黄珂 作品数:6 被引量:11 H指数:2 供职机构: 第三军医大学新桥医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
超抗原SEB对角质形成细胞糖皮质激素受体的作用研究 被引量:1 2016年 目的探讨超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)对人永生化角质形成细胞(Ha Ca T细胞)糖皮质激素受体表达及核转移的影响。方法采用不同浓度SEB作用于体外培养的Ha Ca T细胞,RT-PCR、Western blot分别检测Ha Ca T细胞糖皮质激素受体α、β(GRα、GRβ)m RNA、蛋白的表达;随后用SEB预处理Ha Ca T细胞,地塞米松再作用Ha Ca T细胞8 h后,免疫荧光法检测Ha Ca T细胞GRα细胞内分布情况。结果 SEB作用Ha Ca T细胞后,其GRαm RNA、蛋白表达无明显变化,GRβm RNA、蛋白表达随SEB的浓度增高呈上升趋势,且在SEB质量浓度为100 ng/ml时达到最高值。10-6mol/L地塞米松作用8 h后能够诱导Ha Ca T细胞GRα由胞浆向胞核转移,该效应能够维持到24 h。与地塞米松组Ha Ca T细胞内GRα分布出现向核内转移现象不同,地塞米松+SEB组部分细胞GRα分布仍局限于胞质,并未出现核转移现象。结论 SEB可能通过诱导角质形成细胞GRβ表达上调及抑制地塞米松诱导的GRα由胞浆向胞核转移参与炎症性皮肤病外用糖皮质激素抵抗。 王为 黄珂 冉磊 刘莲 王玉娟 李元朝 何威 王儒鹏关键词:超抗原 SEB 糖皮质激素受体 糖皮质激素抵抗 细菌超抗原SEB抑制小鼠角质形成细胞糖皮质激素受体核转移的实验研究 被引量:3 2016年 目的探讨金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)对小鼠角质形成细胞糖皮质激素受体GRα核转移的影响。方法 1%二硝基氯苯重复刺激Balb/c小鼠背部皮肤构建变应性接触性皮炎动物模型,分别用SEB、地塞米松、SEB+地塞米松处理该模型鼠背部局部皮肤,处理48 h后HE染色计数真皮内炎性细胞数量,免疫荧光和Western blot法观察GRα在各组角质形成细胞的胞浆和核浆分布,ELISA法观察IL-2、4、13和TNF-α等炎症因子在各组的表达变化。结果 SEB处理后真皮内炎性细胞显著增加。地塞米松可显著减少炎性细胞数目,而SEB可部分拮抗地塞米松的抗炎作用;激光共聚焦显示正常角质形成细胞GRα主要存在于细胞浆,少量存在于胞核。地塞米松可显著增加GRα核/浆阳性比值,而SEB可显著减弱地塞米松诱导的GRα核/浆阳性比值;Western blot检测也显示地塞米松处理后GRα蛋白入核量显著增多,而SEB可显著抑制地塞米松诱导的GRα蛋白入核量,并增加GRα蛋白胞浆滞留;与正常组相比,皮炎组IL-2、4、13和TNF-α表达均显著升高,地塞米松可显著抑制各炎症因子增多,而SEB可显著拮抗地塞米松对炎性因子的抑制作用。结论 SEB在局部皮炎诱导的激素减敏与其抑制角质形成细胞GRα核转移障碍有关。 黄珂 冉磊 王为 刘莲 王玉娟 李冉 李元朝 王儒鹏关键词:SEB 糖皮质激素受体Α 人角质形成细胞外泌体辅助超抗原SEB诱导淋巴细胞增殖 2017年 目的分离人角质形成细胞外泌体,探究负载细菌超抗原后人角质形成细胞分泌的外泌体诱导静息CD4^+、CD8^+T淋巴细胞增殖的作用。方法多步超速离心法分离体外培养的人永生化角质形成细胞外泌体(HaCaT cell exosomes,HaCaT-Exo),透射电子显微镜观察HaCaT-Exo的形态结构,Western blot检测HaCaT-Exo的标志蛋白CD63以及免疫相关分子MHCⅡ的表达,流式细胞术检测负载细菌超抗原后HaCaT分泌的外泌体诱导静息CD4^+、CD8^+T淋巴细胞增殖情况。结果提取的HaCaT-Exo符合外泌体特性并表达标志蛋白CD63;经IFN-γ刺激后HaCaT-Exo可以表达MHCⅡ分子,负载细菌超抗原SEB的HaCaT-Exo以及单独HaCaT-Exo均不能诱导淋巴细胞增殖,但经IFN-γ刺激后负载SEB的HaCaT-Exo可以诱导静息CD4^+、CD8^+T淋巴细胞增殖(P<0.05)。