张顺
- 作品数：11 被引量：13H指数：3
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- 不同培养液对兔孤雌激活胚胎体外发育的影响
- 探讨不同培养基对兔卵母细胞孤雌激活胚体外发育的影响,以期建立一个完善的兔胚胎体外培养体系,为兔的核移植研究奠定基础。方法:体外成熟培养22h的兔卵母细胞,经Ion 5min和2mmol/mL6-DMAP+5μg/mL C...
- 杨金姬向舒石金月张顺孙洪亮陆凤花石德顺
- 关键词：体外培养
- 文献传递
- 兔卵母细胞体外成熟培养条件的研究
- 主要探讨兔卵巢保存温度、运输时间及季节对家兔卵母细胞体外成熟培养效果的影响。①从屠宰场获取的兔卵巢分别保存在25～29℃、30～35℃、36～40℃生理盐水中运回实验室,从卵巢上收集到的卵母细胞体外成熟18～22h,观察...
- 石金月张顺向舒杨金姬陆凤花石德顺
- 关键词：卵母细胞体外成熟
- 文献传递
- ICSI介导生产转基因牛胚胎影响因素的研究被引量：1
- 2014年
- 采用牛体外成熟卵母细胞和冷冻解冻的精子为材料,以pEGFP-N1为模式基因,探讨DNA浓度、精子质膜破损方法、注射台温度对牛精子胞质内注射(ICSI)介导转基因效果的影响。结果表明:线性pEGFPN1质粒DNA浓度为5μg/mL、10μg/mL两组的早期胚胎发育率显著高于50μg/mL组(19.8%,16.7%VS 7.9%,p<0.05)。以冻融、TritonX100、超声波断尾三种方法破损精子质膜,冻融组的囊胚发育率(24.7%)最高,且冻融组的早期胚胎基因表达率极显著高于超声断尾组(41%VS 20.5%,p<0.01);当分别在25℃、38℃的注射台进行显微注射时,两组之间胚胎的囊胚率无显著差异(p>0.05),但二者之间胚胎的基因表达率差异显著(46.83%VS 28.57%,p<0.05)。以上结果表明:(1)牛精子转染外源GFP基因的浓度不宜过高,转染高浓度的DNA会影响胚胎发育;(2)精子质膜是阻碍外源DNA与牛精子相结合的主要因素,将精子冻融处理可有效破损其质膜,利于精子与外源DNA的结合,从而提高ICSI介导转基因效率;(3)25℃和38℃热台温度对牛ICSI胚胎的早期发育无影响,但25℃热台温度可提高牛ICSI介导转基因的效果。
- 孟凡丽陈自洪陆凤花刘庆友罗婵张顺王丹石德顺
- 猪卵母细胞体外成熟的发育潜力及核移植重构胚构建方法的研究被引量：3
- 2009年
- 为了提高猪体细胞核移植重构胚发育潜力,本研究对体外成熟28h、32h、36h、40h、44h、48h、52h和56h的猪卵母细胞分别进行去核构建重构胚。研究结果表明,成熟44h的卵母细胞核移植后有较高的融合率(58.99%)、卵裂率(67.52%)和囊胚率(22.78%),而成熟48h的卵母细胞则分别为56.51%、65.73%和15.96%;且卵龄为44h的卵母细胞核移植后分裂率与囊胚率显著高于卵龄为40h、36h、32h、28h的卵母细胞的分裂率与囊胚率(P<0.05)。卵龄为48h的卵母细胞融合率高于卵龄为52h卵母细胞的融合率(P<0.05)。同时我们还探讨了不同去核方法(盲吸法、Hochest33342染色法和Spindle-view system)对猪体细胞核移植重构胚发育能力的影响。研究结果发现,盲吸法、Hoechest33342染色法和Spindle-view system法的去核率分别达到76.33%,100.00%和98.40%。Hoechest染色法去核率显著高于盲吸法的去核率(P>0.05),而与Spindle-view法去核率没有差异(P>0.05)。三种方法在融合率和囊胚率方面差异不显著(P>0.05),但Hoechest染色法的分裂率较低,差异显著(P<0.05)。进一步的研究表明,细胞质内注射进行核移植构建重构胚的分裂率和囊胚率分别为68.13%和6.44%;透明带下注射法则为60.37%和8.08%,两者差异不显著(P<0.05);两者均可运用于猪体细胞的核移植,这为建立有效的猪体细胞核移植体系提供了参考。
