韩润林
- 作品数：16 被引量：20H指数：3
- 供职机构：内蒙古农业大学兽医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金内蒙古自治区自然科学基金博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 铜绿假单胞菌表面(氧化)低密度脂蛋白配体的研究
- 2019年
- 【背景】研究发现铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)与(氧化)低密度脂蛋白(Low density lipoprotein,LDL/oxidized low density lipoprotein,ox LDL)具有特异性相互作用,有报道证实P. aeruginosa表达的Rah U蛋白可以与LDL/ox LDL特异性结合。【目的】验证Rah U蛋白是否是P.aeruginosa表面主要的LDL/ox LDL配体。【方法】大肠杆菌表达Rah U蛋白(r Rah U),ELISA验证r Rah U与LDL/ox LDL的相互作用。利用同源重组的方法构建RahU基因缺失突变株(ΔRahU菌株)作为阴性对照菌株,制备小鼠抗r Rah U抗体,经WesternBlot及ELISA分别检测抗r Rah U抗体与P.aeruginosa野生型菌株膜蛋白中RahU蛋白及菌体表面RahU蛋白的结合。通过ELISA方法对P. aeruginosa野生型菌株及ΔRahU菌株与LDL/ox LDL的结合差异进行比较,并对不同蛋白酶水解ΔRahU菌体表面蛋白后ΔRahU菌株与LDL/ox LDL结合能力的差异进行比较。【结果】经ELISA验证rRahU与LDL/oxLDL存在特异性结合。Western Blot及ELISA方法证实小鼠抗rRahU抗体可以与P. aeruginosa野生型菌株膜蛋白中RahU蛋白及菌体表面RahU蛋白特异性结合,而不与ΔRahU菌株相互作用。P.aeruginosa野生型菌株及ΔRahU菌株与LDL/oxLDL结合能力无显著差异,且蛋白酶水解后ΔRahU菌株与LDL/oxLDL的结合能力相近。【结论】RahU蛋白是P. aeruginosa表面的LDL/oxLDL配体之一,但不是唯一的配体。
- 李雨欣李雨欣杨金丽刘治
- 关键词：铜绿假单胞菌配体
- PGD_(2)/DP_(1)途径对细菌感染奶牛子宫内膜组织中HMGB-1和PAFR表达的影响被引量：1
- 2021年
- 为了研究前列腺素D2(prostaglandin D2,PGD2)/DP1受体途径对大肠杆菌(Escherichia coli)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)感染奶牛子宫内膜组织中炎症介质HMGB-1和PAFR的表达及对组织损伤程度的影响,试验以体外培养奶牛子宫内膜组织为研究对象,应用1×10-6 mol/L DP1受体激动剂(BW-245C和15d-PGJ2)和等量(1×106 CFU/mL)大肠杆菌、金黄色葡萄球菌共同处理奶牛子宫内膜组织,采用实时荧光定量PCR、免疫组化和HE染色法检测奶牛子宫内膜组织中HMGB-1和PAFR的表达并评价组织损伤情况。结果显示,与空白对照组相比,大肠杆菌和金黄色葡萄球菌感染奶牛子宫内膜组织中HMGB-1和PAFR表达量显著升高(P<0.05),而DP1受体激动剂与大肠杆菌和金黄色葡萄球菌共处理奶牛子宫内膜组织中DP1受体激动剂显著抑制奶牛子宫组织中HMGB-1和PAFR的表达(P<0.05)。HE染色结果显示,大肠杆菌与金黄色葡萄球菌感染的奶牛子宫内膜组织上皮细胞和腺上皮细胞完全脱落、坏死、崩解;而DP1受体激动剂、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌共同处理奶牛子宫内膜组织中,DP1受体激动剂的加入显著减轻奶牛子宫内膜组织的损伤程度(P<0.05)。免疫组化染色法结果与以上两种方法结果一致。结果表明,PGD2能够抑制大肠杆菌与金黄色葡萄球菌感染的奶牛子宫内膜组织中损伤相关因子HMGB-1、PAFR的表达,减轻组织损伤程度,这一作用可能是由DP1受体所介导的。
- 杨效林韩润林毛伟包海霞刘昆吴金迪曹金山曹金山
