张谊
- 作品数：8 被引量：11H指数：3
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- 低氧诱导因子-1α对SH-SY5Y细胞兴奋性毒性损伤的调节作用被引量：3
- 2015年
- 探讨低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)在喹啉酸诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞损伤中的作用。将体外培养的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞分为对照组、喹啉酸低、中、高剂量组及HIF-1α抑制剂二甲氧基雌二醇(2-methoxyestradiol,2ME2)预处理喹啉酸高剂量组,采用噻唑蓝还原法和乳酸脱氢酶漏出率检测法测定细胞损伤程度,Hoechst 33342单荧光染色法观察细胞凋亡,免疫荧光染色法检测HIF-1α在细胞内的表达,免疫印迹法检测细胞HIF-1α、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)、Bcl-2和Bax的表达。结果显示,喹啉酸可剂量、时间依赖性地诱导SH-SY5Y细胞损伤,导致细胞凋亡。同时,喹啉酸可使SH-SY5Y细胞HIF-1α表达上调并发生核转位、p-Akt表达增加及Bax/Bcl-2表达比例增加,而2ME2可抑制喹啉酸诱导的SH-SY5Y细胞损伤及降低HIF-1α、p-Akt和Bax/Bcl-2的表达。由此说明,HIF-1α/Akt通路介导了喹啉酸诱导SHSY5Y的细胞凋亡。HIF-1α抑制剂(2ME2)能够减轻喹啉酸致SH-SY5Y细胞损伤程度,减少细胞凋亡。
- 李永金杨开勇阚美佳黄贺张谊陈月芳端礼荣黄晓佳
- 关键词：喹啉酸SH-SY5Y细胞细胞损伤HIF-1Α信号通路
- 低氧诱导因子-1在脑损伤中的双向调节作用被引量：3
- 2015年
- 低氧诱导因子-1(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1)作为目前发现的具有高度特异性感受细胞氧分压的调节因子,在脑损伤发生、发展过程中发挥着重要的双向调节作用。HIF-1在轻度和中度脑损伤过程中可以增加神经细胞耐受,促进存活;在重度损伤时,参与细胞凋亡途径,促进神经细胞死亡,在脑损伤中发挥重要作用。对HIF-1及其信号通路的深入研究可为脑损伤的治疗提供药物作用靶点,有重要的理论研究和实用价值。现就HIF-1的结构、功能及在脑损伤中的调节作用进行综述,为临床治疗脑损伤提供参考。
- 李永金杨开勇张谊陈月芳黄晓佳
- 关键词：HIF-1脑损伤
- 喹啉酸对PC12细胞自噬发生及相关信号通路蛋白表达的影响被引量：1
- 2016年
- 目的探讨喹啉酸(QA)是否引起大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞自噬的发生及其与糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)/β-联蛋白相关信号通路的关系。方法用不同浓度QA(2.5,5和10 mmol·L^(-1))处理PC12细胞24 h,MTT法测定细胞存活,免疫荧光法观察微管相关蛋白1轻链3(LC3)荧光斑点标记的自噬体形成,Western蛋白印迹法检测细胞GSK-3β、β-联蛋白、LC3和Beclin 1的表达。结果 QA作用24 h,可浓度依赖性地降低PC12细胞存活率,IC_(50)为8.7 mmol·L^(-1)。QA作用24 h,与正常对照组比较,PC12细胞内LC3荧光斑点标记的自噬体增多,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值和Beclin 1表达增高(P<0.01);同时PC12细胞内GSK-3β的表达增加(P<0.05,P<0.01),β-联蛋白的表达降低(P<0.05,P<0.01)。结论 QA可诱导PC12细胞自噬的发生,其机制可能与GSK-3β/β-联蛋白相关的信号通路激活有关。
- 李永金张谊杨开勇安珂张庄阚美佳陈月芳潘海元黄晓佳
- 关键词：喹啉酸PC12细胞自噬糖原合酶激酶3
- 低氧诱导因子-1α在喹啉酸诱导的PC12细胞损伤中的作用被引量：3
- 2015年
