张笠
- 作品数：12 被引量：14H指数：2
- 供职机构：广西大学动物科学技术学院更多>>
- 发文基金：广西壮族自治区科学研究与技术开发计划国家自然科学基金国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生化学工程更多>>
- 蛋白酶抑制剂E-64对猪卵母细胞体外成熟的影响
- 目的为了研究在猪卵母细胞成熟过程中在成熟液中添加蛋白酶抑制剂E-64对猪卵母细胞体外成熟的影响。方法试验采用在成熟液中添加不同浓度的E-64进行体外培养44h后统计极体率,计算卵母细胞的极体率,确定最佳浓度为10μmol...
- 司景磊张笠黄玥萌郭亚芬蒋钦杨
- 关键词：卵母细胞体外成熟蛋白酶抑制剂
- 蛋白酶抑制剂E-64对猪卯母细胞体外成熟的影响
- 目的 为了研究在猪卵母细胞成熟过程中在成熟液中添加蛋白酶抑制剂E-64对猪卵母细胞体外成熟的影响.方法 试验采用在成熟液中添加不同浓度的E-64进行体外培养44h后统计极体率，计算卵母细胞的极体率，确定最佳浓度为10μm...
- 司景磊张笠黄玥萌郭亚芬蒋钦杨
- 关键词：卵母细胞体外成熟蛋白酶抑制剂
- 蛋白酶抑制剂E-64对猪卵母细胞体外成熟的影响
- 2016年
- 为了研究猪卵母细胞成熟过程中在成熟液中添加蛋白酶抑制剂E-64对猪卵母细胞体外成熟的影响,试验采用在成熟液中添加不同浓度的E-64进行体外培养44 h后统计成熟率,计算卵母细胞的成熟率,确定最佳浓度为10μmol/L。将10μmol/L组、未添加组的卵母细胞进行固定、染色,鉴定卵母细胞核成熟情况。结果表明:在猪卵母细胞成熟液中添加10μmol/L的E-64,成熟率和核成熟率显著高于未添加组,并能显著提高猪孤雌卵母细胞的分裂率和囊胚发育率。
- 司景磊张笠黄玥萌程晓芳李龙龙开旭夏利郭亚芬蒋钦杨
- 关键词：卵母细胞体外成熟蛋白酶抑制剂
- 广西巴马小型猪PAQR3基因克隆及表达谱分析被引量：1
- 2016年
- 【目的】克隆广西巴马小型猪孕激素和脂联素分子受体3(PAQR3)基因,并研究该基因在广西巴马小型猪不同组织中的表达特性,为揭示PAQR3的功能及其在疾病模型中的作用打下基础。【方法】采用RT-PCR扩增广西巴马小型猪PAQR3基因,应用在线预测软件对其功能和结构进行生物信息学分析,并以q RT-PCR分析PAQR3基因在不同组织中的表达特性及高脂高糖诱导后的表达水平。【结果】广西巴马小型猪PAQR3基因编码区(CDS)序列全长936 bp,编码312个氨基酸,与人类(XM_006714106.2)、猕猴(NM_001257693.1)、牛(XM_010806259.1)、家犬(XM_014109889.1)、家鼠(XM_006534874.2)、羊(XM_012180242.1)、鸡(XM_001233720.3)PAQR3氨基酸序列的一致性在81%以上,其中与猕猴的亲缘关系最近,与牛的亲缘关系相对较远。PAQR3蛋白氨基酸序列包含保守的Hly IⅡ结构域,为亲水性蛋白,有7个跨膜螺旋结构;其二级结构主要是延伸链,占31.83%;该蛋白不存在信号肽,不属于分泌蛋白。q RT-PCR分析结果表明,PAQR3基因在广西巴马小型猪的不同组织中均有表达,以在肺脏中的表达量最高、脂肪中的表达量最低;经高脂高糖诱导后,PAQR3基因在广西巴马小型猪肝脏组织中的表达水平显著降低(P<0.05)。【结论】PAQR3基因在广西巴马小型猪不同组织中广泛表达,在胆固醇和甘油三脂充裕的条件下,机体可通过下调PAQR3基因的表达量来平衡胆固醇含量。
- 司景磊黄玥萌李龙陈秋明严雪瑜吴延军张笠蒋钦杨兰干球郭亚芬
- 关键词：广西巴马小型猪克隆表达谱分析
- 广西巴马小型猪ABCA1基因真核表达载体的构建与鉴定
- 2016年
