周晓舟
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
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- 吸附无细胞百白破联合疫苗的细菌内毒素检查
- 2014年
- 目的分析吸附无细胞百白破联合疫苗（adsorbed diphtheria-tetanus-acellular pertussis combined vaccine,DTa P）细菌内毒素检查方法的可行性。方法确定供试品最大有效稀释倍数（maximum valid dilution,MVD）,并将两个厂家的鲎试剂（λ=0.25 EU/ml）进行灵敏度复核试验后,按照《中国药典》三部（2010版）附录ⅫE细菌内毒素检查法要求,采用稀释法进行供试品干扰试验,确定无干扰稀释倍数;采用凝胶限量试验对13批DTa P进行细菌内毒素检测,并采用动态显色法定量检测其中6批DTa P细菌内毒素含量。结果供试品MVD为800倍;两个厂家鲎试剂灵敏度均在0.125-0.5（0.5-2λ）范围内,符合《中国药典》三部（2010版）规定的标准。将DTa P稀释400倍可排除干扰。13批DTa P凝胶限量试验结果均〈12 EU/剂,其中6批DTa P动态显色法结果均〈2.5 EU/剂,相同6批疫苗两种检测方法的结果趋势一致。结论凝胶限量试验与动态显色法均可用于DTa P细菌内毒素检查,但凝胶限量试验更经济,操作更简便,适用范围更广。
- 刘晓凤唐朝晖邓杰周晓舟张飞伟秦敏
- 关键词：吸附无细胞百白破联合疫苗内毒素
- 基于响应面设计的百日咳粘附素浸提工艺优化
- 2013年
- 百日咳粘附素(PRN)是无细胞百日咳疫苗的重要保护性抗原之一,优化其浸提工艺对提高PRN产量、纯度乃至百日咳疫苗的质量都具有重要意义.通过中心复合表面设计(CCF)响应面模型和ELISA定量分析相结合的方法研究了影响PRN浸提工艺的关键因素.经两轮CCF响应面优化,确定了PRN浸提的最优工艺参数:温度60℃,菌浓度50 mg/mL,时间90 min,p H 8.5,NaCl 0.15 mol/L;通过Monte Carlo模拟和Plackett Burman模型设计预测和验证了工艺稳健性参数范围:温度58-62℃,菌浓度40-60 mg/mL,时间80-100 min,pH 8.45-8.55,NaCl 0.12-0.18 mol/L.响应面优化后,粗提液PRN产量提高了50%.研究表明,温度对PRN浸提影响最大,其次是pH;菌浓度、时间及NaCl含量的影响相对较小,但与温度、pH有交互作用.
- 张飞伟赵祥宇蔡峰周晓舟刘晓凤秦敏
- 关键词：百日咳响应面浸提
- 培养基中氯化钠对百日咳杆菌CS株生长及百日咳毒素表达的影响被引量：3
- 2015年
- 目的探讨培养基中氯化钠（Na Cl）对百日咳杆菌CS株生长及百日咳毒素（pertussis toxin,PT）表达的影响,确定最适PT表达的Na Cl加入方式。方法以MSS为起始培养基,补加不同浓度的Na Cl溶液,接种生产用百日咳杆菌Ⅰ相CMCC58003（CS株）后,分别于不同时间取样;分别于接种菌种后不同时间补加Na Cl至7.5 g/L,于培养结束时（39 h）取样;分别于接种菌种后0和25 h时补加Na Cl至7.5 g/L,培养不同时间取样。上述样品分别测定菌浓度及PT表达量。结果起始培养基中Na Cl浓度越高,细菌生长越缓慢,菌浓度增加时间也越长,起始培养基中Na Cl浓度为7.5 g/L时,培养上清中PT表达量最高,达6.61μg/ml,比对照培养基（MSS）提高了15.6%。培养过程中在25 h时补加Na Cl,培养结束时PT表达量最高,为8.64μg/ml,比对照培养基（MSS）提高了43.28%,比0 h时补加Na Cl提高了26.13%。在25 h时补加Na Cl后,细菌的菌浓度增长期比MSS培养基培养延长了2~3 h,比0 h时补加Na Cl缩短了1~2 h,菌浓度在培养的中后期明显高于0 h时补加Na Cl,PT表达周期与生长曲线基本平行,当细菌生长进入衰退期时,PT也随之开始逐步降解。结论在培养前期,可采用含2.5 g/L Na Cl的MSS培养基使菌体快速生长,当进入抗原PT表达期后,可通过补加Na Cl来提高PT转录活性,从而提高PT的产量。
- 李应伟刘晓凤周晓舟夏永
- 关键词：氯化钠百日咳杆菌百日咳毒素