- 目的探讨低氧诱导因子-1(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)在喹啉酸诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞损伤中的作用。方法用不同浓度的喹啉酸(2.5,5和10mmol·L-1)处理PC12细胞24 h诱导细胞损伤,采用噻唑蓝还原法和乳酸脱氢酶漏出率检测法测定细胞损伤程度,采用丙二醛和超氧化物歧化酶试剂盒检测细胞内氧自由基水平,Hoechst 33258单荧光染色法观察细胞凋亡,免疫荧光染色法检测HIF-1α在细胞内的表达,免疫印迹法检测细胞HIF-1α、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(phosphorylated-Akt,pAkt)、淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/lewkmia-2,Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)的表达。结果喹啉酸可剂量依赖性地诱导PC12细胞损伤,导致细胞内氧自由基增多和细胞凋亡。同时,喹啉酸可使PC12细胞HIF-1α表达上调并聚集于核内;p-Akt表达增加,Bax/Bcl-2表达比例增加。结论 HIF-1α和Akt介导了喹啉酸诱导PC12的细胞凋亡;此外,氧化应激过程也可能参与了细胞损伤。
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- 关键词：喹啉酸PC12细胞细胞损伤HIF-1Α
- HIF-1α、ROCK-2、FoxM1在醋酸铅诱导PC12细胞损伤中的表达变化被引量：4
- 2015年
- 目的探讨低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、Rho关联卷曲螺旋蛋白激酶-2(Rho associated coiled coil forming protein kinase-2,ROCK-2)、叉头蛋白M1(forkhead box protein M1,Fox M1)在醋酸铅[Pb(Ac)_2]诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞损伤中的表达和意义。方法将PC12细胞暴露于不同浓度的Pb(Ac)_2(100、200、400μmol·L^(-1))24 h以诱导细胞发生损伤。采用噻唑蓝比色法检测细胞的存活率,倒置显微镜观察细胞形态的变化,乳酸脱氢酶漏出率检测法测定细胞损伤程度,采用试剂盒检测丙二醛(malondialdehvde,MDA)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)水平,Hoechst 33342单荧光染色法观察细胞凋亡,免疫印迹法检测细胞HIF-1α、ROCK-2、Fox M1、淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/leukemia,Bcl-2)和Bcl-2相关蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)的表达。结果 MTT实验显示Pb(Ac)_2对PC12细胞具有明显抑制作用并呈剂量依赖性,与对照组相比,Pb(Ac)_2可增加细胞内LDH漏出率,升高MDA含量,降低SOD含量,诱导细胞发生凋亡。此外,Pb(Ac)_2上调细胞HIF-1α、ROCK-2的表达,下调Fox M1的表达,提高Bax/Bcl-2的表达比例。结论 Pb(Ac)_2诱导PC12细胞发生凋亡可能与HIF-1α、ROCK-2、FoxM 1的表达以及自由基损伤有关。
- 李永金张谊杨开勇席可李少邱朱春雪陈月芳黄晓佳
- 关键词：醋酸铅PC12细胞细胞损伤HIF-1ΑFOXM1
- 醋酸铅对PC12细胞的增殖与凋亡研究被引量：1
- 2021年
- 目的探讨醋酸铅(Pb(Ac)2)对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞的增殖与凋亡中低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α, HIF-1α)与Rho关联卷曲螺旋蛋白激酶(rho associated coiled coil forming protein kinase, ROCK)信号通路的关系以及潜在的作用机制。方法 (1)将体外培养的PC12细胞分为对照组和实验组。对照组加入含血清的培养基,低、中、高剂量实验组加入100,200,400μmol·L-1的Pb(Ac)2染毒,用噻唑蓝还原法测定药物对细胞增殖率的影响,以乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)漏出率试剂盒检测细胞损伤程度,用DCFH-DA探针染色法检测细胞内活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平,用Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡率,以蛋白质印迹法检测细胞内HIF-1α、 ROCK-1、ROCK-2、淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/lewkmia-2,Bcl-2)以及Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 Associated X Protein, Bax)的蛋白表达。