公共文化服务平台

共 6 条记录，以下是 1-6

全选清除导出

排序方式：

VEGF抗体及其制备方法和用途: 本发明公开了VEGF单域抗体及其融合抗体和多聚体抗体。本发明还公开了编码前述抗体的核苷酸序列，包含该核苷酸序列的表达载体、重组菌以及前述抗体的制备方法和用途。本发明VEGF抗体分子量小，可塑性高，具有广泛的应用前景。; 何勇智丛聪代云见张勇侠李坤李春阳王保成秦娇荣赵兆王明蓉何明跃; 文献传递

包涵体变复性技术研究进展被引量：13: 2012年; 现代生物技术的迅猛发展使大规模表达异源重组蛋白成为现实，这极大地促进了蛋白类产品的开发，尤其是重组蛋白药物的研发。日前非糖基化的重组蛋白表达多采用火肠杆菌的原核表达系统，该系统的突出特点是表达产物多以包涵体形式存在。与蛋白可溶性表达相比，包涵体具有产量高、蛋白稳定、容易纯化等优点，对毒性蛋白制备尤其适宜。因此，采用包涵体形式己成为规模制备重组蛋白产品的主要途径之一。; 罗莉李坤王保成王明蓉; 关键词：包涵体变复性原核表达系统现代生物技术重组蛋白表达可溶性表达

抗IgE单链抗体在大肠杆菌中可溶性高效表达条件的研究被引量：5: 2012年; 目的:以抗IgE单链抗体(anti-IgE scFv)为研究对象,以大肠杆菌周质高效表达可溶性单链抗体为目标,研究不同宿主细胞、培养基及培养条件对可溶性单链抗体表达产量的影响。方法:构建Rosetta(DE3)、BL21(DE3)和SoluBL21(DE3)三种大肠杆菌工程菌,研究不同碳源、氮源、培养基配方和培养条件对可溶性抗IgE单链抗体产量的影响。结果:携带抗IgE单链抗体基因的pET-IgE26质粒在新型宿主SoluBL21(DE3)中的表达产量明显优于传统的Rosetta(DE3)和BL21(DE3)宿主菌。经碳氮源筛选、培养基和培养条件的优化,确定SoluBL21(DE3)工程菌高效表达可溶性重组抗体的最佳培养基为:以M9培养基为基础,添加0.5%葡萄糖、0.6%酪蛋白胨和0.02%微量元素。最佳的培养条件为:以LB为种子培养基,37℃过夜培养至OD600为3.0左右,以5%接种量接种于最佳发酵培养基中;接种后细胞生长条件:37℃,260r/min,培养3.5h;细胞诱导培养条件:当OD600为1.5～1.8时,降温至25℃,添加0.1mmol/L IPTG,220r/min继续培养16h。经抗原ELISA检测,抗IgE单链抗体的可溶性表达量比原始对照组提高了5倍。结论:通过对宿主细胞类型的筛选、培养基及培养条件的优化,可以显著提高重组单链抗体在大肠杆菌周质空间内的表达产量。该研究结果不仅为规模化制备抗IgE单链抗体提供了技术支持,同时为大肠杆菌生产重组小分子抗体提供了有价值的参考。; 刘启刚代云见张勇侠王保成王明蓉; 关键词：大肠杆菌表达条件优化

重组人肿瘤坏死因子受体Ⅰ蛋白复性过程中巯基浓度的监测被引量：1: 2013年; 目的建立一种在重组人肿瘤坏死因子受体Ⅰ（tumor necrosis factor receptorⅠ，TNFRⅠ）蛋白复性过程中简单、可靠且易于操作的巯基浓度的监测方法，用以指导、监控蛋白复性过程及终点判断。方法通过测定3种不同巯基浓度检测方法的线性范围及相关系数，建立适合重组人TNFRI蛋白复性溶液中巯基浓度的测定方法；动态监测蛋白复性过程中溶液巯基浓度变化及巯基浓度与复性蛋白生物活性的相关性；于蛋白复性48、96和144h取样，检测4℃保存3d和6d的稳定性。结果采用的3种巯基浓度监测方法中，方法3标准偏差值（standard error value，STDEV）较小，线性范围在0～12．5mmol／L，线性关系较好，R^2=0．9999，更适于蛋白复性溶液中巯基浓度的监测；随着蛋白复性时间的延长，巯基浓度呈明显的下降趋势（R^2=0．9891），当浓度在2～1mmol／L下降期间，是复性蛋白细胞活性上升最快期，而当巯基浓度降至1mmol／L及以下时，细胞活性达到最大值；蛋白复性144h后，细胞活性较为稳定。结论建立了一种简单、可靠且易于操作的巯基浓度测定方法，该方法对提高包涵体的复性效率具有重要的参考价值。; 王保成李坤李春阳蔡峰秦娇荣; 关键词：蛋白质复性巯基细胞活性

