鞠斌
- 作品数：7 被引量：8H指数：2
- 供职机构：中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心传染病预防控制国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金传染病预防控制国家重点实验室基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- HIV-1gp140蛋白不同聚合体的纯化
- 2016年
- 目的对HIV-1 CN54膜蛋白gp140的不同聚合体进行纯化。方法将在哺乳动物细胞Free Style 293F中表达的gp140蛋白经过糖基化亲和层析、阴离子交换层析和凝胶排阻层析3种纯化方法进行分离,并对该纯化方法进行优化。采用ELISA方法检测不同结构抗原与广谱中和抗体的特异性反应。结果选择lentil lectin填料进行糖基化亲和层析,纯化的gp140蛋白为4.56 mg/L,得率为89.9%;选择弱阴离子填料DEAE用于阴离子交换层析,纯化的gp140蛋白为3.87 mg/L,得率为84.8%;凝胶排阻层析纯化获得了gp140蛋白的多聚体、三聚体+二聚体以及单体3种结构。不同结构的gp140蛋白可与CD4结合位点的广谱中和抗体VRC01以及结构依赖性的V3区特异性广谱中和抗体反应,具有较好的特异性,且不同聚合体在V3区结构依赖性抗体2G12的结合抗体反应上会存在一定差异。结论成功建立了HIV-1 gp140蛋白不同聚合体纯化的方法,该方法对于其他相似蛋白的纯化具有参考作用;不同结构的gp140蛋白的分离为进一步研究其免疫原性奠定了基础。
- 刘建东何彦平鞠斌孙红岩宋伟葛向阳任莉刘颖邵一鸣郝彦玲
- 关键词：HIV纯化
- 白介素-21调节细胞免疫反应的研究及HIV-1单克隆广谱中和抗体的鉴定
- 人类免疫缺陷病毒-1型(Human Immunodeficiency Virus-1, HIV-1)发现至今已有三十多年,人们对其发病机理和免疫学特征也有了一定的认识,但制约HIV-1疫苗研发的主要科学和技术障碍仍未能跨...
- 鞠斌
- 关键词：HIV-1疫苗佐剂
- 利用单个B细胞分选方法获得HIV-1单克隆抗体基因及功能鉴定被引量：2
- 2018年
- 目的从人类免疫缺陷病毒1型（human immunodeficiency virus-1，HIV-1）感染者中获得单克隆抗体基因及功能鉴定。方法单细胞流式分选得到抗原特异性单个B细胞，基因扩增和测序得到抗体可变区序列，BioEdit软件包中Sequence Identity Matrix程序分析基因序列一致性，免疫遗传学数据库分析抗体基因家系和突变率，酶联免疫吸附试验测定抗体结合能力，TZM-bl/假病毒试验检测抗体中和能力。结果从3个HIV-1感染者中分别获得了4个、7个和11个不同抗体的重链和轻链基因序列，其基因家系、CDR3长度和突变率广泛多样；验证了一个感染者的4个抗体基因序列，抗体A1和B3是HIV-1单克隆结合抗体，能同时与B亚型、CRF01_AE和CRF07_BC抗原蛋白结合；A1和B3也是HIV-1单克隆中和抗体，能够中和C亚型的MW965病毒，50%抑制浓度分别为0.04 μg/ml和37.34 μg/ml。结论本研究成功获得了大量的单克隆抗体基因，并对其中的部分序列进行了功能验证，为单克隆抗体的分离和鉴定等研究工作提供了基础。
- 鞠斌鞠斌郝彦玲李丹任莉梁华王硕侯佳利魏民
- 关键词：抗体基因中和活性
- CD137分子在 HIV 特异性 T 淋巴细胞单克隆分选和扩增中的应用
- 2015年
- 目的：建立通过CD137分子对HIV特异性T淋巴细胞进行单克隆分选和体外扩增的方案，对扩增后T细胞的数量和表型进行鉴定。方法分离HIV感染者外周血单个核细胞，采用多色流式细胞染色技术，分离HIV Gag特异性CD3＋CD8＋CD137＋T细胞，单个细胞分选入96孔板，在体外加入饲养细胞和细胞因子进行培养，克隆扩增后14 d对扩增的细胞进行表型鉴定，14 d和28 d分别计算扩增倍数。结果 CD137分子在未接受抗原刺激的状态下表达量很低， Gag肽库刺激后， CD137表达升高，并且表达CD137的CD8细胞均分泌IFN-γ。体外扩增14 d可以获得106的CD8 T细胞，28 d可获得107～108的 CD8 T细胞。在 Gag 肽库刺激后可达到接近100％的活化。结论CD137可替代IFN-γ等传统的细胞因子对HIV抗原特异性T细胞进行筛选和体外扩增，扩增后的T细胞仍保持非常好的活性状态。
