李钦芳
- 作品数：4 被引量：11H指数：2
- 供职机构：第二军医大学附属长海医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 稳定表达EGFP-LC3的AR42J细胞系的建立被引量：2
- 2015年
- 目的 建立稳定表达增强型GFP （EGFP）-LC3的AR42J细胞.方法 利用慢病毒过表达载体Lentiviral-EGFP-LC3包装成慢病毒,感染大鼠胰腺腺泡细胞AR42J.以Lentiviral-EGFP感染作为阴性对照.通过倒置荧光显微镜观察及流式细胞分析仪检测病毒感染效率,蛋白质印迹法检测稳定传代细胞株的LC3蛋白表达.用毒胡萝卜素处理细胞建立内质网应激模型,采用蛋白质印迹法检测应激的AR42J细胞的LC3、PERK蛋白表达.结果 AR42J细胞的Lentiviral-EGFP-LC3感染效率＞85％,并能稳定传代.Lentiviral-EGFP-LC3感染的AR42J细胞的LC3 mRNA表达量为未感染细胞的（9.14±0.32）倍;LC3蛋白阳性表达并有EGFP-LC3融合蛋白的表达.Lentiviral-EGFP感染的AR42J细胞的LC3 mRNA表达量为未感染细胞的（1.08 ±0.07）倍,无LC3蛋白表达,仅有GFP表达.与未感染组比较,EGFP-LC3组的LC3 mRNA表达显著升高,差异有统计学意义（P＜0.05）,而EGFP组的差异无统计学意义.结论 成功构建了稳定表达EGFP-LC3的大鼠胰腺外分泌细胞AR42J,为进一步研究急性胰腺炎与自噬的关系提供了新的细胞模型.
- 吴敏李洁刘晓李钦芳郭晓榕湛先保
- 关键词：慢病毒感染自噬细胞系
- 影响胰腺癌术后患者预后的相关因素分析被引量：8
- 2015年
- 胰腺导管腺癌（以下简称胰腺癌）是恶性程度很高的肿瘤，其中95％的患者在诊断后的1年内死亡，5年存活率为5％-20％，外科手术是目前延长生存时间的首要治疗方法。文献报道手术患者的预后和临床病理有关，包括患者情况、淋巴结转移、肿瘤大小、切缘情况、血管侵犯等，
- 陈燕杜奕奇李洁曾彦博田晓珍李钦芳李兆申
- 关键词：胰腺癌预后胰腺导管腺癌肿瘤大小5年存活率
- 急性胰腺炎与自噬及其关键分子Beclins1相关研究进展被引量：1
- 2016年
- 急性胰腺炎（acute pancreatitis，AP）是指多种病因引起的胰酶激活，伴有胰腺局部炎症反应，病情较重者可发生全身炎症反应综合症（SIRS），并可并发器官功能障碍。
- 李钦芳湛先保
- 关键词：急性胰腺炎全身炎症反应综合症分子自噬局部炎症反应酶激活
- 稳定沉默Beclin1基因的胰腺腺泡细胞株AR42J的建立
- 2016年
- 目的采用RNA干扰技术沉默大鼠胰腺腺泡细胞AR42J的Beclinl基因表达，构建稳定的Beclinl基因沉默的AR42J细胞系。方法设计并合成3种靶向大鼠BeclinlmRNA的shRNA及阴性对照shRNA，分别插入质粒GVl12，重组质粒分别命名为p—sh．Beclin1-1、P—sh．Beclinl-2、P—sh—Beclinl-3及p—shRNA—NC。应用1ip03000将重组质粒瞬转人AR42J细胞，应用RT—PCR检测细胞Beclin1mRNA表达，筛选出沉默效率最高的质粒，在293T细胞内经慢病毒包装（LV—shBeclinl），感染AR42J细胞，应用嘌呤霉素筛选，采用RT．PCR及蛋白质印迹法分别检测病毒感染细胞BeclinlmRNA和蛋白表达。结果重组质粒经琼脂糖凝胶电泳分离及测序证实shRNA序列符合预期。p—sh—Beclinl-1、P—sh—Beclinl-2、P—sh—Beclinl-3及p-shRNA—NC转染后AR42J细胞BeclinlmRNA表达抑制率分别为（17．8±4．0）％、（30．6±2．8）％、（45．8±7．7）％、（7．0±11．8）％。3个p—sh—Beclinl转染细胞的表达抑制率均较未转染细胞显著增加，差异有统计学意义（P值均〈0．05），而转染P—shRNA—NC细胞的表达抑制率与未转染细胞的差异无统计学意义。抑制率最高的p—sh—Beelinl．3经慢病毒包装，感染AR42J细胞，感染细胞的BeelinmRNA表达抑制率为（86．1±1．2）％，蛋白表达抑制率为（87．9±2．8）％，与未感染细胞的差异均有统计学意义（P值均〈0．01）。结论成功建立Beclinl基因沉默的AR42J细胞株，为探讨Bedim基因在急性胰腺炎发病机制中的作用提供新的细胞模型。
- 李钦芳吴敏郭晓榕李洁顾晓霞湛先保
- 关键词：胰腺炎RNA干扰慢病毒感染