- 黄雅琼石德顺张晓溪张顺谭世俭陆凤花王晓丽杨素芳蒋建荣刘庆友
- 关键词：卵母细胞核移植重构胚发育潜力
- 兔卵母细胞孤雌激活方法的研究
- 2011年
- 对兔卵母细胞的孤雌激活方法进行探讨,为兔的体细胞核移植奠定良好的技术平台。体外成熟培养20～22h的兔卵母细胞随机分组,分别进行以下试验:采用不同脉冲电压、脉冲次数和脉冲时间,电激活兔卵母细胞,摸索最佳电激活参数;比较不同的激活方法处理兔卵母细胞的效果,Ⅰ:Ion 5min+6-DMAP 3h,Ⅱ:Ion 5min+CHX 3h,Ⅲ:Ion 5min+6-DMAP联合CHX 3h,Ⅳ:电激1次联合6-DMAP+CHX 3h;优化6-DMAP与CHX作用时间。结果显示:当电激参数为:电压40V/mm,脉冲时间20μs和脉冲次数3次时,兔孤雌胚的分裂率和囊胚率最高,可达80.64%和14.51%;采用第Ⅳ种方法激活兔的卵母细胞,胚胎的分裂率和囊胚率(80.64%,13.71%)均显著高于Ⅰ组(66.67%,8.6%)和Ⅱ组(43.21%,1.24%,P<0.05),略高于第Ⅲ组(77.59%,12.07%);当兔孤雌胚分别在含6-DMAP和CHX的CM中培养1h和3h时,1h处理组在分裂率(80.68%vs 77.59%)和囊胚率(15.91%vs 12.07%)上都略高于3h处理组。结果表明:兔卵母细胞经Ion处理5min,或先电激1次(参数为电压40V/mm,脉冲时间20μs,脉冲3次),再用2mmol/L 6-DMAP+5mg/L CHX处理1～3h,均可获得较好的激活效果,有利于兔孤雌胚的发育。
- 向舒杨金姬石金月张顺王建陆凤花石德顺
- 关键词：电激活6-DMAP放线菌酮
- 水牛GLUT3基因的克隆与序列分析被引量：1
- 2013年
- 为了研究GLUT 3的功能,试验根据GenBank中公布的牛、人等物种的GLUT 3核苷酸序列设计、合成1对引物,以水牛卵巢组织总RNA为模板,采用RT-PCR法扩增出GLUT 3成熟蛋白编码cDNA序列,将此扩增产物克隆入pMD 18-T载体,进行PCR、双酶切鉴定及序列测定与分析。结果表明:扩增的水牛GLUT 3基因CDS序列长为1 701 bp,经相关生物软件预测,该基因编码494个氨基酸。水牛GLUT 3基因ORF序列与牛、山羊、人、大鼠、猪同源性分别为100%、100%、99%、94%和81%;蛋白序列与牛、山羊、人、大鼠、猪同源性分别为100%、99%、99%、99%和97%。说明GLUT 3是一组在进化上高度保守的蛋白质。
- 李楠刘荣立柯浩阮秋燕苏杰孙洪亮朱鹏张顺蒋建荣陆凤花石德顺
- 关键词：水牛
- 兔卵母细胞体外成熟培养影响因素的研究
- 2011年
- 为了研究兔卵巢保存温度、运输时间及季节对兔卵母细胞体外成熟培养效果的影响,试验把从屠宰场获取的兔卵巢分别保存在25～30℃、31～35℃、36～40℃的生理盐水中运回实验室,将采集到的卵母细胞体外成熟22～24 h,比较兔卵巢分别在<3 h、≥3～≤4 h、>4 h 3个不同时间段运回实验室对卵母细胞体外成熟的影响。结果表明:卵巢保存在25～30℃生理盐水时,卵母细胞体外成熟率为61.09%,显著高于另两者(26.30%、15.79%,P<0.05)。卵巢运输时间>4 h时,卵母细胞的成熟率为50.23%,显著低于另两者(64.24%5、9.64%,P<0.05)。夏季从屠宰场收集兔卵巢得到卵母细胞体外成熟率为32.65%,显著低于春季、秋季和冬季(64.26%、58.37%6、4.86%,P<0.05),但春季、秋季和冬季之间差异不显著(P>0.05)。说明在春季、秋季和冬季收集兔卵巢,放在25～30℃生理盐水中保存,在4 h内送回实验室,有利于卵母细胞的成熟培养。
