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规模养鸭场主要病原菌耐药性检测: 2015年; 为了解贵州省三穗县规模养鸭场主要病原菌耐药性概况,采用琼脂扩散法对3种主要病原菌（大肠杆菌、葡萄球菌和鸭疫里默杆菌）进行药敏试验。试验结果显示：大肠杆菌分离株对青霉素等10种抗生素耐药率高达100%,而对庆大霉素、新霉素、阿奇霉素、多黏菌素B耐药率小于50%;葡萄球菌分离株对庆大霉素、卡那霉素、新霉素和林可霉素敏感率高达100%;除先锋霉素、新霉素、四环素和强力霉素以外,鸭疫里默杆菌对于绝大多数抗生素耐药率高于50%。多重耐药性结果显示：3种主要病原菌存在多重耐药性,其中大肠杆菌多重耐药性最为严重,葡萄球菌相对较轻,而鸭疫里默杆菌则集中在8~14耐。; 李世静嵇辛勤文明张人俊陈佳琪刘廷江雷云陈强; 关键词：病原菌药敏试验耐药性

犬乳腺肿瘤病理组织学观察及ER PR C-erbB-2的表达分析: 2017年; 通过对20例犬乳腺肿瘤进行病理组织学观察、免疫组织化学染色,探讨犬乳腺肿瘤病理形态学特点,ER、PR、Cerb B-2表达与乳腺肿瘤的关系。结果显示,20例犬乳腺肿瘤,70%为恶性肿瘤,其中良性肿瘤有导管内乳头状瘤和纤维性瘤,恶性肿瘤有浸润性导管癌,单纯癌,小叶原位癌,癌肉瘤,腺癌,恶性肿瘤发病率高于良性肿瘤。免疫组化结果显示-ER、PR在良性肿瘤的表达率均高于恶性肿瘤,P<0.05,差异显著;C-erb B-2在恶性肿瘤中的表达高于良性肿瘤,P<0.05,差异显著。提示,犬乳腺肿瘤恶性肿瘤发病率较高,ER、PR、C-erb B-2对犬乳腺肿瘤发病中的诊断、治疗及预后有重要意义。; 刘廷江嵇辛勤主性阮涌王修江林聪宏陈强雷云龙丹丹胡焱万彪; 关键词：乳腺肿瘤免疫组织化学

鸭源H6N6禽流感病毒贵州株NS基因的克隆及序列分析: 2016年; 为明确贵州地区鸭群中H6N6亚型禽流感病毒(AIV)中非结构蛋白基因(NS)系统进化情况,试验于2014年从贵州省健康三穗鸭体内分离鉴定出的一株H6N6亚型禽流感病毒A/duck/Guizhou/013/2014(DK/GZ/14),对其禽流感病毒NS基因进行扩增,并克隆到p MD-18T载体中测序,获得NS蛋白的完整编码序列;同时将NS核苷酸序列与Gen Bank中已有的参考序列作比对。结果表明:DK/GZ/14的NS基因与江西毒株2009年鸭源H6N6亚型禽流感病毒同源性最高,达99.5%;由遗传进化树可知,NS基因在遗传进化关系上与2009年广西分离株位于同一分支,而与2005年分离的汕头毒株不处于同一分支,DK/GZ/14与邻省的H6N6毒株亲缘关系较近。; 嵇辛勤陈佳琪段志强阮涌雷云陈强周标彭郁霖武露娟; 关键词：NS基因克隆进化分析

应用PCR-DGGE技术分析鸭场水样样本中细菌群落结构被引量：2: 2016年; 为了解贵州省部分鸭场环境中细菌群落结构多样性概况,试验采用变性梯度凝胶电泳（PCR-DGGE）技术对贵州省三穗县8个鸭场24份水样样本中细菌群落组成和优势菌群进行分析,并建立DGGE指纹图谱,细菌16S r DNA V3区特异性片段经DGGE凝胶分离、切胶、测序及Quantity One软件分析。结果表明：共有30条特异性条带,测序可见17条条带归属于变形菌门（Proteobacteria）细菌种属,3条条带属于厚壁菌门（Firmicutes）细菌种属,2条条带属于酸杆菌门（Acidobacteria）细菌种属,另外有8条条带未确定细菌种属。DGGE图谱可见条带5,11,12出现在1~6号鸭场水样样本中,表明该细菌种属为1~6号鸭场的优势菌属;而条带1,2,3均出现在1~8号鸭场水样样本中,表明这三种细菌种属均为8个鸭场的优势细菌种属。说明应用PCR-DGGE技术能够客观反映出鸭场环境中真实的细菌群落结构信息,鸭场环境中微生物多样性十分丰富。; 嵇辛勤李世静陈佳琪雷云陈强; 关键词：鸭场水样细菌群落结构优势菌群

