孙博
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 供职机构：东北林业大学更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 碱茅(Puccinellia tenuifolra)全长cDNA酵母文库中与铝胁迫相关基因的初步筛选
- 2014年
- 利用碱茅全长cDNAs酵母表达文库,经不同浓度AlCl3筛选得到19个不同克隆可增强酵母的耐铝性,经过同源性比对后,将这19个对Al3+胁迫敏感的抗性克隆大体分为以下几类:结构功能蛋白、酶类、有跨膜结构的蛋白、与光合作用相关蛋白以及功能未知蛋白。为了了解该19个单克隆对于胁迫的耐受特异性,本研究中将这19个克隆与转空载体的酵母分别在以下各种胁迫条件下进一步进行解析:AlCl3、NaCl、H2O2。结果显示大部分筛选所得克隆对AlCl3在浓度为5.5 mmol/L时表现出耐受性。在NaCl、H2O2条件下不同克隆之间表现出不同的耐性。
- 孙博卜媛媛张梅华高野哲夫柳参奎
- 关键词：碱茅CDNAS铝胁迫酵母
- 拟南芥未知基因At018融合蛋白原核表达条件的优化及纯化被引量：4
- 2015年
- 本课题组在前期的研究中利用Al Cl3胁迫筛选碱茅全长c DNAs酵母表达文库获得到一个与铝毒害相关的未知基因(基因编号为018,用put018表示),该基因与拟南芥中未知基因(基因号为At5g57345,本研究中用At018表示)有较高的同源性。为了获得At018的纯化蛋白,本研究将拟南芥At018基因克隆后构建原核表达载体p GEX-6p-3-At018,再将其转入大肠杆菌BL21(DE3)菌株,利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达。同时运用传统方法优化诱导条件,以提高重组融合蛋白的表达效率。SDS-PAGE分析结果表明,30℃下0.1 mmol/L IPTG的条件下诱导3 h后,GST-At018融合蛋白的表达量最大,蛋白分子质量与预测值相符,该蛋白主要以可溶性形式存在;接着利用Glutathione Sepharose4 Fast Flow亲核层析树脂纯化最终获得GST-At018融合蛋白。本研究可为进一步进行At018的功能解析提供基础。
- 孙博卜媛媛高野哲夫柳参奎
- 关键词：拟南芥原核表达蛋白纯化
