黄永秀
- 作品数：4 被引量：1H指数：1
- 供职机构：成都医学院检验医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金四川省应用基础研究计划项目国家级大学生创新创业训练计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 大鼠Armcx3基因真核表达载体的构建及表达
- 2015年
- 帕金森病（Parkinson’s disease，PD）是一种高发于中老年的神经系统退行性疾病，临床表现为静止性震颤、肌强直、运动迟缓和姿势步态异常等。以往研究表明，线粒体动态变化失衡，是引起神经元细胞死亡和帕金森病发生的一个重要因素。
- 王建东黄永秀王正维刘腾夏慧南张红
- 关键词：真核表达PC12细胞
- 鱼藤酮诱导PC12细胞自噬的初步研究
- 2015年
- 目的研究鱼藤酮处理对PC12细胞自噬水平的影响。方法培养PC12细胞,分别用0、0.01、0.05、0.1、0.5、1、5、10μmol/L鱼藤酮处理细胞12h,以及1μmol/L鱼藤酮分别处理细胞0、2、6、12、18、24h,Western blot检测各组细胞内LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ含量,荧光显微镜检测GFP-LC3荧光斑点的数量,透射电镜观察细胞超微结构。结果随着鱼藤酮处理浓度升高,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值和GFP-LC3荧光斑点数量均随之增加;随着鱼藤酮处理时间延长,GFP-LC3荧光斑点数量也随之增加,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值先升高后降低,透射电镜显示细胞线粒体受损和细胞自噬水平增加。结论鱼藤酮对PC12细胞自噬的影响具有量效性和时效性。
- 刘腾黄永秀王丹崔涌泉王建东张红
- 关键词：鱼藤酮自噬PC12细胞
- 大鼠线粒体膜蛋白Nix基因过表达与shRNA慢病毒载体的构建与鉴定被引量：1
- 2015年
- 目的构建线粒体膜蛋白Nix基因过表达与shRNA慢病毒载体。方法 PCR扩增获得Nix基因序列,与经BamHⅠ、EcoRⅠ双酶切的pHBLV-CMVIE-IRES-Puro载体连接获得Nix过表达重组慢病毒载体;以Nix为靶基因,合成寡核苷酸,退火形成双链DNA,与经BamHⅠ、EcoRⅠ双酶切的pHBLV-U6-Scramble-Puro载体连接获得Nix shRNA重组慢病毒载体;将病毒包装辅助质粒与上述重组慢病毒载体共转染293T细胞,收集上清液并浓缩获得慢病毒浓缩液,3倍梯度稀释法测定病毒滴度;用病毒颗粒感染PC12细胞,经嘌呤酶素筛后得到稳定感染细胞株;荧光显微镜检测Nix荧光水平,Western blot检测Nix蛋白的表达。结果成功构建Nix基因过表达和shRNA慢病毒载体,并在293T细胞中包装获得病毒。重组病毒感染PC12细胞后,荧光显微镜检测Nix基因过表达细胞荧光水平增加,shRNA感染细胞荧光水平降低;Western blot检测显示Nix基因过表达PC12细胞中Nix蛋白表达显著升高,shRNA慢病毒感染细胞中Nix蛋白表达明显降低,而Nix shRNA1干扰效果最好。结论成功构建Nix基因过表达与shRNA慢病毒载体,并获得Nix过表达与干扰细胞模型。
- 张君莉黄永秀张红王丹刘腾李亚王建东
- 关键词：SHRNA慢病毒载体PC12细胞
- 慢病毒介导shRNA沉默LAMP-2A和TSG101表达对PC12细胞中EGFP-α-synuclein(A53T)降解的影响
- 2015年
- 目的采用慢病毒介导的shRNA干扰技术,下调PC12细胞中溶酶体相关膜蛋白-2A(lysosome-associated membrane protein type 2A,LAMP-2A)和肿瘤易感基因101(tumor susceptibility gene101,TSG101)的表达,并研究其对EGFP-α-synuclein(A53T)降解的影响。方法以LAMP-2A和TSG101为靶基因,合成寡核苷酸,退火形成双链DNA,与经Bam HⅠ、EcoRⅠ双酶切的p HBLV-U6-Puro载体连接获得重组慢病毒载体;将其与病毒包装辅助质粒共感染293T细胞,收集并浓缩上清液获得重组病毒,测定病毒滴度;病毒颗粒转染PC12细胞,经嘌呤酶素筛选获得稳定感染细胞株;Western blot检测LAMP-2A和TSG101蛋白的表达;分别采用LAMP-2A shRNA2和TSG101 shRNA1下调PC12细胞中LAMP-2A和TSG101蛋白的表达,并结合巴佛洛霉素A1处理,研究其对PC12细胞中EGFP-α-synuclein(A53T)、EGFP、α-synuclein(A53T)和LC3B蛋白的影响,免疫荧光检测各组PC12细胞中EGFP-α-synuclein(A53T)和LC3B蛋白的表达。结果成功构建干扰LAMP-2A和TSG101表达的慢病毒载体,并在293T细胞中包装获得病毒。重组病毒感染PC12细胞后,Western blot检测结果显示LAMP-2A shRNA2和TSG101 shRNA1干扰效果最好;下调LAMP-2A和TSG101蛋白表达均能够抑制细胞中EGFP-α-synuclein(A53T)、EGFP和α-synuclein(A53T)蛋白的降解(P<0.01),并提高LC3-Ⅱ蛋白的含量(P<0.01)。结论慢病毒介导的shRNA能有效地沉默PC12细胞中LAMP-2A和TSG101的表达,抑制细胞中EGFP-α-synuclein(A53T)的降解。
- 王建东刘腾张君莉刘海耘黄永秀张红
- 关键词：PC12细胞