(2)采用siRNA技术沉默PC12细胞HIF-1α基因技术,将细胞分为对照组、实验组、阴性对照组、干扰组,观察细胞中HIF-1α、ROCK-1,ROCK-2蛋白表达水平的变化。结果随着Pb(Ac)2剂量的增大,药物对PC12细胞的损伤作用加深。对照组和高剂量实验组的存活率分别为(100.00±3.22)%,(47.21±4.98)%,差异有统计学意义(P<0.01)。与对照组相比,中、高2个剂量实验组细胞凋亡率差异有统计学意义(P<0.01),表明Pb(Ac)2诱导细胞凋亡。Pb(Ac)2可上调细胞内HIF-1α、ROCK-1、ROCK-2、Bax/Bcl-2的蛋白表达比例(均P<0.01)。当采用小RNA干扰HIF-1α后,发现醋酸铅对PC12细胞损伤的程度降低,HIF-1α、ROCK-1、ROCK-2的蛋白表达水平下降(均P<0.01)。结论 Pb(Ac)2诱导PC12细胞发生凋亡可能与HIF-1α和ROCK信号通路的表达以及自由基损伤有关。
- 张谊张谊王惠霞陈月芳陈月芳
- 关键词：醋酸铅PC12细胞细胞凋亡缺氧诱导因子-1Α
- 缺氧诱导因子-1在黄酮类化合物抗肿瘤活性中的作用
- 2015年
- 黄酮类化合物是一类天然多酚类化合物,主要来源于水果和蔬菜以及天然产物的提取物。黄酮类化合物种类繁多,而且结构类型复杂,具有多种药理活性,如抗炎、抗肿瘤作用。在黄酮类化合物抗肿瘤作用的靶点中,缺氧诱导因子-1(hypoxia inducible factor-1,HIF-1)受到广泛关注。肿瘤生长速度远超过其血管供氧能力,肿瘤细胞往往面临缺氧和酸度过高的环境[1]。在缺氧环境下。
- 张谊郑璐符海波杨开勇李永金黄晓佳
- 关键词：缺氧诱导因子-1黄酮类化合物抗肿瘤
- 醋酸铅暴露对PC12细胞凋亡与自噬的影响及可能机制
- 2023年
- 目的探讨醋酸铅〔Pb(Ac)_(2)〕暴露对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞凋亡与自噬的影响及相关分子机制。方法体外培养的PC12细胞用Pb(Ac)_(2)0(细胞对照),100,200和400μmol·L^(-1)处理24 h后,采用MTT法检测细胞存活率,乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测细胞培养液中LDH含量,吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)染色观察细胞凋亡,流式细胞术检测细胞凋亡率,单丹磺酰尸胺(MDC)试剂盒检测细胞自噬,免疫荧光法观察Bcl-2相互作用蛋白1(Beclin1)在细胞内的表达,Western印迹法检测细胞内自噬相关蛋白沉默信息调节因子1(Sirt1)、叉头框蛋白转录因子3a(FoxO3a)、叉头蛋白M1(FoxM1),Beclin1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)以及P62蛋白表达。结果与细胞对照组相比,Pb(Ac)_(2)100,200和400μmol·L^(-1)处理24 h后,PC12细胞存活率显著降低(P<0.05,P<0.01),细胞外液LDH含量升高(P<0.05,P<0.01)。AO/EB染色结果显示,随着Pb(Ac)_(2)浓度的提高,PC12细胞颜色逐渐加深为橙红色,出现明显的凋亡现象;与细胞对照组相比,PC12细胞凋亡率随Pb(Ac)_(2)浓度的提高而显著增加(P<0.01),PC12细胞内自噬体数量增加(P<0.01)。免疫荧光结果显示,Pb(Ac)_(2)暴露后,PC12细胞胞质内Beclin1呈现大量点状聚集且荧光强度加强,表明细胞发生了自噬。Western印迹法结果显示,与细胞对照组相比,Pb(Ac)_(2)各浓度组Sirt1,FoxO3a和Beclin1蛋白表达水平及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著增加(P<0.05,P<0.01),FoxM1和P62蛋白表达水平显著下降(P<0.05,P<0.01)。结论Pb(Ac)_(2)暴露可诱导PC12细胞发生凋亡与自噬,其机制可能与Sirt1/FoxO3a信号通路激活有关。
- 张谊张谊陈月芳陈月芳李永金
- 关键词：醋酸铅PC12细胞细胞凋亡