贵阳地区犬细小病毒VP2基因的克隆及遗传进化分析被引量：9: 2017年; 为研究贵阳地区犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)的流行基因型及其遗传进化情况,本试验对从贵阳市分离的10株CPV的VP2基因进行PCR扩增和克隆并进行序列分析。结果显示,分离的病毒能使F81猫肾细胞产生明显的细胞病变(CPE),分离的10株病毒中,7株为CPV-2a亚型,3株为CPV-2c亚型,命名为GY-1~GY-10。10株CPV分离株与疫苗株VP2基因的同源性98.4%~99.4%,与其他国内外参考株的同源性为97.7%~99.9%。本试验首次报道贵阳市CPV的流行基因型为CPV-2a亚型并伴随CPV-2c亚型存在,对监测CPV遗传变异趋势及疫苗的研制具有重要意义。; 陈强嵇辛勤段志强阮涌雷云龙丹丹胡焱万彪; 关键词：犬细小病毒基因型 VP2基因遗传进化

鸭源新城疫病毒SS1株全基因序列测定及遗传进化分析被引量：2: 2016年; 对从贵州省某三穗鸭养殖场病死鸭体内分离的1株新城疫病毒(NDV)Sheldrakeduck/China/Guizhou/SS1/2014(简称SS1株)进行部分生物学特性测定及全基因测序与分析。结果表明:SS1株的MDT、ICPI和IVPI分别为52 h、1.89和2.80,F基因编码蛋白的裂解位点序列为^(112)R-R-Q-K-R-F^(117),HN基因编码571个氨基酸,均符合NDV强毒株特征;SS1株基因组全长为15 192 bp,各基因片段核苷酸序列与代表性基因Ⅶ型毒株ZJ1、NA-1、SF02和FP1/02相似性最高,达96.3%~98.7%,而与疫苗株V4、La Sota和Mukteswar同源性最低,为82.8%~85.4%;根据F基因序列绘制的系统进化树显示SS1株属于ClassⅡ基因Ⅶd亚型。F和HN蛋白氨基酸序列分析发现,SS1株F蛋白中和抗原位点第170位氨基酸、HN蛋白抗原区及其邻近氨基酸位点与国内当前流行的基因Ⅶd亚型NDV毒株一致,而与疫苗株有较大的差异。此外,交叉血凝抑制试验结果表明,SS1株与传统疫苗株La Sota的抗原同源性为84.5%,而与新型基因Ⅶ型疫苗株A-Ⅶ的抗原同源性为100%,表明分离株与疫苗株存在一定的抗原差异。; 罗宇宏陈强阮涌主性段志强胡顺林刘秀梵; 关键词：三穗鸭新城疫病毒遗传进化

鸭源大肠杆菌β-内酰胺类耐药基因的检测被引量：7: 2015年; 为了解鸭源大肠杆菌对β-内酰胺类抗生素的耐药性情况,以及β-内酰胺酶类耐药基因的携带情况,从贵州省三穗县部分规模鸭场的患鸭内脏器官中分离的大肠杆菌中随机选取15株,采用药敏纸片法对其进行8种β-内酰胺类药物敏感试验,采用PCR方法对SHV型、CTX-M型、TEM型β-内酰胺酶类耐药基因进行检测,并对耐药基因序列与Gen Bank中的相关序列进行比对。结果显示,15株鸭源大肠杆菌对8种β-内酰胺类抗生素均存在严重耐药,耐药率高达100%。TEM型和CTX-M型耐药基因均有检出,检出率分别为46.7%和100%,而SHV型耐药基因未检出,其中有7株细菌同时带有两种耐药基因。耐药基因序列比对结果显示,所测菌株序列与数据库中相应耐药基因序列相似性均高达90%以上。; 嵇辛勤李世静文明张人俊刘廷江陈佳琪雷云陈强; 关键词：大肠杆菌 Β-内酰胺类药物耐药基因

