周志超
- 作品数：12 被引量：9H指数：2
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 1型登革病毒抗原表位嵌合人3型腺病毒六邻体重组病毒的构建及免疫学鉴定被引量：1
- 2015年
- 目的构建六邻体嵌入1型登革病毒（DENVI）抗坂表位的人3型重组腺病毒，鉴定其抗原性。方法以人3型腺病毒骨架质粒pBRAd△E3GFP为模板，overlap PCR在六邻体高变区HVR1插入DENV1的抗原表位，突变的六邻体片段克隆到穿梭载体，酶切后与线性化的3型腺病毒骨架质粒pBRAd△E3GFP在大肠杆菌BJ5183同源重组，获得阳性重组腺病毒质粒pBRAd△E3GFP-DENV1。线性化后转染AD293细胞拯救重组腺病毒rAd△E3GFP-DENV1并大量培养。纯化后腺病毒免疫BALB／c小鼠，通过ELISA和Western blot检测小鼠的体液免疫应答。结果在人3型腺病毒六邻体成功插入DENV1抗坂表位并包装出重组腺病毒，ELISA和Westernblot结果显示小鼠免疫后能产生血清识别DENV1。结论成功构建六邻体HVR1嵌入DENV1抗原表位的重组腺病毒，为多价登革病毒疫苗的研究奠定了基础。
- 招穗珊周志超李潇樊晔廖小红周荣苏晓波
- 关键词：腺病毒高变区登革病毒抗原表位
- 三种不同腺病毒基因组提取方法对全基因组克隆构建的影响分析被引量：1
- 2016年
- 目的 建立一种简单、快速、有效、纯度高的人腺病毒全基因组提取的方法 。方法 用60 mm细胞培养皿培养A549或AD293细胞,接种培养人7型腺病毒（HAdV-7）CQ1198株,收集病毒感染的细胞,分别用Hirt＇s改良法、试剂盒A和试剂B提取HAdV-7-CQ1198病毒株全基因组,提取的基因组进行限制性内切酶酶切实验、细菌内同源重组实验和转染细胞拯救病毒实验。结果 几种方法都成功获得高质量的腺病毒全基因组,可以用于PCR、测序、酶切、同源重组和转染实验;两种试剂盒方法较传统的Hirt＇s改良法更快,不需要特别步骤去除细胞基因组,可以在1h内完成基因组提取。其中,试剂盒A提取的病毒基因组量最多（20-50μg）,RNA含量最少,不需要另外加入核糖核酸酶（RNase）,而Hirt＇s改良法需要在裂解液中或最终产物中加入RNase以去除细胞RNA成分。结论 试剂盒A和试剂盒B均可替代传统Hirt＇s提取方法用于快速提取高质量腺病毒基因组,提取的基因组能用于酶切分型、转染等实验操作。
- 李潇周荣马强蒋再学周志超廖小红田新贵
- 关键词：腺病毒酶切分析病毒感染
- 运用表位嵌合型3型腺病毒载体制备肠道病毒71型单克隆抗体被引量：2
- 2016年
- 目的制备针对肠道病毒71型(EV71)的单克隆抗体(m Ab)。方法将六邻体中同时嵌入EV71 SP55与SP70两个中和表位的重组人3型腺病毒作为免疫原免疫小鼠,利用杂交瘤技术制备m Ab。用病毒微量中和实验、间接ELISA、Western blot法和直接免疫荧光染色法进行鉴定。结果获得了4株分泌EV71特异性m Ab的杂交瘤细胞,D2C9、2C4、I2G2、I12C3,其中D2C9株腹水间接ELISA实验效价为1∶8 000 000,其余3株为1∶500 000;Western blot法和ELISA结果表明4株m Ab均识别EV71病毒VP1蛋白。D2C9针对SP70表位,2C4、I12C3、I2G2针对SP55表位;直接免疫荧光实验结果显示4株m Ab均能与EV71特异性结合,而与柯萨奇病毒16型(Cox A16)不结合。结论获得了对EV71亲和力高、特异性好并且与Cox A16无交叉反应的m Ab。
- 樊晔田新贵薛春燕刘铭龙周志超李潇李晨阳周荣
- 关键词：肠道病毒71型单克隆抗体中和表位
- 人博卡病毒1型主要抗原NS1、NP1及VP1/2的抗体制备及应用
- 2017年
- 人博卡病毒1型(human bocavirus 1,HBoV1)是全球流行的重要呼吸道病毒,其研究尚处于初期阶段。通过原核表达的方式对HBoV1主要抗原NS1、NP1、VP1/2进行蛋白表达,通过纯化、免疫小鼠成功获得3种蛋白的抗体血清,通过ELISA评价了抗体对相应蛋白抗原及临床HBoV1阳性样品的效价,并将所制备的抗体成功用于HBoV1广州株GU338055反向遗传系统的NS1、NP1、VP1/2的免疫荧光研究。结果表明,所制备抗体在1∶50稀释度时A_(450)值对阴性对照约有4倍提升,为HBoV1后续深入研究提供了重要工具,具有重要意义。
- 刘文宽游爱萍许多邱淑燕周志超李炽周荣
- 关键词：NS1NP1抗体免疫荧光
- 荧光素酶标记的重组人3型腺病毒的构建及分析
- 2020年
