王龙祥
- 作品数：11 被引量：46H指数：5
- 供职机构：华南师范大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国博士后科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 基于光漂白的荧光共振能量效率的定量测量方法
- 本发明涉及荧光共振能量转移效率的测量方法，具体涉及一种基于光漂白的荧光共振能量效率的定量测量方法。本方法是通过激光共聚焦显微镜采集转染了供体-受体对的活细胞中受体光漂白前后供体通道和受体通道光漂白前后的平均荧光强度，来计...
- 陈同生王龙祥
- 文献传递
- 消癌平诱导人肺腺癌(ASTC-a-1)细胞内caspase-3活化的荧光光谱分析被引量：14
- 2008年
- 采用CCK-8技术检测发现传统中药消癌平(XAP)对人肺腺癌(ASTC-a-1)细胞的增殖活性具有显著的抑制作用。利用共聚焦扫描荧光显微成像、荧光共振能量转移(FRET)及其受体光漂白技术证实了基于FRET技术构建的SCAT3质粒在ASTC-a-1细胞中的稳定表达。将消癌平加入细胞培养液中培育细胞,并在不同的时间检测活细胞内SCAT3的荧光发射光谱,从而监测细胞中caspase-3的活化状态。实验结果表明:(1)消癌平可以有效抑制人肺腺癌(ASTC-a-1)细胞的增殖活性并诱导细胞的死亡,消癌平对细胞的抑制作用具有剂量依赖性。(2)消癌平处理细胞72 h后,细胞内大量的SCAT3被切割,表明细胞内caspase-3的活化水平明显升高。(3)将含消癌平的细胞培养液与细胞共同培养24 h,然后采用没有消癌平的细胞培养液培养细胞48和72 h后,细胞内SCAT3的光谱没有明显改变,表明消癌平作用细胞24 h内没有显著激活细胞内的caspase-3。
- 陈同生王小平王治平王龙祥王会营邢达
- 关键词：消癌平荧光光谱
- 紫杉醇诱导不依赖于Caspase-3细胞类似Paraptosis的荧光光谱分析被引量：6
- 2008年
- 研究了紫杉醇(Taxol)诱导人肺腺癌细胞(ASTC-a-1)类似Paraptosis的特征和机理。采用CCK-8技术检测了抑制细胞活性的特性,结果表明大于70μmol.L-1浓度的紫杉醇可以显著抑制细胞活性;采用激光共聚焦扫描荧光成像从形态上检测了紫杉醇诱导细胞死亡的形态特征,表明紫杉醇诱导了类似副凋亡(Paraptosis)特征的细胞肿胀和细胞质空泡化,而且没有细胞膜皱褶、细胞核浓缩等细胞凋亡的特征;通过基因质粒转染在细胞转染稳定表达基于荧光共振能量转移(FRET)质粒SCAT3,并利用FRET受体光漂白技术和荧光光谱检测分析技术研究了紫杉醇诱导细胞类似Paraptosis过程中Caspase-3的活化特性,结果表明在紫杉醇诱导细胞质肿胀和细胞死亡的过程中Caspase-3没有被活化。以上研究结果表明紫杉醇可以通过类似Paraptosis的方式明显诱导细胞程序性死亡,该过程不依赖于Caspase-3的活性。
- 陈同生王小平孙磊王会营王龙祥
- 关键词：荧光光谱
- 消癌平诱导caspase-3活化动态过程的实时监测被引量：1
- 2007年
- 消癌平是从萝摩科(Asclepiadaceae)植物通关藤(Marsdenia tenacissima)根部提取的药物,已经广泛应用于癌症和多种炎症的临床治疗,并且具有较好的疗效。将消癌平注射液与细胞培养液按照1∶1的比例混合后共同培养人肺腺癌(ASTC-a-1)细胞,通过CCK-8方法检测发现消癌平能够显著抑制细胞的增长。然后利用荧光共聚焦扫描显微镜和荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)技术在稳定表达了SCAT3质粒的单个ASTC-a-1细胞中实时动态监测消癌平处理后SCAT3的空间分布以及SCAT3被caspase-3切割的动态过程。实验结果表明:消癌平处理后20 min中SCAT3开始向细胞核以及细胞膜部位转移,约在100min左右SCAT3被迅速切割。
- 陈同生王龙祥孙磊王会营邢达
- 关键词：消癌平CCK-8
- Caspase-3参与调控蟾酥诱导人肺腺癌(ASTC-a-1)细胞的凋亡被引量：11
- 2008年
- 采用基因质粒转染技术、荧光发射谱检测分析以及荧光共振能量转移(FRET)受体光漂白技术,首次在活细胞中实时检测中药蟾酥(Chan-Su,CS或bufonis venenum)诱导人肺腺癌(ASTC-a-1)细胞凋亡过程中caspase-3的活化特性.采用CCK-8(Cell Couneing Kit-8)技术检测发现,蟾酥对细胞的活性具有显著的抑制作用;蟾酥处理稳定表达FRET质粒SCAT3的人肺腺癌细胞后,在不同的时间检测活细胞中SCAT3的荧光光谱;利用共聚焦扫描荧光显微成像技术检测蟾酥处理后细胞的形态,从而进一步证实蟾酥诱导细胞凋亡.实验结果表明:a.蟾酥可以有效抑制人肺腺癌(ASTC-a-1)细胞的增殖活性并诱导细胞的死亡.蟾酥对细胞的抑制作用具有剂量依赖性;b.蟾酥处理细胞6h后能检测到明显的细胞凋亡小体,连续作用24h后细胞全部皱褶,并有部分细胞破碎;c.蟾酥作用细胞2h就能明显切割细胞内的SCAT3,细胞内SCAT3的切割程度随着蟾酥作用时间的延长而增加,24h内细胞内的SCAT3完全被切割.受体光漂白实验也证实了该结论,表明caspase-3参与调控了蟾酥诱导的细胞凋亡过程.
