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宋杰: 作品数：44 被引量：68H指数：4; 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所更多>>; 发文基金：国家自然科学基金云南省应用基础研究计划面上项目云南省科技计划项目更多>>; 相关领域：医药卫生生物学农业科学历史地理更多>>

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CXCL4基因敲除小鼠的饲养、繁殖及基因型鉴定: 2016年; 目的饲养、繁殖并鉴定CXC趋化因子配体4[chemokine(C-X-C motif)ligand 4,CXCL4]基因敲除小鼠,为深入研究CXCL4的生物学功能奠定基础。方法将引进的杂合子小鼠进行饲养并繁殖,剪取繁殖成功的子代小鼠耳朵,提取其基因组DNA,采用PCR法鉴定小鼠的基因型;比较野生型小鼠和CXCL4敲除的纯合子小鼠的体重变化及结直肠的长度,通过HE染色观察野生型小鼠和CXCL4敲除的纯合子小鼠的结直肠形态结构;采用ELISA法验证CXCL4野生型和纯合子小鼠血清中CXCL4的表达。结果繁殖成功的子代小鼠有3种基因型:野生型、杂合子及纯合子;4、10周龄雌性纯合子小鼠体重明显重于同龄的野生型小鼠(P<0.05),6、10周龄雄性纯合子小鼠体重明显重于同龄的野生型小鼠(P<0.05);6周龄雌性纯合子小鼠结直肠长度明显长于同周龄的野生型小鼠(P<0.05),但结直肠的形态结构无显著改变;纯合子小鼠血清中CXCL4的表达量明显低于WT小鼠(P<0.05)。结论成功获得了CXCL4基因敲除纯合子小鼠,为深入研究CXCL4的生物学功能奠定了基础。; 宋杰胡云光胡雅洁王艳翠李嘉祺刘龙丁; 关键词：基因敲除小鼠基因型

EV71和CA16研究进展综述被引量：11: 2018年; 手足口病(hand-foot and mouth disease,HFMD)是一种全球性的传染病,其主要病原体为肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)和柯萨奇病毒A组16型(cosackievirus A 16,CA16)。EV71与CA16同属于小核糖核酸(ribonucleic acid,RNA)病毒科(Picornaviridae)肠道病毒属(Enterovirus)肠道病毒A型(Human enterovirus A)的成员,两者在病原学、感染和复制特征以及感染导致的临床症状和免疫反应有相似的方面,但也有明显不同的方面。现将对EV71和CA16相关的病原学、感染和复制特征以及临床症状和免疫反应研究进行综述。; 宋杰胡雅洁董少忠; 关键词：肠道病毒71型柯萨奇病毒A组16型手足口病免疫反应

抗树鼩CD4单克隆抗体的制备及其生物学特性的鉴定被引量：1: 2019年; 目的制备鼠抗树鼩CD4单克隆抗体,并对其生物学特性进行鉴定。方法将重组质粒pGEX-5X-1-CD4和pET30a(+)-CD4分别转化感受态E.coli BL21和BL21(DE3),经IPTG诱导表达,并通过Glutathione Sepharose 4 Fast Flow亲和层析柱纯化重组蛋白GST-CD4和His-CD4。以His-CD4蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,经杂交瘤技术筛选出能分泌抗树鼩CD4的杂交瘤细胞株,制备小鼠腹水单克隆抗体,间接ELISA法检测效价,并通过Protein A亲和层析柱纯化获得鼠抗树鼩CD4单克隆抗体,Western blot及FACS法分析其生物学特性。结果筛选出3株能稳定分泌抗树鼩CD4单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为37D2、38E1、39F2,腹水单克隆抗体效价分别为1∶204800、1∶204800、1∶3200。经HRP标记的38E1单克隆抗体可与树鼩PBMC总蛋白发生特异性结合,经PECy5.5标记的38E1单克隆抗体能特异性识别树鼩PBMC。结论成功制备了鼠抗树鼩CD4的单克隆抗体,为进一步对树鼩作为动物模型的研究及应用奠定了基础。; 吴忠香张雪梅张雪梅宋杰徐婧雯朱文兵宋杰李卫宇李慧; 关键词：树鼩 CD4 单克隆抗体生物学特性