- 人3型腺病毒在人DSG2受体转基因鼠体内复制及侵染等生命过程尚不清楚。本研究旨在构建含萤火虫荧光素酶(Firefly luciferase,Fluc)报告基因的复制型重组人3型腺病毒,为可视化重组人3型腺病毒的应用奠定基础。通过PCR扩增萤火虫荧光素酶报告基因,克隆入去掉EGFP基因的人3型腺病毒穿梭质粒pSKA3E3LR(EGFP),经双酶切后与人3型腺病毒骨架质粒pBRAd3-EGFP的PCR扩增片段经重组酶Exnase体外重组的方法,得到中间载体,最后与pBRAd3-EGFP酶切片段连接,得到重组腺病毒质粒pAd3-LUC;转染AD293细胞,将包装成功的重组腺病毒rAd3-LUC纯化并免疫动物,分析重组腺病毒的特性和在小鼠体内的免疫反应。结果显示采用体外重组、酶切连接等方法成功获得到重组人3型腺病毒质粒pAd3-LUC,线性化的pAd3-LUC转染AD293细胞包装拯救得到重组腺病毒rAd3-LUC,观察到细胞病变和检测到荧光素酶的稳定表达,rAd3-LUC免疫小鼠抗血清可以识别并中和重组腺病毒rAd3-LUC(滴度约128~256)。本研究成功构建了E3区缺失并嵌入荧光素酶的复制型重组人3型腺病毒rAd3-LUC,为监控人3型腺病毒在人DSG2受体转基因小鼠体内复制及侵染等生命过程奠定基础。
- 陈诗颖周志超田新贵周荣
- 关键词：报告基因免疫反应
- 树鼩感染相关细胞因子荧光定量PCR检测方法的建立
- 2019年
- 树鼩是一种新型的优质实验动物模型。本研究针对树鼩感染相关的细胞因子白介素6(IL-6)、IL-8、IL-10、IL-17A、γ-干扰素(IFN-γ)及管家基因磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)建立荧光定量聚合酶链式反应检测方法。研究证明所建立方法具有良好的特异性。线性范围高点可达到1×1010copies,低点则至10copies(IL-6、IL-17A)、100copies(IL-10、GAPDH)和1000copies(IL-8、IFN-γ)不等,在此区间各试剂线性相关系数R2均大于0.99。IL-6、IL-8、IL-10、IL-17A、IFN-γ和GAPDH最低检测值分别在8、8、4、8、128、4copies。研究表明所建立的检测方法具有很好的特异性、灵敏度及较广的线性范围,适用于多重浓度范围的样品检测,可用于后续树鼩细胞因子的研究工作。
- 李潇刘文宽邱淑燕许多周志超田新贵李炽辜淑君周荣
- 关键词：树鼩细胞因子荧光定量聚合酶链式反应
- 人3型腺病毒六邻体高变区氨基酸修饰限制及其应用基础研究
- 目的： 构建人3型腺病毒六邻体高变区HVR1,HVR2,HVR5,HVR7上多组不同的氨基酸修饰嵌合重组体，探讨六邻体高变区的氨基酸修饰限制，据此应用到六邻体HVR1和HVR2同时嵌合表达乙肝病毒表面抗原preS1上两...
- 周志超
- 关键词：PRES1抗原
- 文献传递
- 三种常见人呼吸道腺病毒六邻体蛋白的克隆、表达及抗原性分析被引量：3
- 2014年
- 目的：克隆、表达常见的人呼吸道腺病毒的主要中和抗原六邻体蛋白，分析重组表达产物的抗原性和免疫原性。方法分别PCR扩增克隆人3型、4型、7型腺病毒完整的六邻体蛋白基因，测序和序列比对并与GenBank上人腺病毒的六邻体蛋白进行同源性比对；对其主要的抗原区进行克隆、表达和纯化，表达产物免疫动物，ELISA和Western blot实验对表达产物的抗原性和免疫原性及其交叉反应进行分析。结果国内首次报道1株人4型腺病毒的六邻体基因序列，与GenBank中的NHRC3分离株核酸及氨基酸的同源性均大于99％；3种腺病毒包含全部高变区的六邻体部分区段在大肠杆菌中成功表达并纯化，重组蛋白可以被不同型别的人腺病毒免疫血清识别，重组蛋白免疫小鼠血清可以识别不同型别的人腺病毒，而型间反应有显著差异，预测了3种腺病毒六邻体型、型间特异性表位。结论成功表达人3型、4型、7型腺病毒六邻体蛋白主要抗原区，重组表达产物有强免疫原性，包含型间、型特异性抗原表位。
- 田新贵周荣薛春燕李潇周志超
- 关键词：免疫原性表位
- 人3型、7型腺病毒的中和抗原表位及其应用
- 本发明公开了一种人腺病毒的三个中和抗原表位及其相关应用。本发明的人3型、7型腺病毒的中和抗原表位的氨基酸序列选自如SEQ ID NO：1、2、3所示的氨基酸序列，其核苷酸序列选自如SEQ ID NO：4、5、6所示的核苷...
- 周荣邱红玲周志超李潇苏晓波高文娟钟南山
- 文献传递
- 中缅树鼩自然感染五种高致病性人腺病毒的血清流行病学分析被引量：1
- 2018年
- 目的分析中缅树鼩(Tupaiabelangeri,Tree Shrew)自然感染5种高致病性人腺病毒(Human Adenovirus,HAdv)的血清流行病学,以探讨人腺病毒感染树鼩的可能性。方法采用固定病毒稀释血清法测定34份树鼩血清对Ad3、Ad4、Ad7、Ad14和Ad55的中和抗体水平。结果 4种B组腺病毒的中和抗体阳性率及中和效价较E组4型的大,阳性率由大到小依次为:Ad14(55.88%)、Ad3(47.06%)、Ad55(29.71%)、Ad7(14.71%)、Ad4(8.82%),树鼩血清主要表现为Ad3、Ad14和Ad55混合型多价抗血清。结论中缅树鼩可自然感染5种人腺病毒,有望以树鼩为实验动物,建立一种成熟的人腺病毒感染模型。
- 李潇周志超田新贵廖嘉仪樊晔
- 关键词：中缅树鼩自然感染人腺病毒血清流行病学