- 陈同生王小平孙磊王会营王龙祥
- 关键词：蟾酥
- 基于光漂白的荧光共振能量效率的定量测量方法
- 本发明涉及荧光共振能量转移效率的测量方法，具体涉及一种基于光漂白的荧光共振能量效率的定量测量方法。本方法是通过激光共聚焦显微镜采集转染了供体－受体对的活细胞中受体光漂白前后供体通道和受体通道光漂白前后的平均荧光强度，来计...
- 陈同生王龙祥
- 文献传递
- 紫杉醇诱导ASTC-a-1细胞的程序性死亡机制研究被引量：5
- 2008年
- 利用质粒转染技术和显微荧光成像技术在活细胞中研究了紫杉醇诱导人肺腺癌细胞(ASTC-a-1)的程序性细胞死亡(PCD)过程,利用基因荧光探针分别标记细胞以及细胞的内质网。实验结果表明紫杉醇诱导的细胞质肿胀主要是由于内质网的肿胀引起的;利用rhodamine123标记细胞内的线粒体,研究了紫杉醇对线粒体大小的影响,结果表明紫杉醇诱导了线粒体的肿胀;caspases广谱抑制剂z-VAD-fmk对紫杉醇诱导的细胞肿胀没有影响,表明caspases并没有参与紫杉醇诱导细胞质肿胀的调控过程;Hoechst33258和PI染色实验结果表明紫杉醇没有引起细胞核的浓缩和DNA的断裂以及细胞膜的破裂。以上研究结果进一步确认紫杉醇诱导ASTC-a-1的PCD过程类似paraptosis方式,既不是传统的凋亡方式,也不是坏死方式。
- 陈同生王小平孙磊王会营王龙祥
- 荧光共振能量转移技术对肺腺癌活细胞中消癌平诱导半胱氨酸天冬氨酸酶3活化过程的实时监测(英文)被引量：13
- 2007年
- 背景:将生物学技术和光学技术结合起来研究细胞增殖和凋亡的分子机制已成为生物工程学领域的研究热点。目的:应用共聚焦荧光显微成像技术和荧光共振能量转移技术在活细胞中观察消癌平诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制。设计:观察对比实验。单位:华南师范大学激光生命科学教育部重点实验室暨激光生命科学研究所。材料:实验于2006-10/2007-03在华南师范大学激光生命科学重点实验室暨激光生命科学研究所进行。人类肺腺癌细胞为本实验室培养。消癌平注射液为通化神源药业有限公司生产(国药准字Z20025869),G418购自华美生物公司。质粒SCAT3由Miura教授提供,酶标仪(infinite M200,Tecan,Austria),线粒体定位荧光探针购于Molecular Probe公司。方法:①利用细胞计数试剂盒技术检测不同剂量的消癌平对人类肺腺癌细胞活性的抑制作用。②利用共聚焦荧光显微成像技术和荧光共振能量转移技术在大半个活细胞中实时检测消癌平诱导半胱氨酸天冬氨酸酶3活化的动态过程。③利用荧光检测技术在活细胞中检测消癌平作用后不同时间点的SCAT3的荧光发射谱。主要观察指标:①消癌平作用细胞后检测细胞的活性。②消癌平作用后实时检测SCAT3荧光共振能量转移效率的动态变化。③消癌平作用后线粒体形态的动态变化。结果:①消癌平剂量依赖性抑制肿瘤细胞的活性。②消癌平诱导细胞内半胱氨酸天冬氨酸酶3的活化。③消癌平诱导细胞中线粒体变圆和破裂。结论:消癌平可以诱导人类肺腺癌细胞的凋亡,半胱氨酸天冬氨酸酶3参与了其调控过程。
- 陈同生王龙祥王会营邢达
- 关键词：荧光共振能量转移消癌平凋亡生物医学工程
- 利用荧光光谱拟合定量测量荧光共振能量转移效率的方法
- 本发明涉及荧光共振能量转移效率的测量方法，具体提供了一种利用荧光光谱拟合定量测量荧光共振能量转移效率的方法。该方法的步骤包括首先测量得到细胞内供体－受体对的荧光发射谱；进而利用归一化的供体、受体的荧光发射谱，得到供体－受...
- 陈同生王龙祥
- 文献传递
- 基于FRET效率分析细胞内caspase-3活化特性研究被引量：1
- 2008年
- 利用SCAT3在选择性激发CFP时的发射谱信息,通过光谱拟合定量获得FRET效率,监测双氢青蒿素诱导的人肺腺癌(ASTC-a-1)细胞内caspase-3的活化特性.实验结果表明:双氢青蒿素可有效抑制ASTC-a-1细胞的增殖并诱导细胞凋亡,且对细胞抑制呈剂量依赖性;双氢青蒿素诱导细胞中caspase-3的活化也呈剂量依赖性;通过光谱拟合得到的FRET效率表明,细胞中caspase-3活化程度越大,FRET效率越低,且FRET效率呈剂量依赖性递减.
- 陈同生卢盈颖王龙祥屈军乐
- 关键词：CASPASE-3荧光共振能量转移荧光光谱双氢青蒿素
