王晓晓
- 作品数：12 被引量：1H指数：1
- 供职机构：大连理工大学更多>>
- 发文基金：中央高校基本科研业务费专项资金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：交通运输工程生物学建筑科学医药卫生更多>>
- 大肠杆菌tRNASec体外定向进化研究
- 硒代半胱氨酸(Selenocysteine，Sec，U)是第21种天然氨基酸，由终止密码子UGA编码，通过复杂机制掺入多肽链中形成硒蛋白(Selenoprotein)。硒蛋白广泛存在于生物体中，可以调节机体氧化应激、影响...
- 王晓晓
- 关键词：大肠杆菌定向进化
- 文献传递
- 大肠杆菌tRNA^Sec关键核苷酸位点
- 2020年
- 在原核生物中,硒蛋白合成需要tRNA^Sec(SelC)与硒代半胱氨酸合成(Sec synthase,SelA)、硒代半胱氨酸特异性延伸因子(Sec-specificelongationfactor,SelB)之间相互作用。【目的】基于大肠杆菌掺硒机器,寻找tRNA^Sec骨架上关键核苷酸位点,为解决硒蛋白目前面临的掺硒效率较低、产量低的问题提供新思路。【方法】以大鼠细胞质型硫氧还蛋白还原酶(thioredoxinreductase1,TrxR1)为掺硒模式蛋白为定点突变tRNA^Sec,转化至BL21(DE3)gor-获得阳性重组菌株(携带pET-TRSter/pSUABC’),用于表达大鼠硒蛋白TrxR1,然后使用2￠,5￠ADP-Sepharose亲和层析和凝胶过滤两步法分离纯化TrxR1,最后利用经典硒依赖型DTNB还原反应测定TrxR1的酶活,分析关键核苷酸位点,评价掺硒效率。【结果】在存在SECIS元件的前提下,当SelA、SelB、tRNA^Sec共表达时,与野生型相比,携带突变型tRNA^Sec所共表达的TrxR1酶活力呈现不同程度的降低,其中E.colitRNA^Sec的G18、G19这两个位点的所有的TrxR1酶活远低于野生型(<10%);然而,a26和b7的酶活相对较高。【结论】E.coli tRNA^Sec骨架上G18和G19位点对于维持tRNA稳定性和灵活性发挥了关键作用,位点突变引起tRNA结构变化会影响tRNA^Sec与掺硒元件的互作,因此有望通过改造tRNA核苷酸位点来提高硒蛋白的掺硒效率。
- 王晓晓孙世博张意慈张楠陈继红徐卫平马强马强
- 关键词：大肠杆菌硒代半胱氨酸硒蛋白
- 一种提高硒蛋白TrxR表达的方法
- 一种提高硒蛋白TrxR表达的方法，属于蛋白原核表达技术领域。在TrxR的原核表达过程中，首先在37℃、220rpm条件下培养表达菌株至对数生长末期。然后向培养基中加入L‑半胱氨酸、亚硒酸钠、异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)...
- 许建强张竞争徐卫平孙世博关水马昆薛宏宇王晓晓张楠
- 地震、波浪作用下连续刚构桥试验及数值分析
- 桥梁是跨越山河湖泊等地域障碍的交通运输线上的重要一环，连续刚构桥由于方便施工、跨越能力强、受力性能合理、经济性能良好，所以广泛的应用到实际工程中。与陆地桥梁相比大跨度连续刚构桥所处环境复杂，在整个寿命周期中会受到地震、波...
- 王晓晓
- 关键词：连续刚构桥地震作用波浪作用动力响应
- 一种提高硒蛋白TrxR表达的方法
- 一种提高硒蛋白TrxR表达的方法，属于蛋白原核表达技术领域。在TrxR的原核表达过程中，首先在37℃、220rpm条件下培养表达菌株至对数生长末期。然后向培养基中加入L‑半胱氨酸、亚硒酸钠、异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)...
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- 文献传递
- 一种高效简易的ADP配基层析介质的保护方法
- 本发明属于亲和层析技术领域，提供一种高效简易的ADP配基层析介质的保护方法。向黄素蛋白TrxR粗酶液中加入螯合剂，螯合粗酶液中的Mg<Sup>2+</Sup>，抑制DNase活性，保护ADP配基。用TE缓冲液平衡2’5’...
- 许建强张竞争徐卫平孙世博关水马昆魏宁宁王晓晓张楠
- 文献传递
- 一种添加无机硒进行河蟹富硒化的养殖方法
- 本发明属于养殖技术领域，提供一种添加无机硒进行河蟹富硒化的养殖方法，通过制作一种添加无机硒并能够满足河蟹在不同生长阶段的营养需求的富硒饲料，采用在集装桶内投喂含有富硒饲料的方式，明显提高河蟹体内的硒含量。本发明提供的河蟹...
- 许建强徐卫平汤辛哲李晓东孙世博马昆王晓晓
- 文献传递
- 轻量化铝板—钢梁胶接结构的模态及静刚度分析
- 随着能源危机与环境危机的日益加剧，以节能减排为目标的轻量化技术已然成为汽车行业发展的潮流趋势。目前，轻质高性能材料的使用是最为直接、有效的轻量化方法，但这势必会带来异质材料之间的连接问题。然而，胶接技术的使用顺利解决了这...
- 王晓晓
- 关键词：轻量化静刚度分析模态分析
- 文献传递
- 一种ADP配基层析介质的保护方法
- 本发明属于亲和层析技术领域，提供一种ADP配基层析介质的保护方法。向硫氧还蛋白还原酶TrxR粗酶液中加入螯合剂，螯合粗酶液中的Mg<Sup>2+</Sup>，抑制DNase活性，保护ADP配基。用TE缓冲液平衡2’5’A...
- 许建强张竞争徐卫平孙世博关水马昆魏宁宁王晓晓张楠
- 文献传递
- 一种改善黄素蛋白TrxR纯化的方法
- 一种改善黄素蛋白纯化的方法属于蛋白纯化技术领域。包括：以含有黄素蛋白TrxR的大肠杆菌为原材料，加入TE buffer使菌体充分混匀，再加入溶菌酶37℃作用0.5‑1h，充分破碎细胞得到混合液A，破碎其中核酸，对混合液A...
- 许建强张竞争徐卫平孙世博关水马昆薛宏宇王晓晓张楠
- 文献传递
