于晓方
- 作品数：18 被引量：13H指数：2
- 供职机构：吉林大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 一种用于HIV‑1 B/C亚型的预防性重组VLP疫苗及制备方法
- 本发明公开了一种用于HIV‑1B/C亚型的预防性重组VLP疫苗及制备方法，制备方法为：用编码HIV‑1B/C亚型Gag/Pol、Env蛋白的重组MVA病毒感染原代鸡胚成纤维细胞，表达出Gag、Pol和Env蛋白，包装并分...
- 王涛于晓方庞正袁文肃武晓丽杨英
- 文献传递
- SAMHD1蛋白抗病毒作用机制研究的新进展
- 2016年
- 作为新发现的抗病毒因子,SAMHD1蛋白是近年来分子生物学界研究的热点,但是其抗病毒作用机制尚不明确。已经报道的可能的抗病毒作用机制包括d NTP水解酶活性和T592位点的磷酸化状态。随着近两年来研究的不断发展,SAMHD1蛋白的RNA酶活性和维持基因组稳定性的重要作用相继被发现。与此同时,SAMHD1蛋白的多聚体结构也受到了广泛的关注,从最初得到的二聚体晶体,到最近证实了GTP作为激活剂才能形成有抗病毒活性的同源四聚体,SAMHD1蛋白的多聚体结构及形成机制都得到了新的阐释。综合各种已知的生物学功能以及结构方面的信息,结合最新发表的研究成果,深入而全面地分析了SAMHD1蛋白复杂的抗病毒作用机制。
- 侯靖威杜娟郑雯雯于晓方
- 关键词：多聚体晶体结构
- 一种二联手足口病灭活疫苗及其制备方法
- 本发明涉及生物技术领域，公开了两种手足口病病毒株以及由该两种病毒株制备的二联手足口病灭活疫苗。将保藏编号为CGMCC No.7753的人肠道71型病毒株CC‑09和保藏编号为CGMCC No.7752的柯萨奇A16型病毒...
- 于晓方张文艳李景良
- 文献传递
- 抗HIV的药物靶点及其在制药中的用途
- 本发明公开了一种抗HIV的药物靶点及其在制药中的用途，该药物靶点针对病毒的Vif蛋白与宿主细胞CBFβ蛋白之间的相互结合位点；该结合位点包括CBFβ的Helix4和Loop3，以及Vif的N端的前98个氨基酸以及第144...
- 于晓方张文艳杜娟
- 文献传递
- 病毒蛋白Vpx介导抗病毒因子SAMHD1降解的研究进展
- 2016年
- 艾滋病是由于HIV感染引起的一种致死率极高的传染病。在HIV-2/SIV中特异性表达的Vpx蛋白可以促进病毒在特定细胞中的复制。这种促进作用是由Vpx介导CRL4E3复合物形成,进而通过蛋白酶体途径降解抗病毒因子SAMHD1实现的。SAMHD1蛋白的多个结构域,包括N末端、入核信号、连接区、HD结构域、以及C末端对于Vpx诱导的降解都具有重要意义。缺少Vpx的HIV-1在进化过程中也逐渐获得了抵御宿主抗病毒因子SAMHD1的能力,如对低dNTPs水平的忍耐力及通过cyclin L2对SAMHD1进行降解。本文依据文献发表的时间进程,结合最新研究成果,对Vpx介导SAMHD1降解并促进病毒感染的作用机制进行综述。
- 侯靖威杜娟赵可于晓方
- 关键词：CYCLIN
- 人APOBEC3H hap Ⅱ在昆虫表达系统中的表达及其纯化
- 2016年
- 目的构建重组人APOBEC3H hapⅡ(A3H hapⅡ)杆状病毒表达载体,在昆虫细胞表达系统中表达,表达产物经Ni-NTA亲和层析柱纯化。方法采用PCR方法扩增A3H hapⅡ基因并加入His标签后,克隆至杆状病毒转移载体p Fast Bac1中,转化E.coli DH10Bac感受态细胞进行重组,构建质粒Bacmid-A3H hapⅡ-His。将质粒转染昆虫细胞sf9获得P1病毒,扩增后获得P3病毒,感染sf9细胞表达目的蛋白,并进行Western blot鉴定。经Ni-NAT树脂亲和层析柱对表达的蛋白进行纯化,并通过免疫共沉淀试验检测A3H hapⅡ-His与其相互作用蛋白HIV-1 Vif之间的特异性结合。结果成功构建了质粒Bacmid-A3H hapⅡ-His;P3病毒感染sf9细胞后成功表达出相对分子质量约20 000的目的蛋白,且能够与HIV-1 Vif特异性结合。结论成功建立A3H hapⅡ昆虫表达体系,为进一步研究A3H hapⅡ与HIV-1 Vif之间的相互作用机制,并针对其相互作用位点设计抗HIV药物奠定了基础。
- 李婷王虹张晓红董燕王涛于晓方韩雪
- 关键词：基因表达纯化
- 肿瘤抑制剂MLN4924在制备抗病毒药物中的应用
- 本发明公开了肿瘤抑制剂MLN4924在制备抗病毒药物中的应用。通过实验证明在抗肿瘤临床人体试验中有较好表现的小分子抑制剂MLN4924具有较强的抗病毒活性，通过抑制病毒辅助蛋白作用，能够达到大于80%的抑制病毒复制。由于...
