.1、qFW8.1、qFW9.1的大果等位基因来自‘Heinz1706’,qFW1.1、qFW5.2、qFW6.1的大果等位基因来自‘VFNTCherry’。因此F1代番茄果实质量出现超亲现象可能是由于其聚合了来自双亲的显性大果等位基因。上述8个显性位点中qFW9.1的表型变异贡献率最高,达到12.19%。通过交换单株后代鉴定进一步验证了qFW9.1位点并将其定位区间缩小到4.5 Mb。; 魏凯刘晓燕曹雪刘晓林王晓甜杨孟霞王净王孝宣国艳梅杜永臣李君明刘磊舒金帅秦勇黄泽军; 关键词：番茄果实质量

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刘晓林