- 本研究目的是克隆广西巴马小型猪ABCA1基因CDs序列并构建真核表达载体。利用RT-PCR技术从广西巴马小型猪肝脏组织中扩增出ABCA1基因编码序列,直接插入至pEGFP-N1真核表达载体的KpnⅠ酶切位点,构建出重组质粒。之后将重组质粒pEGFP-N1-ABCA1转染PK15细胞,并于24 h、48 h后观察细胞荧光表达情况。收集转染48 h后的PK15细胞通过qRT-PCR检测ABCA1 mRNA相对表达量。结果表明:本实验成功构建了广西巴马小型猪ABCA1基因真核表达载体,重组质粒pEGFP-N1-ABCA1转染PK15细胞后,有绿色荧光蛋白表达,且与转染pEGFP-N1和空白组相比,pEGFP-N1-ABCA1转染组的ABCA1 mRNA表达量显著提高。本研究为下一步研究ABCA1基因的功能和调控及生产转ABCA1基因广西巴马小型猪奠定基础。
- 黄玥萌张笠郭亚芬蒋钦杨兰干球
- 关键词：广西巴马小型猪转基因猪
- 猪肾细胞(PK15细胞)ABCA1基因与miRNA-758关系的研究
- 2018年
- 为了研究猪肾细胞(PK15细胞)中三磷酸腺苷结合盒转运蛋白A1(ABCA1)mRNA与miRNA-758表达量之间的关系,试验利用miR-758模拟物、miR-758抑制物及其各自的阴性对照分别转染PK15细胞,利用Real-time qPCR技术检测转染24 h后细胞内ABCA1 mRNA与miR-758相对表达量并讨论其之间的关系。结果表明:在PK15细胞中转染miR-758模拟物、miR-758抑制物及其各自的阴性对照后,ABCA1 mRNA表达量均极显著升高(P<0.01)。转染miR-758模拟物的PK15细胞miRNA-758表达量高于对照组30 000多倍,差异极显著(P<0.01);而其他转染组miR-758表达量均低于对照组,但差异不显著(P>0.05)。说明miR-758模拟物、miR-758抑制物及其各自的阴性对照均可导致PK15细胞内ABCA1 mRNA表达量升高;miR-758模拟物可促进PK15细胞miR-758表达量上升30 000多倍,而对ABCA1 mRNA表达量并未表现出抑制作用,PK15细胞中ABCA1mRNA的表达量不受miR-758模拟物影响或受影响小;miR-758抑制物确实能够抑制miR-758表达量,并使ABCA1 mRNA表达量升高。
- 张笠司景磊黄玥萌郭亚芬兰干球蒋钦杨
- 关键词：模拟物抑制物PK15细胞
- 广西巴马小型猪SAP真核表达载体的构建及胚胎水平表达被引量：1
- 2016年
- 本研究的目的是构建广西巴马小型猪SAP真核表达载体并在胚胎水平对其进行验证。利用RT-PCR技术扩增并克隆SAP基因,再用T4连接酶将其连入P-Dsred-N1载体,构建P-Dsred-N1-SAP载体,并通过胞质注射生产转SAP的猪胚胎。结果表明,本研究成功构建了P-Dsred-N1-SAP重组载体,经胞质注射后在胚胎发育早期和囊胚期均有红色荧光表达。本研究为下一步研究SAP基因的功能和生产转SAP基因猪奠定基础。
- 张笠黄玥萌吴延军司景磊兰干球郭亚芬蒋钦杨
- 关键词：广西巴马小型猪转基因猪
- 广西巴马小型猪TXNIP基因真核表达载体的构建及鉴定
- 2015年
- 为了克隆广西巴马小型猪硫氧还蛋白相互作用蛋白基因(TXNIP)序列并构建真核表达载体,为生产转TXNIP基因的广西巴马小型猪奠定基础,试验采用RT-PCR技术从广西巴马小型猪胰腺组织中扩增出TXNIP基因编码序列,连接至p MD18-T载体,测序鉴定后提取质粒,用SalⅠ和EcoRⅠ限制性内切酶进行双酶切,回收的TXNIP片段连接至p EGFP-C1载体上,构建含TXNIP的真核表达载体p EGFP-C1-TXNIP;利用双酶切和测序对重组质粒p EGFP-C1-TXNIP进行鉴定,并将重组质粒转染β-TC6细胞24 h后观察细胞荧光表达情况。结果表明:广西巴马小型猪TXNIP基因编码区序列长1 176 bp,编码391个氨基酸,与Gen Bank已公布的猪TXNIP基因c DNA序列(序列号为DQ278874)对应区段同源性为99.7%;重组表达载体p EGFP-C1-TXNIP质粒转染β-TC6细胞能表现出绿色荧光。
- 张笠韦玲静周亭亭蒋钦杨兰干球郭亚芬
- 关键词：广西巴马小型猪基因重组质粒真核表达载体
- 广西巴马小型猪α-1,3-半乳糖转移酶基因RNAi载体构建与检测被引量：5