犬细小病毒VP2蛋白的原核表达与纯化被引量：8: 2018年; 为了研究犬细小病毒(canine parovirus,CPV)VP2蛋白的结构和功能,本试验对CPV VP2蛋白进行表达和纯化。采用大肠杆菌表达外源蛋白的方法,将CPVVP2基因插入原核表达载体pET-32a(+)中构建重组原核表达载体pET-VP2,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,在不同IPTG浓度、诱导温度和诱导时间条件下进行原核表达,确定最佳诱导条件。最佳条件下的诱导产物经超声破碎离心后,利用镍柱对重组蛋白进行纯化并用SDS-PAGE和Western blotting进行双重鉴定。结果显示,重组质粒pET-VP2经双酶切鉴定分别获得大小为5 900bp左右的载体条带和1 755bp左右的目的基因条带,成功构建了pET-VP2重组质粒;重组VP2蛋白的分子质量约为64ku,与预期大小一致,且在37℃、1.0mmol/L IPTG、诱导5h条件下表达量最高,条带最亮;蛋白超声破碎后经SDS-PAGE发现,只在沉淀中出现了目的条带,而上清中并未出现相应条带,说明重组蛋白均以包涵体的形式存在;纯化后获得的重组蛋白,经SDS-PAGE和Western blotting双重鉴定,均在64ku处出现条带,说明纯化后的蛋白为重组蛋白pET-VP2。本试验通过对CPV VP2蛋白的原核表达及纯化成功获得了大量纯度较高的CPV VP2蛋白,为今后制备CPV VP2蛋白多克隆抗体及进一步研究该蛋白在对治疗犬细小病毒病中的临床应用价值提供了基础理论依据。; 龙丹丹嵇辛勤段志强阮涌陈强雷云万彪胡焱; 关键词：VP2基因原核表达

贵州省鸭源新城疫病毒强毒株的遗传变异分析及致病性研究被引量：6: 2016年; 为了科学理解家鸭在新城疫病毒（NDV）流行和传播中的作用,对贵州不同地区分离的5株鸭源NDV强毒株进行遗传变异分析以及对鸭和SPF鸡的致病性研究。结果显示：5株NDV分离株均属于基因Ⅶd亚型,其F蛋白裂解位点基序均为112 RRQKRF117,符合强毒株序列特征,与病毒致病性指数测定结果相符;F和HN蛋白中功能性氨基酸位点均高度保守,但在HN蛋白线性表位区有3株发生E347K突变。交叉血凝抑制试验发现分离株与传统疫苗株LaSota的抗原同源性较低（为83.3%~87.0%）,而与新型基因Ⅶ型疫苗株A-Ⅶ的抗原同源性较高（为93.5%~100%）。将5株NDV分离株以0.5mL病毒尿囊液原液通过肌肉注射感染鸭后未见明显发病死亡和病理变化,并且除脾外在其他多个组织脏器未能检测到病毒复制;而以106.0 ELD50·0.1mL-1剂量通过滴鼻点眼感染SPF鸡后6d内100%发病死亡,病死鸡表现出新城疫典型的临床症状和病理变化,病毒在多个组织脏器中均能复制且对脾、胸腺和法氏囊等免疫器官损伤严重。另外,SPF鸡攻毒后喉头和泄殖腔棉拭病毒分离率明显高于试验鸭。本研究结果表明,贵州省鸭群中流行的基因Ⅶd亚型NDV强毒株HN蛋白发生E347K突变的变异株呈上升趋势,并与传统疫苗株产生抗原差异;5株鸭源NDV强毒株对鸭和鸡致病性差异显著,虽然对鸭无明显致病性,但鸭感染后可在较长时间内通过喉头或泄殖腔向体外排毒,因此必须采取有效措施防止NDV强毒由鸭群向鸡群的传播。; 段志强许厚强嵇辛勤陈强胡炎胡顺林刘秀梵; 关键词：新城疫病毒

鸭疫里默氏杆菌贵州分离株的耐药性及致病性分析被引量：12: 2016年; 从贵州三穗地区某鸭场临床疑似鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)感染的病死鸭体内分离得到6株病原菌,经细菌形态观察、生化试验和PCR鉴定确定为RA。对6株RA分离株的血清型鉴定、耐药性及致病性试验,结果表明:6株分离菌中有4株为血清2型,其余2株血清型未定;所有分离株对大环内酯类和氨基糖苷类药物耐药,而对青霉素类和头孢类药物高度敏感;将血清2型RA菌株以9×107cfu/m L剂量经肌肉注射后可导致雏鸭发病死亡,病死鸭表现典型的鸭疫里默氏杆菌病临床症状。结果表明,贵州三穗地区主要流行血清2型RA,且对多种抗生素呈多重耐药且致病性强,应加强对血清2型RA的监测和防控。; 雷云嵇辛勤段志强陈佳琪陈强万彪胡焱龙丹丹; 关键词：鸭疫里默氏杆菌血清2型耐药性

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陈强

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