李永贤
- 作品数：6 被引量：60H指数：4
- 供职机构：中国水产科学研究院南海水产研究所更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家科技基础性工作专项更多>>
- 相关领域：理学轻工技术与工程农业科学化学工程更多>>
- 创伤弧菌外膜蛋白多克隆抗体的制备及其特性分析
- 2017年
- [目的]制备创伤弧菌特异性抗体,为建立免疫学快速检测创伤弧菌提供参考依据。[方法]以创伤弧菌外膜蛋白作为抗原,将抗原分多次免疫新西兰大白兔获得特异性多克隆抗体,采用蛋白G亲和层析法纯化多克隆抗体,通过间接ELISA和Western Blot测定创伤弧菌外膜蛋白多克隆抗体的效价、敏感性和特异性。[结果]实验获得了纯度较高的创伤弧菌外膜蛋白多克隆抗体,效价为1∶64 000;抗体对创伤弧菌具有高的特异性,它与多株致病菌均无明显交叉反应,其对创伤弧菌检测灵敏度为103CFU/m L;Western Blot分析表明,制备的多克隆抗体能识别创伤弧菌外膜蛋白,创伤弧菌外膜蛋白具较强的抗原性。[结论]创伤弧菌外膜蛋白多克隆抗体具有较高特异性和灵敏性,可应用于创伤弧菌的快速、灵敏的免疫学检测。
- 古小莉李永贤李惠青陈洁文李刘冬
- 关键词：创伤弧菌外膜蛋白多克隆抗体WESTERNBLOTELISA
- 孔雀石绿磁性印迹聚合物的制备及其分离应用研究被引量：1
- 2017年
- 以Fe3O4作为磁性载体包覆二氧化硅,并通过表面修饰引入碳碳双键,然后采用分子印迹技术,以孔雀石绿为模板分子,α-甲基丙烯酸和4-乙烯基吡啶作为双功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸脂为交联剂,通过偶氮二异丁腈引发制备孔雀石绿的磁性印迹聚合物(MMIPs)并对单体和模板分子比例进行优化;分别采用红外光谱(FTIR)、振动样品磁强计(VSM)和透射电子显微镜(TEM)等仪器分析手段,对MMIPs的物理性质及结构进行表征;采用平衡吸附、动力学吸附和选择性吸附实验考察了材料对孔雀石绿的特异性识别能力;运用Scatchard分析,模拟得出磁性印迹聚合物具有两类不同的结合位点,其解离常数分别为1.469 mg/L和8.518 mg/L,对孔雀石绿的最大表观吸附量分别为2.97 mg/g和6.02 mg/g;将该材料应用在鱼肉样品中孔雀石绿及其代谢物隐色孔雀石绿的分离富集,经过对提取液的磁性固相萃取,在低浓度下(2,5,10μg/kg),孔雀石绿和隐色孔雀石绿的样品加标回收率都在合理范围内。
- 李永贤古小莉王旭峰王强黎智广李刘冬
- 关键词：孔雀石绿高效液相色谱
- 高效液相色谱-串联质谱法检测水产品中硝基呋喃类代谢物的优化研究被引量：28
- 2015年
- 研究了利用高效液相色谱-串联质谱法（LC—MS／MS）检测水产品中残留的5-吗啉甲基-3-氨基-2-嗯唑烷基酮（AMOZ）、氨基脲（SEM）、1-氨基-2-内酸脲（AHD）和3-氨基-2-噁唑烷基酮（AOZ）等4种硝基呋喃类代谢物，优化了前处理方法及液相色谱条件。硝基呋喃类代谢物经衍生化后，调节样品pH至7．0～7．5，加入8mL乙酸乙酯，离心并转移上清液，氮气吹干后，用乙腈-0．1％的甲酸水（5／95，V/V）溶液定容，4℃高速离心后上机测定。采用梯度洗脱法，4种代谢物在C18柱中分离良好。该法有效地提高硝基呋喃类代谢物的检测效率，且检测结果准确，适用于批量水产品的检测。
- 赵东豪黎智广王旭峰王强李永贤黄珂李刘冬
- 关键词：高效液相色谱-串联质谱法水产品
- 超高效液相色谱法测定水体和沉积物中4种硝基呋喃类抗生素被引量：17