- 于晓方魏伟郭浩然
- 文献传递
- 一种用于HIV-1 B/C亚型的预防性重组VLP疫苗及制备方法
- 本发明公开了一种用于HIV-1B/C亚型的预防性重组VLP疫苗及制备方法，制备方法为：用编码HIV-1B/C亚型Gag/Pol、Env蛋白的重组MVA病毒感染原代鸡胚成纤维细胞，表达出Gag、Pol和Env蛋白，包装并分...
- 王涛于晓方庞正袁文肃武晓丽杨英
- 人类肠道病毒68型3A蛋白可溶区的表达及其结构初步研究
- 2015年
- 为了解人类肠道病毒68型3A蛋白可溶区的结构,本研究构建了EV-D68 3A蛋白可溶区的原核表达载体,在大肠杆菌中表达、纯化并对其结构进行了初步研究。首先,采用PCR的方法扩增EV-D68 3A（1~61）基因片段,克隆至原核表达载体pET-28a-His-SUMO中,转化进入BL21（DE3）感受态细胞,诱导表达出His-SUMO-3A（1~61）融合蛋白。经Ni-NTA树脂亲和层析初步纯化后得到大量融合蛋白,利用ULP酶酶切去除His-SUMO标签,通过Ni-NTA树脂亲和层析、阴离子交换层析柱、分子筛层析等方法分离标签并进一步纯化目的蛋白。最后通过化学交联反应检测目的蛋白的多聚化状态。结果显示,利用pET28a-His-SUMO-3A（1~61）原核表达载体能够在大肠杆菌中成功表达出大量可溶性的融合蛋白;经过多步纯化方法得到了大量高纯度的目的蛋白,平均每升大肠杆菌可得到约5mg目的蛋白,纯度达95%以上;通过化学交联反应证明了该蛋白的多聚化存在形式。本研究成功建立了EV-D68 3A蛋白可溶区的表达和纯化系统,为进一步获得3A蛋白晶体、研究3A蛋白功能以及设计以3A为靶点的抗病毒药物奠定了基础。
- 李婷孔佳于晓方韩雪
- 关键词：非结构蛋白交联反应
- 柯萨奇病毒A组16型感染性滴度检测用国家参考品的制备及标定被引量：2
- 2016年
- 目的 制备柯萨奇病毒A组16型（coxsackievirus A16,CA16）感染性滴度检测用国家参考品,为CA16疫苗生产过程中的病毒滴度控制和CA16疫苗的免疫效果评价提供国家参考品.方法 将验证合格的CA16（C1亚型）培养液分装（0.5 ml/支）制成候选参考品.3个独立实验室分别对候选参考品进行协作标定,用细胞培养法检测CA16感染性滴度,用Behrens-K（a）rber法计算半数细胞感染量（50％ cell culture infective does,CCID50）.同时,将CA16参考品分别置于-20、4、22～25（室温）和37℃条件下或反复冻融,进行热稳定性、长期稳定性和冻存稳定性研究.结果 制备的CA16参考品的病毒滴度为（6.80±0.95） lgCCID50/ml.CA16参考品于-60℃保存12个月、-20℃保存6个月和4℃保存28 d后的病毒滴度无显著下降,表明稳定性较好;在22～25℃（室温）和37℃条件下,CA16参考品每天的病毒滴度损失率分别为3.4％和4.4％,而且分别保存27和21 d后病毒滴度无明显下降;对CA16参考品反复冻融的病毒滴度损失率为4.8％/次.结论 成功制备了CA16感染性滴度检测用候选国家参考品,将CA16参考品赋值确定为（6.80±0.95） lgCCID50/ml.
- 杜加亮刘悦越于晓方张文艳贾双双刘艳赵岩国泰
- 关键词：肠道病毒属国家参考品
