廖娟
- 作品数：2 被引量：4H指数：2
- 供职机构：遵义医学院医学与生物学研究中心更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 兔骨骼肌卫星细胞的分离、培养及成肌特性被引量：2
- 2015年
- 目的 建立高纯度、高丰度的兔骨骼肌卫星细胞的分离、培养方法,并对培养的肌卫星细胞体外增殖和成肌特性进行观察.方法 采用改良Ⅰ型胶原酶和胰蛋白酶混合消化法结合差速贴壁培养以分离、纯化1周龄幼兔小腿三头肌来源的骨骼肌卫星细胞.镜下观察肌卫星细胞生长形态,结蛋白（Desmin）免疫组化染色鉴定体外培养的肌卫星细胞,MTT法绘制细胞生长曲线,并对分离培养的肌卫星细胞成肌特性进行诱导培养观察.结果 差速贴壁后的悬浮肌卫星细胞折光性强,呈透亮球形,数量较多,贴壁生长后逐渐变为长梭形;免疫组化染色检测分离培养的细胞高表达Desmin,证明为肌卫星细胞,纯度高达95％;传代培养的肌卫星细胞24h后开始增殖,第3～7天处于对数生长期,第8天后进入平台期;不经诱导分化培养基培养的肌卫星细胞也可融合形成肌管,但形成肌管速度不及诱导分化培养组快速.结论 成功建立了具有操作简便、不易污染和纯度高的兔骨骼肌卫星细胞分离、培养方法,为采用肌卫星细胞为种子细胞的再生医学研究奠定实验基础.
- 柯棠山董进廖娟刘坤祥
- 关键词：肌卫星细胞细胞培养
- 大鼠足细胞原代培养及观察被引量：2
- 2015年
- 目的建立一种操作简便、重复性较好的大鼠肾脏足细胞分离和培养方法 ,并观察体外培养足细胞的生长特性。方法选用SD大鼠幼鼠,无菌取肾,采用低浓度胰蛋白酶短时间消化结合差异过筛法,获得较高纯度的肾小球,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃、5%CO2的恒温恒湿培养箱培养。采用细胞免疫组化技术,对所提取的细胞进行免疫染色鉴定,并在光学显微镜下对足细胞进行跟踪观察。结果培养第3天,可见有部分细胞从贴壁的肾小球爬出,第5天可见细胞成铺路石样生长,待第8天细胞汇合度达70%～80%,消化细胞传代培养,采用传代培养7 d的细胞进行免疫组化检测,细胞内足细胞标志蛋白Nephrin呈阳性表达,足细胞纯度高迏95%以上。足细胞生长良好,继续培养分化形成具有特殊形态的成熟足细胞。结论本实验成功建立了大鼠足细胞的提取、培养和鉴定方法,操作简单、重复性好、纯度高,为下一步足细胞相关研究奠定了基础。
- 柯棠山刘坤祥董进廖娟
- 关键词：足细胞细胞培养