- 2016年
- 建立超高效液相色谱法同时测定水体和沉积物中的呋喃妥因、呋喃西林、呋喃它酮和呋喃唑酮4种硝基呋喃类抗生素。水体样品过滤后直接用混合型阳离子交换（mixed-mode cation exchange,MCX）固相萃取柱富集净化;沉积物样品经乙腈-0.1%甲酸溶液（8∶2,V/V）提取,MCX固相萃取柱净化。采用BEH C18（100 mm×2.1 mm,1.7μm）色谱柱分离,以0.1%甲酸溶液-乙腈为流动相梯度洗脱。4种硝基呋喃类药物在10.0~200μg/L质量浓度内范围线性关系良好,相关系数R2均大于0.999。水体和沉积物中的加标回收率分别为81.5%~103.2%和73.3%~91.9%,相对标准偏差分别为2.0%~5.8%和3.4%~9.6%（n=5）,检出限分别为0.03μg/L和0.6μg/kg,定量限分别为0.1μg/L和2.0μg/kg。该方法可应用于水体和沉积物中硝基呋喃类抗生素的残留检测。
- 王强王旭峰赵东豪黄珂黎智广李永贤杨宏亮李刘冬
- 关键词：超高效液相色谱水体沉积物硝基呋喃
- 生食三文鱼中副溶血性弧菌污染调查及耐药性分析被引量：4
- 2018年
- 探究了广州市售生食三文鱼中副溶血性弧菌的污染状况及分离株的耐药性,为生食三文鱼的食用安全及食源性疾病的防控提供依据。2016年在广州市的批发市场、农贸市场和超市共采集生食三文鱼65份,副溶血性弧菌的分离按照GB 4789.7—2013方法,采用全自动微生物鉴定仪进行副溶血性弧菌的鉴定及药敏试验。2016年广州市生食三文鱼副溶血性弧菌总体检出率为35.38%。7月副溶血性弧菌检出率最高(50%),10月次之,最低为1月。批发市场、农贸市场和超市的副溶血性弧菌检出率分别为45%,9%、9%,三者间有极显著差异(P<0.01)。从65份样品中分离得到63株副溶血性弧菌,分离株的药敏分析发现,所有分离株对阿莫西林、头孢他啶、头孢曲松、头孢吡肟、氨曲南、亚胺培南、美罗培南、阿米卡星、庆大霉素、环丙沙星、左氧氟沙星和呋喃妥因等12种抗生素敏感,少数菌株对复方新诺明耐药(6.35%),大多数菌株对氨苄西林耐药(98.41%)。广州市售生食三文鱼中副溶血性弧菌污染较严重,分离的副溶血性弧菌存在一定程度的耐药情况,今后应加强对生食三文鱼中副溶血性弧菌的监测和抗生素的使用管理。
- 古小莉李惠青吕晓瑜李永贤杨宏亮黄珂
- 关键词：三文鱼副溶血性弧菌污染耐药性
- 超高效液相色谱-串联质谱法测定养殖水和沉积物中孔雀石绿、结晶紫及其代谢物残留被引量：12
- 2015年
- 建立了超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）同时测定养殖水和沉积物中孔雀石绿、结晶紫及其代谢物（隐性孔雀石绿和隐色结晶紫）的多残留分析方法。沉积物样品真空冷冻干燥,乙腈和二氯甲烷提取,MCX固相萃取小柱净化;养殖水试样真空冷冻干燥,50%乙腈-水溶液（含0.1%甲酸）溶解残渣,离心过膜,上机检测。经BEH C18色谱柱分离,梯度洗脱,多反应监测正离子模式下进行定量和定性分析。采用内标法定量,药物含量在0.50~50μg/L范围内线性关系良好,相关系数大于0.99;以3倍和10倍信噪比计算出养殖水的检测限和定量限为10~25 ng/L和25~50 ng/L,沉积物的检测限和定量限为0.020~0.025μg/kg和0.04~0.05μg/kg;平均回收率为85.2%~105.6%,相对标准偏差小于12%。方法已用于实际养殖水和沉积物样品中违禁药物的测定。
- 王旭峰王强赵东豪黄珂黎智广李永贤杨宏亮李刘冬
- 关键词：超高效液相色谱-串联质谱沉积物