- 关键词：HMGB-1
- 重组金黄色葡萄球菌次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶与脂蛋白(a)的相互作用被引量：3
- 2011年
- 次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶(IMPDH)是金黄色葡萄球菌(S.aureus)表面的纤溶酶原(Plg)受体之一,它可以通过赖氨酸结合位点(LBS)与Plg相结合。脂蛋白(a)[Lp(a)]中的载脂蛋白(a)[Apo(a)]与Plg有很高的同源性,即两者的Kringle结构域都含有LBS,其中Apo(a)的KIV10含有强的LBS。因此本实验提出了Lp(a)应该能够与S.aureus表面的Plg受体相结合,进而可能竞争性抑制S.aureus与Plg结合的假说。本研究克隆了S.aureus的IMPDH基因,酶切后将其连接到表达载体pASK-IBA37中,并在大肠杆菌BL21中表达了该重组蛋白(rIMPDH)。通过酶联免疫吸附试验(ELISA)、亲和色谱层析及Western blot对rIMPDH与Lp(a)的相互作用机制进行了研究。结果表明rIMPDH可以通过LBS与Lp(a)和rKIV10发生特异性结合,而且一定浓度的赖氨酸类似物6-氨基己酸(EACA)可以抑制这种结合,然而本研究并未发现Lp(a)和rKIV10对rIMPDH与Plg的相互作用有明显的抑制。
- 许颖纪智星韩润林
- 关键词：金黄色葡萄球菌纤溶酶原
- 重组不可分型流感嗜血杆菌E蛋白与血浆脂蛋白(a)的相互作用
- 2017年
- 目的:E蛋白(Protein E,PE)是不可分型流感嗜血杆菌(Nontypeable Haemophilus influenza,NTHi)表面的一种纤溶酶原(plasminogen,Plg)受体,其C末端含有两个赖氨酸残基。NTHi可通过其表面的PE与Plg结合,从而利用机体的纤溶系统深层入侵宿主。基于脂蛋白(a)[Lipoprotein(a),Lp(a)]中载脂蛋白(a)[Apolipoprotein(a),Apo(a)]与Plg高度的同源性,拟证明Lp(a)是否会与重组表达的PE(r PE)结合。方法:原核表达并纯化r PE及敲除C末端两个赖氨酸残基的r PEΔKK,密度梯度离心结合阴离子交换层析分离人血浆Lp(a),通过ELISA、Pull down、Western blot等方法研究r PE与Lp(a)的相互作用。结果:r PE与Lp(a)结合,但不与LDL结合,且r PEΔKK与Lp(a)的结合能力明显低于r PE;赖氨酸类似物6-氨基乙酸(EACA)能有效抑制r PE与Lp(a)的结合;Lp(a)对r PE与Plg的结合具有微弱的抑制作用。结论:r PE能够与Lp(a)结合,其中r PE的C末端赖氨酸残基和Apo(a)的赖氨酸结合位点(lysine binding sites,LBS)是r PE与Lp(a)结合的主要位点。
- 王瑜刘治刘治白文成韩润林
- 关键词：不可分型流感嗜血杆菌PE纤溶酶原
- 链球菌表面烯醇化酶重组蛋白多克隆抗体的制备
- 2012年
- 制备M6型GAS表面烯醇化酶抗体。皮下多点注射GAS表面烯醇化酶重组蛋白(rSEN)免疫家兔,采用亲和层析纯化免疫血清,通过SDS-PAGE、ELISA、Western-Blot等方法检测抗体的特异性,并初步用制备的抗体检测了M6血清型GAS表面烯醇化酶的表达。制备的抗体蛋白纯度较高,检测的特异性较强,用制备的抗体可以检测到活体菌表面的烯醇化酶。成功制备并纯化得到了GAS表面烯醇化酶多克隆抗体。
- 许丽萍白文成刘杨韩润林
- 关键词：A群链球菌多克隆抗体
- A群链球菌利用人纤溶酶原的机制被引量：4
- 2010年
- A群链球菌是一种常见的人类致病菌,可以引起人类的化脓性感染和非化脓性后遗症。A群链球菌能表达或分泌多种毒力因子参与其致病性。大量文献报道,纤溶酶原也是A群链球菌侵入机体的重要因子,A群链球菌通过其纤溶酶原受体能与纤溶酶原特异性结合,从而使与A群链球菌结合的纤溶酶原更易被激活为纤溶酶。纤溶酶能降解宿主的细胞外基质和基底膜,有利于A群链球菌在人体内的扩散。本文就A群链球菌如何激活并利用人纤溶酶原的机制进行了综述。
- 许丽萍李培峰韩润林