- 2015年
- α-1,3-半乳糖转移酶基因(α-1,3 GT)在异种器官移植中的免疫排斥反应有重要的作用,本研究旨在构建α-1,3-半乳糖转移酶基因的干扰载体,在m RNA和蛋白质水平鉴定并筛选出干扰效果最佳的序列。根据巴马小型猪GGTA1基因CDS序列,设计合成3对特异性单链si RNA序列以及一对阴性序列,构建GGTA1 RNA干扰载体分别命名为p LLU2G-sh GGTA1-1、p LLU2G-sh GGTA1-2、p LLU2G-sh GGTA1-3和p LLU2G-sh GGTA1-NC。将构建好的载体分别转染转染PK15细胞,通过q RT-PCR和Western blot检测GGTA1 m RNA及其蛋白的相对表达量。结果显示本研究成功构建了3个重组RNAi表达载体,与转染p LLU2G-NC和空白组相比,p LLU2G-sh GGTA1-1、p LLU2G-sh GGTA1-2和p LLU2G-sh GGTA1-3转染组的GGTA1 m RNA和蛋白表达量均明显下降,对m RNA表达的抑制效率分别为85.02%、86.05%和83.85%。本研究成功获得有效抑制广西巴马小型猪GGTA1基因表达的RNAi载体,为下一步生产沉默GGTA1基因广西巴马小型猪奠定基础。
- 郭晓萍陈时锦张笠蒋钦杨兰干球郭亚芬
- 关键词：巴马小型猪RNAI
- 聚乙烯醇和卵泡液添加方式对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎发育的影响
- 2015年
- 本试验研究目的在于探讨在猪卵母细胞体外成熟(IVM)过程中,聚乙烯醇(polyvinyl alcohol,PVA)和猪卵泡液(porcine follicular fluid,PFF)添加方式对猪卵母细胞体外成熟及孤雌激活早期胚胎发育的影响。卵母细胞、卵丘细胞复合体(COCs)在含有HCG和PMSG的改良TCM-199+10%FBS+10%猪卵泡液(PMH-PFF)或改良TCM-199+10%FBS+0.1%PVA(PMH-PVA)成熟液中培养22~23 h;再移至无HCG和PMSG的PM-PFF或PM-PVA的成熟液中成熟培养至44 h。试验:(1)处理组1:使用PMH-PFF培养22~23 h后,更换PM-PFF继续培养至44 h;(2)处理组2:使用PMH-PFF培养22~23 h后,更换PM-PVA继续培养至44 h;(3)处理组3:使用PMH-PVA培养22~23 h后,更换PM-PVA继续培养至44 h;(4)处理组4:使用PMH-PVA培养22~23 h后,更换PM-PFF继续培养至44 h。将在不同成熟体系中IVM 44 h后的卵母细胞进行固定染色,鉴定卵母细胞核和细胞质成熟情况;对在不同处理组的成熟液中成熟培养44 h的卵母细胞进行孤雌激活后放入PZM-3中培养,分别于第2天、第7天统计分裂率和囊胚发育率。结果表明:经44 h成熟培养后,处理组1卵母细胞核成熟率(42.00%)显著低于处理组2(64.67%)、处理组3(69.00%)、处理组4(64.33%)核成熟率(p<0.05)。处理1、处理2、处理4的卵母细胞皮质颗粒分布类型Ⅲ比例(62.00%/54.67%/46.67%)均高于处理组3(28.67%),且处理组1、处理组2卵母细胞皮质颗粒分布类型Ⅲ比例显著高于处理组3卵母细胞皮质颗粒分布类型Ⅲ比例(p<0.05)。处理组1、处理组2、处理组4孤雌分裂率(81.92%/76.00%/73.33%)均高于处理组3(69.00%)。处理组3孤雌激活囊胚率(9.67%)显著低于处理组1(23.33%)、处理组2(25.00%)、处理组4(23.00%)(p<0.05)。结果表明,在本研究条件下,处理组2的各项指标均优于其它组,IVM液中添加猪卵泡液培养22~23 h后更换添加有PVA的IVM液继续培养至44 h,更有利于促进IVM猪卵母细胞核成熟、胞质成熟以及早期孤雌胚胎发育。
- 张笠沈开元黄玥萌司景磊程晓芳蒋钦杨刘庆友郭亚芬郭亚芬兰干球
- 关键词：卵母细胞体外成熟