结论经IFN-γ刺激后人角质形成细胞外泌体可表达MHCⅡ分子,并且负载细菌超抗原SEB后其分泌的外泌体具有诱导静息CD4^+、CD8^+T淋巴细胞增殖能力,这提示外泌体可能是角质形成细胞参与细菌超抗原相关免疫反应的新机制。 蔡小薇 诸蓉 李漪倩 黄珂 冉磊 何威 王儒鹏关键词:外泌体 角质形成细胞 细菌超抗原SEB对皮炎局部糖皮质激素受体β表达的影响 被引量:5 2015年 目的探讨金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)对于皮炎局部糖皮质激素受体β(GRβ)的影响。方法 1%DNCB重复刺激Balb/c小鼠背部皮肤构建特应性皮炎动物模型,以未经处理的模型小鼠为对照组,并分别用SEB、SEB+地塞米松、地塞米松处理该动物模型。通过H&E染色观察组织病理变化,计数真皮内炎性细胞数量来反映不同处理组皮炎的变化情况,采用q RT-PCR、Western blot和免疫组织化学方法检测糖皮质激素受体β(GRβ)的m RNA和蛋白表达。结果在利用DNCB构建的Balb/c小鼠特应性皮炎动物模型中,真皮内炎性细胞数量明显增加;与未经处理的皮炎组相比,SEB处理后炎性细胞显著增加,地塞米松处理后炎性细胞显著减少,但SEB可部分拮抗地塞米松的抗炎作用;此外,在SEB处理的皮炎组以及SEB+地塞米松处理的皮炎组,GRβm RNA和蛋白的表达均显著上调,但SEB单独处理的皮炎组GRβm RNA和蛋白的表达上调情况更为显著。结论细菌超抗原(SEB)在皮炎局部诱导了GRβ的表达升高,在外用糖皮质激素快速减敏过程中起到了重要的作用。 冉磊 何威 李昕 黄珂 王为 李冉 王儒鹏关键词:糖皮质激素 SEB 糖皮质激素受体Β 卤米松与他扎罗汀对角质形成细胞RAR-γ和RXR-α表达的影响 被引量:2 2016年 目的观察不同浓度卤米松和他扎罗汀对体外培养人永生化HaCaT角质形成细胞的维甲酸受体(RAR)-γ和维甲酸X受体(RXR)-α表达的影响,探讨卤米松对他扎罗汀治疗银屑病效应的潜在影响。方法 CCK-8方法检测不同浓度卤米松和他扎罗汀对HaCaT细胞增殖的影响;Western blot法和实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测不同浓度卤米松和他扎罗汀作用12h、24h后,HaCaT细胞中RAR-γ和RXR-α的mRNA水平和蛋白水平的变化。结果卤米松和他扎罗汀均可抑制角质形成细胞增殖。卤米松使HaCaT细胞的RAR-γ和RXR-αmRNA水平和蛋白水平升高。他扎罗汀作用后RAR-γ和RXR-α的mRNA水平降低,而蛋白水平在12h升高,24h降低。结论卤米松作用角质形成细胞后可上调RAR-γ和RXR-α表达,这可能有助于提高角质形成细胞对他扎罗汀作用的反应性,从而提高他扎罗汀的作用效应。 王玉娟 张斌 何威 王儒鹏 周春丽 刘莲 王为 黄珂关键词:银屑病 卤米松 他扎罗汀 HACAT细胞 V_γ4^+γδT细胞清除可缓解咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样皮炎 被引量:1 2017年 目的观察V_γ4^+γδT细胞在咪喹莫特乳膏诱导的Balb/c小鼠银屑病模型中的作用。方法雌性8周龄Balb/c小鼠随机分为野生型组和V_γ4清除型组。咪喹莫特乳膏诱导银屑病模型后,采用PASI评分标准分别评判2组小鼠银屑病模型皮损的严重程度,HE染色观察皮损组织形态学改变,流式细胞仪分别检测2组小鼠正常及炎症时真皮组织中V_γ4T细胞的比例,Western blot检测2组小鼠正常及炎症时真皮组织蛋白IL-17、IL-23、IL-1β的表达水平。结果连续6 d涂抹0.5%咪喹莫特乳膏后,野生型组小鼠背部脱毛区域出现红斑、鳞屑、斑块的典型银屑病样皮损比V_γ4清除型组小鼠严重。流式细胞仪检测到野生型组正常小鼠真皮细胞内在少量的V_γ4T细胞,炎症时该细胞数量增多,V_γ4清除型组正常及炎症小鼠均无V_γ4T细胞表达。同时Western blot检测到V_γ4清除组小鼠真皮组织蛋白IL-17、IL-23、IL-1β炎性因子的表达水平也低于野生型组。结论清除小鼠体内V_γ4T细胞后,咪喹莫特诱导的银屑病样皮炎减轻,同时IL-17、IL-23、IL-1β3种炎性因子的蛋白表达水平均降低。 诸蓉 蔡小薇 李漪倩 黄珂 冉磊 贺伟峰 何威 王儒鹏关键词:咪喹莫特