王艳玲
- 作品数：7 被引量：8H指数：2
- 供职机构：昆明医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金云南省科技计划项目云南省科技厅科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 长链非编码GAS5缺陷的人A375稳转细胞株及构建方法
- 本发明属于医学分子生物学领域。本发明所述的长链非编码GAS5缺陷的人A375稳转细胞株是将设计合成的F链5’-GATCCTGGCACAAGAAGATTAAAACTCGAGTTTTAATCTTCTTGTGCCATTTTTG...
- 朱月春陈龙况应敏蔡天池王艳玲李玉倩
- 文献传递
- G6PD缺陷诱发人黑色素瘤A375细胞凋亡机制研究被引量：2
- 2014年
- 目的:探讨葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase,G6PD)缺陷对A375细胞凋亡的影响及其可能的机制。方法:以A375-WT和A375-G6PDΔ细胞为模型,用Real-time PCR检测G6PD mRNA表达,蛋白质印迹法检测G6PD、Bcl-2、Bcl-xL、STAT5和P-STAT5蛋白的表达,紫外分光光度法测定G6PD酶活性,Heochst 33342/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫组化观察STAT5蛋白核迁移。结果:A375-WT和A375-G6PDΔ细胞中G6PD mRNA分别为0.545±0.13和0.207±0.03,降低了62.02%,t=-5.854,P=0.028;G6PD蛋白分别为0.975±0.16和0.227±0.10,降低了76.72%,t=-21.593,P=0.002;G6PD酶的比活性分别为(0.088±0.023)和(0.024±0.008)U/mg;降低了72.23%,t=-7.390,P=0.018;A375-G6PDΔ细胞的凋亡率为(8.62±1.67)%,比A375-WT细胞的(2.37±0.78)%升高了3.64倍,t=-12.163,P=0.007;A375-G6PDΔ细胞抗凋亡蛋白Bcl-2的表达量为0.245±0.037,比A375-WT细胞的0.578±0.073降低了57.61%,t=-16.021,P=0.004;Bcl-xL的表达量为0.138±0.019,比A375-WT细胞的0.287±0.067降低了51.92%,t=-5.377,P=0.033;A375-G6PDΔ细胞的P-STAT5/STAT5比值为0.72±0.201,比A375-WT细胞的2.28±0.367降低了68.4%(P=0.004),细胞核内STAT5表达为0.051±0.012,比A375-WT细胞核的STAT5蛋白(0.093±0.018)降低了45%(P=0.007),STAT5核迁移减少。结论:转录因子STAT5磷酸化降低、活性下降是G6PD缺陷所诱发的人黑色素瘤A375细胞凋亡的重要因素之一,为黑色素瘤发生及治疗的研究提供了新的思路。
- 张正蔡天池王艳玲唐琼玲张春华陈龙朱月春
- 关键词：黑色素瘤G6PD缺陷STAT5A375细胞
- G6PD过表达型ACHN稳转细胞株及其构建方法
- 本发明涉及医学分子生物学相关技术，尤其是采用siRNA干扰技术构建细胞研究模型。本发明所述的G6PD过表达型ACHN稳转细胞株是一种G6PD过表达型ACHN稳转细胞株，是将pBABE-puro-G6PD转染人肾细胞腺癌细...
- 朱月春张巧王艳玲况应敏狄勇李玉倩杨惠鑫
- 文献传递
- NADPH氧化酶与HIF-α在肿瘤中的相互调控被引量：5
- 2016年
- 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶是胞内活性氧簇(ROS)的主要来源,ROS在多种肿瘤的发生发展中起重要作用,但其具体的致病机制并非十分明确。缺氧诱导因子(HIF)通过调控其下游的多个靶基因如促红细胞生成素(EPO)、血管内皮生长因子(VEGF)、葡萄糖转运子(GLUT)进而促进肿瘤血管生成、细胞能量代谢和肿瘤转移等。在肿瘤内NADPH氧化酶介导的ROS通过多种信号途径上调HIF-α的表达;与此同时,HIF-α也能通过ROS调控NADPH氧化酶的表达,从而进一步促进肿瘤的发生发展。
- 韩巧巧王艳玲朱月春
- 关键词：NADPH氧化酶ROSHIF-1Α肿瘤
- 敲减NADPH氧化酶4能降低STAT3活性抑制人黑色素瘤A375细胞的增殖被引量：1
- 2015年
- NADPH氧化酶参与细胞活性氧族(ROS)的生成过程,而ROS与肿瘤细胞增殖密切相关.为了阐明NADPH氧化酶影响黑色素瘤A375细胞增殖的分子机制,本文首先应用荧光定量PCR和Western印迹证实NOX4为人黑色素瘤A375细胞的NADPH氧化酶功能核心亚基;随后根据NOX4基因设计3条干扰序列和对照序列并连接到p Super-retro-puro载体,经鉴定后转化E.coli DH5α感受态细胞、筛选有效干扰序列并用于逆转录病毒包装,病毒液感染A375细胞并经嘌呤霉素筛选10d,构建了NOX4缺陷的A375稳转细胞珠(A375-NOX4Δ),其NOX4的mRNA和蛋白表达分别下降了66.02%和77.35%,伴随NADPH氧化酶活性和ROS水平分别下降了79.17%和64.16%;MTT、Ed U法检测显示,A375-NOX4Δ细胞的增殖能力比A375-WT细胞明显降低、倍增时间延长,增殖细胞数量下降了68.27%(P<0.01),呈现G1→S期阻滞;Western blot检测表明A375-NOX4Δ细胞的cyclin D1、CDK4分别下降了55.7%(P<0.01)和64.8%(P<0.01),而P53、P21分别增加了6.89倍(P<0.01)和3.27倍(P<0.01),STAT3、P-STAT3分别下降了51.80%(P<0.05)和82.58%(P<0.01);电泳迁移率变动分析(EMSA)表明,A375-NOX4Δ细胞的STAT3-DNA结合活性明显降低.上述结果提示,敲减A375细胞的NOX4表达可能通过减少ROS生成使得STAT3磷酸化水平及其结合DNA的活性下降,最终导致A375-NOX4Δ细胞增殖减少、呈现G1→S期阻滞,这为黑色素瘤发病机制研究提供了新思路及可能的药物作用靶点.
- 蔡天池王艳玲张春华张正陈龙李玉倩朱月春
- 关键词：NADPH氧化酶黑色素瘤
- 长链非编码GAS5缺陷的人A375稳转细胞株及构建方法
- 本发明属于医学分子生物学领域。本发明所述的长链非编码GAS5缺陷的人A375稳转细胞株是将设计合成的F链5’-GATCCTGGCACAAGAAGATTAAAACTCGAGTTTTAATCTTCTTGTGCCATTTTTG...
- 朱月春陈龙况应敏蔡天池王艳玲李玉倩
- 文献传递
- G6PD缺陷型Caki-1稳转细胞株及其构建方法
- 本发明涉及医学分子生物学相关技术，尤其是采用siRNA干扰技术构建细胞研究模型。本发明所述的G6PD缺陷型Caki-1稳转细胞株是含有靶向干扰G6PD基因表达的DNA双链片段和绿色荧光蛋白(green？fluoresce...
- 朱月春况应敏张巧王艳玲杨丽娟陈龙韩巧巧
- 文献传递