复合免疫佐剂在疫苗开发中的应用研究进展被引量：3: 2020年; 随着新型疫苗的不断发展,研发能与疫苗安全高效配伍增强免疫应答的新型佐剂已迫在眉睫。目前研究表明单一佐剂很容易引发一种特定单一类型的辅助T细胞(helper T cell,Th)1或Th2反应,难以引起理想的免疫反应。复合佐剂作为疫苗佐剂研发的新趋势和热点,将两种或两种以上的免疫佐剂进行联合应用,协调发挥各自的优势,实现最大的佐剂效应,展现了复合佐剂协同作用的有利优势,为进一步开发新型佐剂提供了新的思考方向。; 李慧宋杰董少忠; 关键词：疫苗

肠道病毒-D68 2A蛋白对抗病毒IFN-Ⅰ通路影响的研究被引量：1: 2019年; 目的观察肠道病毒(EV)-D68蛋白2A在EV-D68病毒感染293T细胞过程中对抗病毒IFN-Ⅰ通路的影响。方法免疫印迹法(Western blot)检测重组2A蛋白、IFN-α因子及信号传导及转录激活因子1(STAT1)的蛋白表达水平;免疫荧光技术(Immunofluorescence,IF)检测细胞内不同时间点EV-D68病毒VP1与2A的表达;通过观察细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),计算细胞培养半数感染量(50% cell culture infective dose,CCID50)来检测病毒感染性滴度;利用实时荧光定量PCR技术(real-time PCR,RT-PCR)检测IFN-Ⅰ干扰素产生相关基因的表达。结果成功构建pCLIPf-2A质粒,在转染后的24 h,重组蛋白2A有较好的表达。病毒滴度结果表明,2A蛋白在感染后期可以有效促进EV-D68病毒的增殖复制。IFN-α干扰素检测结果表明,EV-D68 2A可以刺激IFN-α的表达。IFN-Ⅰ干扰素相关基因检测表明,EV-D68+2A组、2A组及EV-D68对照组的IFN-Ⅰ干扰素产生相关基因的IFN-α mRNA水平均有不同程度的上调或下调,但是三者诱导相关基因表达上调、下调的趋势不同。对IFN-Ⅰ干扰素通路下游蛋白STAT1检测结果表明,各组均能有效诱导STAT1蛋白的表达。结论EV-D68 2A可以促进抗病毒IFN-Ⅰ通路相关基因及下游蛋白的应答,病毒感染后期,2A可以促进病毒较快增殖。; 郑惠文杨智尧杨泽宁宋杰黄星李楠丁丽莎李恒李洪哲郭磊储曼曼施海晶刘龙丁

GⅡ.4型人诺如病毒VP1蛋白单克隆抗体的制备及鉴定被引量：1: 2020年; 目的制备抗GⅡ.4型人诺如病毒(human norovirus,HuNoV)衣壳蛋白VP1单克隆抗体,并鉴定其生物学特性。方法PCR扩增GⅡ.4型HuNoV VP1基因序列,将其插入至原核表达载体pGEX-5X-1中,构建重组质粒p GEX-5X-1-VP1,转化至E.coli BL21,经IPTG诱导表达,并通过亲和层析纯化获得重组蛋白GST-VP1。利用杂交瘤技术将小鼠骨髓瘤细胞SP2/0与经GST-VP1抗原免疫的BALB/c小鼠的脾细胞进行融合,通过间接ELISA法筛选出阳性杂交瘤细胞株,制备单克隆抗体,并进行纯化。采用间接ELISA法、Biacore法和Western blot法分别检测单克隆抗体的效价、亲和力及特异性。结果经菌落PCR及测序鉴定,重组质粒pGEX-5X-1-VP1构建正确。重组蛋白GST-VP1相对分子质量约85000,大部分以可溶形式存在,纯化后浓度为1.100 mg/mL。筛选获得3株能分泌GⅡ.4型HuNoV VP1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为NoV C1、NoV D9和NoV H6,效价均可达1∶10^7以上,亲和力常数KD(M)分别为4.422×10^-7、4.303×10^-8、7.540×10^-7 mol/L,均可与HuNoV VP1天然蛋白及GST-VP1重组蛋白发生特异性结合。结论利用原核表达系统成功表达了GST-VP1蛋白,并通过杂交瘤技术制备了高效价的GⅡ.4型HuNoV VP1特异性单克隆抗体,为GⅡ.4型HuNoV免疫诊断和疫苗的研发奠定了基础。; 李慧徐靖雯张雪梅吴忠香朱文兵蒋曦李卫宇宋杰董少忠; 关键词：诺如病毒衣壳蛋白基因重组原核表达单克隆抗体