- 关键词：A群链球菌纤溶酶原受体
- 多聚赖氨酸结合脂蛋白(a)检测方法的初步确立及其对急性心肌梗死的实验诊断价值被引量：1
- 2011年
- 目的初步建立检测功能性脂蛋白(a)质量的检测方法,分析该方法的精密度、准确度和干扰因素。方法利用该方法测定急性心肌梗死和不稳定型心绞痛患者冠状动脉造影确诊时即支架术术前和术后4 h、8 h、12h、24 h、48 h、72 h、4～9天、10～12天各个时间点与多聚赖氨酸结合的脂蛋白(a)的质量,并用直接酶联免疫吸附试验和免疫比浊试验检测急性心肌梗死和不稳定型心绞痛患者的脂蛋白(a)的总质量,比较检测二者的诊断价值,并将该方法与传统心肌标志物肌酸激酶同工酶进行比较,评价其诊断和监测心血管疾病的价值。结果酶联免疫吸附试验和免疫比浊试验检测的心血管患者的脂蛋白(a)质量变化不大(P>0.05);与多聚赖氨酸结合的脂蛋白(a)的吸光度值明显增高(P<0.05);该方法的精密度和准确度都很高(>90%),诊断价值优于肌酸激酶同工酶。结论传统检测脂蛋白(a)的方法不能解释其与心血管疾病的关系;自建的检测与多聚赖氨酸结合的脂蛋白(a)的方法与心血管疾病状态一致,该方法的可行性高,并且也能进一步研究功能性脂蛋白(a)的生理病理功能。
- 张金红刘爱兵韩润林刘晓军程志英
- 关键词：多聚赖氨酸急性心肌梗死
- 纤溶酶原在金黄色葡萄球菌感染中的作用被引量：7
- 2010年
- 金黄色葡萄球菌菌体表面有多种纤溶酶原受体,包括次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶、核糖核苷酸还原酶、α-烯醇化酶和3-磷酸甘油醛脱氢酶等,它们均可以与纤溶酶原结合。与细菌结合的纤溶酶原可被宿主的纤溶酶原激活剂(组织型纤溶酶原激活剂和尿激酶型纤溶酶原激活剂)或葡萄菌属的纤溶酶原激活剂(葡激酶)激活为纤溶酶。细菌表面的纤溶酶有利于其降解宿主胞外基质,穿越组织屏障,因此哺乳动物的纤溶酶原可能在金黄色葡萄球菌感染宿主过程中起重要作用。
- 纪智星韩润林
- 关键词：金黄色葡萄球菌纤溶酶原纤溶酶受体
- 铜绿假单胞菌二氢硫辛酸酰胺脱氢酶的重组表达及其与脂蛋白(a)的相互作用被引量：1
- 2017年
- 【目的】二氢硫辛酸酰胺脱氢酶(Dihydrolipoamide dehydrogenase,Lpd)是铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)表面的一种纤溶酶原(Plasminogen,Plg)受体,旨在研究Lpd与脂蛋白(a)[Lipoprotein(a),Lp(a)]以及Plg之间的相互作用。【方法】用大肠杆菌表达rLpd及其突变分子(rLpd K476A、rLpd K477A、rLpdΔKKR),用酶联免疫吸附实验(ELISA)、亲和色谱层析及Western blot等技术检测rLpd及其突变分子与Lp(a)、Plg的相互作用。【结果】ELISA及亲和色谱层析实验结果表明,rLpd可以与Lp(a)结合但不与LDL结合,Lp(a)与rLpdΔKKR的结合能力显著低于其与rLpd的结合能力。1 mmol/L的赖氨酸类似物6-氨基己酸(EACA)对rLpd与Lp(a)的结合有显著的抑制作用。1 000μg/L的Lp(a)对rLpd与Plg的结合起到显著的抑制作用。【结论】Lpd能够与Lp(a)特异性结合,其476和477两个相邻的赖氨酸残基是与Lp(a)结合的主要位点,Lp(a)可以竞争性地抑制rLpd与Plg的结合。
- 王洋李文龙刘恩王瑜霍苏馨白文成高玉敏韩润林
- 关键词：铜绿假单胞菌纤溶酶原
- 流感嗜血杆菌表面天冬氨酸酶和其突变体蛋白的表达纯化及酶活性测定
- 2015年
- 目的表达纯化不可分型流感嗜血杆菌表面天冬氨酸酶(r ASP)和其敲除羧基末端赖氨酸的重组蛋白(r ASPΔK)。方法克隆了不可分型流感嗜血杆菌ATCC49247的ASP基因和ASPΔK基因,与载体连接后,转入大肠杆菌表达蛋白,并用Co2+亲和柱层析纯化蛋白;采用酶促反应测定纯化蛋白的酶活性。结果两种基因的克隆和表达质粒构建成功,目的蛋白表达量大且具有较高的酶活性。结论成功表达纯化了r ASP和r ASPΔK蛋白。
- 许丽萍李文龙贾红梅孙虹韩润林
- 关键词：不可分型流感嗜血杆菌天冬氨酸酶表达纯化酶活性