- 石金月杨金姬向舒张顺苏丽琼蒋建荣石德顺陆凤花
- 关键词：卵母细胞体外成熟保存温度运输时间
- 不同血清类型对水牛胚胎体外培养效果的影响被引量：1
- 2011年
- 从屠宰场收集水牛卵巢上抽取的卵母细胞,经体外成熟培养后分别进行孤雌激活(PA)和体外受精(IVF),将获得的PA或IVF胚胎分别培养于添加浓度均为5%的牛血清白蛋白(BSA)、胎牛血清(FBS)、发情水牛血清(OBS)、发情牛血清(OCS)和混合血清(OCS与FBS按1:1混合)的培养液中培养7～9 d,并观察胚胎的体外发育情况。结果,PA胚胎培养在OCS和混合血清组的卵裂率(73.52%,68.07%)和囊胚率(30.59%,27.73%)均显著高于BSA(38.37%,6.40%)、OBS(44.97%,10.05%)和FBS(52.02%,17.04%)组(P<0.05);IVF胚胎的卵裂率和囊胚率以OCS组最高(62.50%,22.62%),显著高于BSA(30.50%,6.38%)、OBS(35.48%,7.10%)和FBS组(40.11%,11.76%,P<0.05),但与混合血清组(60.42%,21.35%;P>0.05)差异不显著。结果表明,在水牛胚胎体外培养体系中添加5%的OCS或混合血清均能有效地促进水牛胚胎的体外发育。
- 蒋建荣凌泽继邹知明陆凤花向舒张顺李楠王建石德顺
- 关键词：血清孤雌激活体外受精胚胎
- 猪卵母细胞体外成熟过程中的减数分裂进程被引量：3
- 2010年
- 本研究主要探讨猪卵母细胞体外成熟过程中的减数分裂进程和卵母细胞的发育潜力。直径>2 mm的卵泡内的卵母细胞体外培养16 h,大部分发生生发泡破裂(germinal vesicle breakdown,GVBD),卵母细胞GV期的比率由0 h的68.00%下降到16 h的15.38%。成熟培养20 h时,终变期(diakinesis,DK)的比率达到峰值(27.06%),而MI的峰值(69.66%)出现在培养后28 h;成熟培养32～44h时,Ana-Ⅰ/Tel-Ⅰ期的比率达到最高(53.33%);成熟培养48 h时,MII期的比率达到最大值(63.64%)。直径<2 mm、2～6mm和>6 mm卵泡的卵母细胞体外成熟培养48 h的成熟率(排出第一极体,PB1)分别为5.12%,66.62%和46.71%;孤雌激活后的分裂率分别为2.86%,72.11%和58.69%;囊胚率分别为0、28.62%和23.46%。直径<2 mm和>6 mm卵泡的卵母细胞的卵裂率明显低于直径2～6mm卵泡的卵母细胞的卵裂率(P<0.05);卵泡直径2～6 mm组和卵泡直径>6 mm组的囊胚率没有显著差异(P>0.05)。研究结果将为猪卵子的核成熟进程和控制减数分裂的研究提供理论依据。
- 黄雅琼石德顺张晓溪张顺陈旭健李家洲曾诗媛阮桂文赵仕花谭世俭
- 关键词：卵母细胞减数分裂体外成熟
- 母兔超数排卵影响因素的研究被引量：4
- 2011年
- 采用国产促性腺激素对新西兰白兔进行超数排卵试验,研究激素、季节及兔龄对超排效果的影响。结果发现:①FSH组(30.05±8.97个/只)平均排卵数显著高于PMSG组(22.46±5.18个/只)(P<0.05)。②母兔在春季、夏季、秋季、冬季的平均排卵数为32.34±5.58、15.96±4.11、24.18±4.95和22.61±3.75个/只,春季的处理效果显著优于其他3个季节(P<0.05),而秋季和冬季处理组之间没有显著差异(P>0.05),但都显著高于夏季(P<0.05)。③经产母兔超排处理后的平均排卵数(30.56±6.79个/只)显著高于青年母兔平均排卵数(21.60±3.66个/只)(P<0.05)。以上结果表明,SH超排效果优于PMSG,且在春季对母兔进行超排处理比较合适,经产母兔比青年母兔超排效果更好。
- 杨金姬张顺石金月向舒蒋建荣韦英明谭世俭石德顺陆凤花
- 关键词：超数排卵FSHPMSG
