李小波
- 作品数:4 被引量:10H指数:2
- 供职机构:成都生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 发文基金:国家科技重大专项国际科技合作与交流专项项目更多>>
- 相关领域:医药卫生更多>>
- 竞争ELISA法测定19A型肺炎链球菌发酵物中的多糖含量
- 2014年
- 目的建立检测19A型肺炎链球菌荚膜多糖的竞争ELISA方法,检测细菌发酵过程中多糖的表达量。方法以19A型肺炎链球菌多糖为包被物,待测多糖为竞争物,建立间接竞争ELISA方法并验证该方法的准确性和精密度。用建立的方法检测不同培养条件下发酵物中的多糖表达量。结果最佳多糖包被质量浓度为10mg/L,多糖抗血清稀释度为1:4×10^4。当检测范围为39.06~5000.00μg/L时,决定系数为0.995。批内和批间相对标准差分别为5.08%~9.58%和5.28%~12.93%。培养物样品加标回收率为95.84%~110.07%。两种不同培养条件下培养物中的多糖表达量分别为312.17mg/L和1056.42mg/L。结论新建的方法能用予19A型肺炎链球菌发酵物中多糖表达量的检测,对于优化培养条件及掌握培养物收获时间具有指导意义。
- 李小波廖红梅黄放谢媛媛于志强宋绍中
- 关键词:多糖类链球菌肺炎酶联免疫吸附测定
- 菌种筛选对1型肺炎链球菌产糖量的影响
- 2014年
- 目的用无动物源性培养基筛选高产糖1型肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae semtype1,PN1)。方法配制无动物源性培养基,并用此培养基进行高产糖PN1单菌落筛选。比较筛选前后PN1在发酵培养中的产糖量。结果无动物源性培养基筛选前后PN1在发酵培养中的产糖量分别为420和960mg/L,筛选后PN1的产糖量明显高于筛选前PN1。结论以无动物源性培养基筛选PNI可使PN1的产糖量明显提高。
- 黄放邓杰赵兆王智杰周宇刘威张珂张伟李小波曾华英江山崔长法
- 关键词:链球菌肺炎多糖类菌种筛选
- 酸沉淀法纯化14血清型肺炎链球菌荚膜多糖工艺的建立被引量:4
- 2016年
- 目的建立一种14血清型肺炎链球菌荚膜多糖的酸沉淀法纯化工艺,以替代传统的苯酚抽提法。方法对建立的14型肺炎链球菌荚膜多糖酸沉淀法中的氯化钙终浓度(0、50、100、200、400 mmol/L)、pH值(3.5、4.0、4.5、5.0及5.7)及反应时间(0、1、2、4、6、8 h及过夜)进行优化。采用优化后的方法纯化3批14型肺炎粗制多糖,制备精制多糖,并进行理化指标、抗原性检测及核磁分析,同时与苯酚抽提纯化工艺进行比较。结果酸沉淀法的最佳工艺为:氯化钙终浓度50-100 mmol/L,pH值3.5-4.0,作用时间为过夜。采用该方法制备的3批14型肺炎精制多糖的蛋白和核酸杂质含量均较低,总磷、总氮、氨基己糖含量、多糖分子质量均符合企业注册标准,抗原活性和核磁共振图谱的分析结果表明其多糖结构无异常。结论酸沉淀法具有操作简便、效果显著及不需使用有毒有害试剂等优点,可用于纯化14型肺炎链球菌荚膜多糖。
- 李小波张锐谢媛媛程尊平陈娟江山
- 关键词:纯化荚膜多糖
- 肺炎球菌无动物源性成分培养工艺及纯化新工艺探索被引量:7
- 2012年
- 目的:比较无动物源性成分培养基和动物源性培养基培养肺炎球菌的差异;摸索不使用有机溶剂的肺炎球菌多糖纯化新工艺。方法:用无动物源性的原料替代肺炎发酵培养基中动物源性的成分,考察菌体密度和多糖收量的变化;采用柱层析纯化工艺收获肺炎球菌多糖,测定各阶段核酸、蛋白、多糖含量。结果:与疫苗生产所采用动物源性发酵培养基相比,无动物源性发酵培养基收获的1,7F,19A型菌体密度分别提高了1倍左右;发酵液中多糖含量分别提高了48%,50%和200%;多糖收量提高了30%~90%。纯化新工艺收获的17F,18C,19F精糖,核酸和蛋白的含量均远远低于企业的注册标准,HPLC检测多糖纯度分别为99.24%,98.92%和99.02%。结论:无动物源性成分发酵培养基适合于肺炎球菌生长,不仅增加了多糖产量,也提高疫苗的安全性;纯化新工艺能够收获合格的肺炎精制多糖。
- 张锐李小波徐萌萌黎云东吕雪艳张建华蒋宁陈文敏石晓丽宋绍忠
- 关键词:肺炎球菌多糖纯化工艺柱层析