- 李丹梁华鞠斌范瑾李亚锋王硕邵一鸣
- 关键词：CD137HIV体外扩增
- 1例慢性HIV-1感染者体内CD4结合位点特异性记忆B细胞分选及抗体表达研究被引量：1
- 2016年
- 目的通过抗原特异性记忆B细胞(Memory B)分选、抗体基因克隆表达和鉴定方法,从艾滋病病毒1型(HIV-1)感染者中获得HIV-1中和抗体,并进一步探讨获得抗体的特征。方法通过检测血浆中和抗体活性和表位筛选,挑选出1例含有CD4结合位点(CD4bs)特异性抗体的慢性HIV-1感染者。采用一对含有/缺失CD4-bs的探针RSC3/ΔRSC3进行Memory B分选,获得抗体可变区基因后进行抗体的表达纯化,并检验所得抗体的结合能力和中和能力。结果从9×106外周血单核淋巴细胞(PBMCs)中分离得6个特异性Memory B。通过反转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别扩增出3对重链和轻链可变区基因,配对得到3个抗体,其中有一个抗体具有HIV-1CD4bs结合能力。中和实验表明,这个抗体能中和毒株SF162[50%抑制浓度(IC50=0.89μg/mL]。抗体可变区基因家系分析表明,该抗体属于IGHV1-18家系,重链可变区(VH)自体突变率为12%,低于广谱中和抗体VRC01VH的自体突变率(32%)。结论建立的单克隆特异性Memory B分选方法,可以获得有中和能力的抗体。该平台有希望获得具有我国自主知识产权的广谱中和抗体,并为开发抗体药物和设计新型免疫原提供技术支持。
- 李丹王铮任莉梁华洪坤学鞠斌王硕李亚峰邵一鸣
- 关键词：艾滋病病毒1型
- HIV-1 DNA疫苗初免-重组痘苗病毒载体疫苗和蛋白疫苗加强策略的免疫原性分析被引量：1
- 2016年
- 目的系统分析人类免疫缺陷病毒(HIV)-1DNA疫苗初免-重组痘苗病毒载体(rTV)疫苗和蛋白疫苗加强免疫策略在小鼠中诱导的免疫应答反应,为HIV-1疫苗研发提供备选免疫方案和免疫原性评价手段。方法采用初免-加强策略免疫BALB/c小鼠,ELISA检测特异性结合抗体,流式细胞术检测特异性细胞免疫反应。结果免疫程序中4个时间点血清样本均可持续检测到广泛的HIV-1特异性抗体(IgG、IgM、IgA、IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3);rTV疫苗免疫后10d和末次免疫后6周均可检测到HIV-1特异性的细胞免疫反应,分泌细胞因子干扰素(IFN)-γ、白细胞介素(IL)-2和肿瘤坏死因子(TNF)-α;该免疫策略可诱导广泛的三功能性和双功能性T细胞免疫反应。结论 DNA疫苗初免-rTV疫苗和蛋白疫苗加强免疫策略可以在小鼠中诱导出广泛持久的HIV-1特异性体液免疫和细胞免疫应答。
- 鞠斌梁华李丹纪晓琳王硕刘鹏涛邵一鸣
- 关键词：细胞免疫
- 通过流式分选技术筛选HIV-1特异性单个B细胞被引量：3
- 2016年
- 目的探讨流式细胞分选技术在筛选HIV-1抗原特异性单个B细胞中的应用。方法通过HIV-1特异性探针结合多色流式细胞技术,标记HIV-1抗原特异性B细胞;并结合单细胞流式分选,从两例HIV-1慢性感染者体内分离抗原特异性单个B细胞。结果两个样本均有较强的中和活性,可以用作筛选中和抗体。两例感染者经流式分选后分别获得探针特异性目的细胞CD3-、CD8-、INDO-1 VIOLET-、CD14-、CD19+、CD20+、Ig M-、Ig G+、JRFLgp140+、JRFLgp140-D368R-各33和20个。结论通过流式分选技术结合HIV-1特异性探针可以获得单个HIV-1抗原特异性B细胞,为后续获得有广谱中和HIV-1能力的抗体,设计抗HIV-1药物和HIV-1疫苗免疫原提供技术支持。
- 李丹鞠斌王硕李亚锋梁华邵一鸣
- 关键词：HIV-1探针