抗肠道病毒71型血清与病毒间的中和量效反应关系: 2023年; 目的探讨抗肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)中和血清效价与EV71滴度之间的中和试验量效反应关系。方法将EV71收获液进行系列梯度稀释后,加入不同动物来源的不同效价的血清进行中和试验,观察细胞病变情况,找到能够完全中和不同滴度病毒所需的最低血清效价。结果随着病毒滴度的增加,需要完全中和病毒所对应的血清效价也相应增加,但血清效价增加的趋势较病毒增加的趋势慢,当病毒滴度增加约120000倍时,所需的血清效价增加约1000倍。不同来源的血清对EV71的中和能力相当。结论初步确立了EV71中和血清与EV71滴度间的中和量效关系。; 李亚东解裕萍徐敏郎磊赵勇杜宋婷贺凌煜宋杰宋杰; 关键词：肠道病毒71型量效关系

抗树鼩CD8分子单克隆抗体及分泌该抗体的杂交瘤细胞株与应用: 本发明涉及一种抗树鼩CD8分子单克隆抗体及分泌该抗体的杂交瘤细胞株与应用，属于分子生物学技术领域。该杂交瘤细胞株保藏于中国典型培养物保藏中心建株，保藏名称为杂交瘤细胞株TSCD8α‑C16，保藏号为CCTCC NO：C2...; 董少忠张雪梅吴忠香徐婧雯朱文兵蒋曦宋杰李慧; 文献传递

云南省两市区脊髓灰质炎灭活疫苗接种情况调查被引量：1: 2019年; 目的:分析云南省昆明市五华区及丽江市脊髓灰质炎疫苗(PV)接种情况及脊髓灰质炎灭活疫苗(IPV)在每个剂次中所占的比率及普及情况。方法:从两地疾病预防控制中心儿童免疫规划信息管理系统中收集2016年5月～2017年7月儿童PV接种数据,应用描述性流行病学方法进行分析。结果:2016年5月～2017年7月,五华区共接种PV 65 349剂,每一剂接种率均为99%以上,第1、2、3及4次剂IPV所占比率分别为86. 02%、33. 62%、26. 30%及20. 33%;丽江市共接种脊髓灰质炎疫苗21 962剂,每一剂次接种率均为99%以上,第1、2、3及4次剂IPV所占比率分别为39. 75%、7. 55%、8. 20%及0. 07%,使用IPV种类多为Sabin-IPV、Salk-IPV、DTa P-IPV/Hib,DTa P-IPV/Hib所占比率最高(62. 63%,χ~2=9 597. 6,P <0. 001);丽江市IPV相对单一,95%为免费Sabin-IPV,五华区IPV接种率明显高于丽江市(χ~2=22 614. 9,P <0. 001)。结论:昆明市五华区IPV接种率明显高于丽江市。; 蒋曦朱文兵王静詹会莲李慧宋杰董少忠; 关键词：脊髓灰质炎疫苗脊髓灰质炎灭活疫苗接种

CVA16感染对m^6A甲基化相关蛋白表达和定位的影响被引量：3: 2020年; 目的本研究旨在探究柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A 16,CVA16)感染后是否会影响N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m6A)甲基化相关蛋白在人呼吸道上皮细胞(16HBE)、ICR乳鼠和SCARB2人源化小鼠中的表达,以及在细胞中的定位。方法病毒分别以感染复数(MOI)=0.1感染16HBE和107 CCID50/ml感染小鼠,Western blot分析甲基转移酶、去甲基化酶和甲基化阅读蛋白的表达变化,免疫荧光观察这些蛋白质在细胞中的定位。结果研究结果发现,随着CVA16病毒感染时间的增加,m6A甲基化相关蛋白在细胞中表达水平逐渐下调,在ICR乳鼠和SCARB2小鼠中无明显变化;病毒感染后,m6A甲基化相关蛋白在细胞核与细胞质中重新分布,甚至发生降解。结论CVA16在宿主细胞中复制时可以改变m6A甲基化修饰相关蛋白的表达和细胞定位。本研究结果提示m6A修饰可能是肠道病毒治疗的潜在新靶点。; 李卫宇蒋曦郑雪麟朱文兵刘卓航李慧张雪梅吴忠香宋杰董少忠

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