应用核糖体展示技术高效筛选人源抗IgE单链抗体被引量：4: 2012年; 本研究从哮喘患者外周血分离淋巴细胞、提取总mRNA,采用RT-PCR技术分别构建重链可变区VH(variable region of heavy chain)和轻链可变区VL(variable region of light chain)cDNA库,然后通过连接肽(Gly4Ser)3和特定引物将VH和VL cDNA基因组装成人源单链抗体(scFv)核糖体展示模板基因库。应用兔网织红细胞核糖体展示技术,单引物原位反转录技术,经3轮展示富集并回收针对人源IgE蛋白(免疫球蛋白E)的目的单链抗体基因;回收的抗体基因经双酶切后与pET22b(+)载体连接,转化至E.coli Rosseta(DE3)宿主细胞,应用菌落PCR结合Dot blotting技术快速鉴定阳性克隆,抗原ELISA法进一步鉴定阳性克隆。VH和VL基因库得到正确的构建,长度分别为400和710 bp,库容为1013。核糖体展示模板构建正确,长度为1 100 bp。该基因库经过3轮针对IgE蛋白的核糖体展示,目的基因得到了有效富集和回收。经过高效克隆、表达和鉴定,确定1株针对人IgE蛋白显示最强亲和力的阳性克隆菌pET-IgE-6。经测序和序列分析证实该单链抗体为人源抗体,序列未见国内外报道。结果表明,采用患者外周血构建人源抗体基因库,结合核糖体展示技术,可以成功获得高亲和力的人源单链抗体分子。该技术路线为快速获得具有药用价值的人源抗体提供了参考。; 张勇侠王保成余馨代云见何勇智丛聪夏永王明蓉; 关键词：免疫球蛋白E 人源抗体核糖体展示技术过敏性疾病

采用DoE设计方法优化可溶性肿瘤坏死因子I型受体蛋白的聚乙二醇修饰工艺被引量：1: 2013年; 目的采用DoE设计方法对人可溶性肿瘤坏死因子I型受体（soluble tumour necrosis factorαreceptors I,sTNFα-R玉）的聚乙二醇（PEG）修饰工艺参数进行优化,以期获得稳定、可控的工艺参数。方法采用UNICORN（DoE）软件中Central Composite Face Centered（CCF）模型对sTNFα-R玉的3个PEG修饰工艺参数,即溶液pH值（pH）、反应时间（Time）和PEG与蛋白质量比（PEGrate）进行优化,设置4个响应值（多PEG修饰蛋白峰面积、单PEG修饰蛋白峰面积、未修饰蛋白峰面积及单PEG修饰蛋白峰面积与多PEG修饰蛋白峰面积比值）揭示其化学反应过程,确定参数操作空间;应用蒙特-卡罗模拟法（Monte-Carlo Simulation）对优化参数进行风险评估。结果3因子17组试验结果的重复性较好,中心点重复组响应值介于最低值和最高值之间,且随机分布,符合DoE试验设计的要求;4个响应值所对应的回归系数（R2）均〉0.75,预测准确性（Q2）〉0.5,模型有效性（Model Validity）〉0.25,重复性（Reproducibility）〉0.5,模型预测与实验值之间偏差较小,具有可靠的预测准确性;17组试验结果标准残差在允许范围（-4～4）之间,线性较好,预测值与观测值之间相关性较好,建立的模型拟合度高,可较为准确地预测试验结果。溶液pH值对多PEG修饰产量影响较小,随着Time和PEGrate的升高,多PEG修饰产物增加,单PEG修饰产物经二次或多次修饰形成多PEG修饰产物,减少Time和PEG用量可减少多PEG修饰产物;单PEG修饰产物随着pH上升,产量有所增加,与Time呈二次项关系,在Time.PEGrate交互作用中,减少PEG用量可增加单PEG修饰产物量;减少Time和降低PEG用量可提高单PEG修饰产物与多PEG修饰产物的比值,有利于下游纯化。确定了工艺参数的操作空间,当pH为5.5时,反应时间控制在30 h以上,PEG与蛋白质量比控制在3.7以下,符合预设值;pH在6.5时,反应时间控制在22～35 h之间,PEG与蛋白质量; 王保成蔡峰李坤李春阳张珂秦娇荣; 关键词：肿瘤坏死因子Α 受体 PEG修饰 DOE

全选清除导出

共1页<1>

王保成

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户反馈

王保成

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户登录

用户反馈